逆轉(zhuǎn)座子是一段反向的轉(zhuǎn)錄酶介導(dǎo)的核酸重復(fù)序列,常見于多細(xì)胞生物中,并且在基因組進(jìn)化中起了很重要的作用。其中一種長散在的重復(fù)的核酸序列（LINEs）在脊椎動(dòng)物基因組中很常見,在基因組中的進(jìn)化可以追溯到6億年前。它在人類基因組中占21%,在斑馬魚基因組中占10%以上。LINE1（L1）一般包含兩個(gè)主要的開放閱讀框:ORF1和ORF2,其中ORF1編碼核酸結(jié)合蛋白,ORF2編碼了一種重要的酶,在形成逆轉(zhuǎn)座核酸蛋白復(fù)合物的時(shí)候起到逆轉(zhuǎn)錄酶和核酸內(nèi)切酶的作用。LINE1的擴(kuò)增通過“復(fù)制和粘貼”的方式,包括了幾個(gè)主要的過程:轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞質(zhì)、翻譯、形成核酸蛋白復(fù)合體,返回至細(xì)胞核內(nèi)、靶位點(diǎn)逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座和插入新的位點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)室前期對(duì)鱗頭犬牙南極魚（Dissostichus mawsoni）進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測序,通過對(duì)測序結(jié)果的分析發(fā)現(xiàn),多個(gè)逆轉(zhuǎn)座子表達(dá)量顯著性升高。我們分析得到一條完整且具有生物學(xué)活性的轉(zhuǎn)座子序列并命名為Dissostichus mawsoni LINE1（dmL1）,猜測這個(gè)轉(zhuǎn)座子可能與魚類低溫適應(yīng)有關(guān)系。為了探究LINE1與低溫適應(yīng)的關(guān)系,我們首先構(gòu)建了含有人類human-L1（hm... 

【文章來源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1.1 逆轉(zhuǎn)座子的研究進(jìn)展
        1.1.1 轉(zhuǎn)座子的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 DNA轉(zhuǎn)座子家族
        1.1.3 發(fā)現(xiàn)歷程
    1.2 逆轉(zhuǎn)座子的分類
        1.2.1 LTR逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子
        1.2.2 Non-LTR逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子
    1.3人類LINE1
        1.3.1 LINE1基因結(jié)構(gòu)
        1.3.2 LINE1三維結(jié)構(gòu)
    1.4 不同物種之間LINE結(jié)構(gòu)關(guān)系比較
    1.5 LINE1與環(huán)境之間的關(guān)系
    1.6 低溫對(duì)機(jī)體的影響
        1.6.1 寒冷環(huán)境,能影響能源相關(guān)的代謝特征
        1.6.2 寒冷對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)
        1.6.3 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和產(chǎn)生ROS
        1.6.4 機(jī)體對(duì)低溫壓力的應(yīng)對(duì)反應(yīng)
    1.7 低溫下LINE1逆轉(zhuǎn)座與細(xì)胞低溫適應(yīng)研究
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)所需儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)所需試劑
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)所需試劑和藥品
        2.2.2 各種緩沖試劑的配制方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)及載體的轉(zhuǎn)染
        2.3.2 斑馬魚低溫處理實(shí)驗(yàn)
        2.3.3 在mRNA和DNA水平檢測LINE1的表達(dá)量
        2.3.4 westernblot分析LINE1蛋白的表達(dá)
        2.3.5 免疫熒光分析LINE1的表達(dá)位置和γH2AX,G3BP1染色
        2.3.6 低溫下細(xì)胞內(nèi)ROS水平檢測及清除
        2.3.7 數(shù)據(jù)處理與分析
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 進(jìn)化樹分析不同物種間的LINE親緣關(guān)系
    3.2 LINE1在Hela細(xì)胞中的表達(dá)與轉(zhuǎn)錄組分析
        3.2.1 LINE1在Hela細(xì)胞中的表達(dá)
        3.2.2 LINE1在Hela細(xì)胞中的表達(dá)的轉(zhuǎn)錄組分析
    3.3 低溫可以提高L1在Hela細(xì)胞中的逆轉(zhuǎn)座活性
    3.4 活性氧ROS增強(qiáng)L1逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座
        3.4.1 H_2O_2可以增強(qiáng)L1的逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座活性
        3.4.2 抗氧化劑(NAC)可以降低LI的逆轉(zhuǎn)座活性
    3.5 ROS通過破壞細(xì)胞基因組DNA鏈,提高L1的逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座
    3.6 dmL1的逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座提高Hela細(xì)胞對(duì)低溫的耐受性
        3.6.1 dmL1的逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座降低Hela細(xì)胞中活性氧ROS的水平
        3.6.2 dmL1的逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座減輕Hela細(xì)胞內(nèi)的應(yīng)激顆粒的形成
    3.7 低溫下dmL1在斑馬魚ZF4細(xì)胞及馴化的斑馬魚中的逆轉(zhuǎn)座
        3.7.1 低溫誘導(dǎo)下dmL1在斑馬魚ZF4細(xì)胞中的逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座活性增強(qiáng)
        3.7.2 低溫馴化的斑馬魚內(nèi)源性ZFL2-1的表達(dá)量升高
    3.8 總結(jié)
第四章 討論與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號(hào)：3175370