近二十年,兩棲類種群數(shù)量呈全球性急劇減少趨勢,研究表明傳染病的產(chǎn)生和蔓延成為兩棲類種群數(shù)量下降的主要原因。作為中國東北地區(qū)優(yōu)勢兩棲物種,東北林蛙（Rana dybowskii）也正遭受著病原微生物的威脅,其中虹彩病毒科蛙虹彩病毒屬（Ranavirus）是其中一重要因素。Toll樣受體（Toll-like receptors, TLRs）信號通路作為固有免疫系統(tǒng)的重要組成部分,可以識別病原微生物所攜帶的模式分子（pathogen-associated molecular patterns, PAMP）,進(jìn)而啟動(dòng)固有免疫應(yīng)答以及調(diào)控適應(yīng)性免疫應(yīng)答。MyD88是TLR信號通路中重要接頭蛋白,被除TLR3之外其它所有TLRs共用。本研究應(yīng)用cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)（rapid-amplification of cDNA ends, RACE）獲得東北林蛙MyD88全長cDNA序列,通過生物信息學(xué)方法對東北林蛙MyD88進(jìn)行了保守結(jié)構(gòu)域查找（conserved domain research）、多序列比對（multiple sequence alignment）、同源性分析（homology a... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 兩棲動(dòng)物
        1.1.1 兩棲動(dòng)物概述
        1.1.2 兩棲動(dòng)物生存現(xiàn)狀
        1.1.3 兩棲動(dòng)物銳減的誘因
    1.2 東北林蛙
        1.2.1 東北林蛙概述
        1.2.2 東北林蛙的研究意義
    1.3 虹彩病毒
        1.3.1 虹彩病毒概述
        1.3.2 虹彩病毒的致病機(jī)制
        1.3.3 虹彩病毒對兩棲動(dòng)物的危害
    1.4 TLR信號通路
        1.4.1 TLRs概述
    1.5 TLR信號通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)
    1.6 TLRs的應(yīng)用
    1.7 東北林蛙固有免疫研究現(xiàn)狀
    1.8 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及病原微生物的暫養(yǎng)與保存
        2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 試劑的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 mRNA序列及引物設(shè)計(jì)
        2.2.2 RGV接種及組織樣品采集
        2.2.3 組織總RNA提取
        2.2.4 RACE法獲得東北林蛙MyD88全長cDNA序列
        2.2.5 東北林蛙MyD88的生物信息學(xué)分析
        2.2.6 cDNA合成
        2.2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    2.3 本章小結(jié)
3 結(jié)果
    3.1 RACE結(jié)果
    3.2 東北林蛙MyD88的生物信息學(xué)分析
        3.2.1 全長cDNA序列及保守結(jié)構(gòu)域查找
        3.2.2 多序列比對及同源性分析
        3.2.3 系統(tǒng)發(fā)育分析
    3.3 引物特異性及擴(kuò)增效率的鑒定
        3.3.1 β-actin標(biāo)準(zhǔn)曲線及溶解曲線
        3.3.2 MyD88標(biāo)準(zhǔn)曲線及溶解曲線
        3.3.3 IRAK4標(biāo)準(zhǔn)曲線及溶解曲線
        3.3.4 TRAF6標(biāo)準(zhǔn)曲線及溶解曲線
        3.3.5 TRAF3標(biāo)準(zhǔn)曲線及溶解曲線
    3.4 RGV脅迫下東北林蛙MyD88、IRAK4、TRAF6和TRAF3的差異表達(dá)變化
        3.4.1 東北林蛙皮膚MyD88、IRAK4、TRAF6和TRAF3表達(dá)量變化
        3.4.2 東北林蛙腎臟MyD88、IRAK4、TRAF6和TRAF3表達(dá)量變化
        3.4.3 東北林蛙肝臟MyD88、IRAK4、TRAF6和TRAF3表達(dá)量變化
        3.4.4 東北林蛙心臟MyD88、IRAK4、TRAF6和TRAF3表達(dá)量變化
    3.5 本章小結(jié)
4 討論
    4.1 TLRs與病毒識別
    4.2 東北林蛙MyD88與TLR信號通路
    4.3 東北林蛙TLR信號通路與抗病毒免疫反應(yīng)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]育成期林蛙棚內(nèi)養(yǎng)殖引種白菜抗病技術(shù)[J]. 鄧際華,程越超,郝迪萩,宋英博,王囡囡.  特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)植物. 2015(06)
[2]大鯢虹彩病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)及其包涵體特征[J]. 周小愿,張星朗,吉紅,韓亞慧,賈秋紅,高宏偉.  淡水漁業(yè). 2015(01)
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[4]棘胸蛙嗜水氣單胞菌的生物被膜特性[J]. 馬有智.  浙江農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(07)
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[9]中國東北地區(qū)林蛙屬物種的分類學(xué)研究（兩棲綱:蛙科）[J]. 謝鋒,葉昌媛,費(fèi)梁,江建平,曾曉茂,松井正文.  動(dòng)物分類學(xué)報(bào). 1999(02)

碩士論文
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[2]長白山保護(hù)區(qū)無尾兩棲類壺菌病生態(tài)危害識別與風(fēng)險(xiǎn)表征[D]. 白世卓.東北林業(yè)大學(xué) 2012
[3]長白山保護(hù)區(qū)兩棲類虹彩病毒空間分布及生態(tài)安全初探[D]. 薛穎.東北林業(yè)大學(xué) 2012
[4]黑龍江省東北林蛙虹彩病毒帶毒率調(diào)查與基因分型研究[D]. 許凱.東北林業(yè)大學(xué) 2010



本文編號：3021401