為探究溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）HY9901菌株Ⅲ型分泌系統(tǒng)（Type Ⅲ secretion system,T3SS）胞質(zhì)環(huán)（C-環(huán)）組分VscQ作為疫苗候選抗原的可能性,根據(jù)GeneBank上登陸的溶藻弧菌vscQ序列（NO.MN862753）,設(shè)計1對帶酶切位點的特異性引物,PCR擴增vscQ基因,進行序列分析。結(jié)果顯示,該基因全長969bp,預(yù)計分子量35.61kDa。將vscQ基因定向插入原核表達載體pGEX-4T-1中,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pGEXvscQ。用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)后,能在大腸桿菌（Escherichia coli）BL21（DE3）中表達分子質(zhì)量約為61.6kDa的VscQ融合蛋白。VscQ蛋白表達的最優(yōu)條件為:0.4mmol/L IPTG,15℃條件下誘導(dǎo)12h。用純化后的VscQ融合蛋白免疫白兔,獲得高效多克隆抗體,抗體效價為1∶121500。兔抗VscQ血清能與重組VscQ蛋白發(fā)生特異性反應(yīng),表明T3SS C-環(huán)組分VscQ可能是溶藻弧菌的重要保護性抗原之一。 

【文章來源】：安徽農(nóng)學(xué)通報. 2020,26(18)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

Vsc Q原核表達載體的鑒定

將p GEX-vsc Q質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3）中，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)可表達相對分子質(zhì)量約61.6kDa的VscQ蛋白（圖2泳道2），其中VscQ的預(yù)計分子量35.6k Da,p GEX-4T-1表達的融合標(biāo)簽為26k Da。對照組均未表達Vsc Q蛋白。2.3 誘導(dǎo)表達的條件優(yōu)化

IPTG誘導(dǎo)濃度0.4mmol/L時Vsc Q表達量最大（圖3A）；誘導(dǎo)時間為12h時表達量最佳（圖3B）；誘導(dǎo)溫度為37℃時全菌、沉淀中蛋白表達量較15℃時高，上清中幾乎不表達（圖3C），而誘導(dǎo)溫度為15℃時上清中Vsc Q蛋白表達量較大（圖4）。通過對IPTG濃度、誘導(dǎo)時間、誘導(dǎo)溫度的優(yōu)化，確定Vsc Q的最佳誘導(dǎo)表達條件為：0.4mmol/L IPTG,15℃條件下誘導(dǎo)12h。圖4 p GEX-vsc Q在上清和沉淀中的表達

【參考文獻】：
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本文編號：3060726