發(fā)布時間：2021-02-06 21:48

　　現(xiàn)如今,我國作為水產(chǎn)養(yǎng)殖大國,漁藥的使用必不可少,尤其是對抗生素的使用頗為依賴,從而引起許多抗生素殘留等問題,不僅對養(yǎng)殖環(huán)境造成危害,對人體健康也構(gòu)成了威脅。強力霉素就是一種最為常見的漁藥抗生素,作為四環(huán)素類藥物,可以治療衣原體支原體感染,對革蘭氏陽性菌和革蘭陰性桿菌也有作用。強力霉素具有抗菌譜廣,抗菌作用強等特點,因此被廣泛地應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè),但四環(huán)素類藥物對人體的毒害作用也是非常大的,通常刺激人體胃腸道黏膜,影響食欲,引起嘔吐,惡心等不良反應(yīng),對肝臟和腎臟也有損害,造成肝腹水及腫大。我國農(nóng)業(yè)部《動物性食品中獸藥最高殘留限量》規(guī)定肌肉、肝臟、腎臟的最高殘留量為100mg/kg、300mg/kg、600mg/kg,快速檢測可以達(dá)到池邊監(jiān)控的目的,發(fā)現(xiàn)漁藥殘留超標(biāo),可進(jìn)行簡單處理,即延長休藥期,防患于未然。本文目的為強力霉素單克隆抗體的制備及快速檢測試劑條的研制。1、強力霉素人工抗原的合成與鑒定:強力霉素做為小分子半抗原,無免疫原性,采用戊二醛法（GA）將強力霉素分別與牛血清白蛋白（BSA）、雞卵清蛋白（OVA）進(jìn)行偶聯(lián),偶聯(lián)后得到強力霉素免疫原（DC-BSA）和強力霉素包被原（DC-... 

【文章來源】：魯東大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 我國水產(chǎn)養(yǎng)殖現(xiàn)狀
        1.1.1 我國水產(chǎn)養(yǎng)殖現(xiàn)狀
        1.1.2 我國漁藥使用現(xiàn)狀
        1.1.3 引起漁藥殘留的原因
    1.2 漁藥殘留的危害
        1.2.1 漁藥殘留對動物體及環(huán)境的危害
        1.2.2 漁藥殘留對人體的危害
    1.3 漁藥殘留的檢測方法
        1.3.1 微生物檢測方法
        1.3.2 色質(zhì)譜檢測方法
        1.3.3 免疫分析檢測法
    1.4 強力霉素概述
    1.5 單克隆抗體技術(shù)
    1.6 本文研究目的及意義
第2章 強力霉素人工抗原的制備及鑒定
    2.1 實驗材料
        2.1.1 藥品
        2.1.2 緩沖液配制
        2.1.3 實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 戊二醛法（GA）合成強力霉素人工抗原
        2.2.2 人工完全抗原的鑒定
            2.2.2.1 人工完全抗原蛋白濃度測定
            2.2.2.2 紫外分光光度法（UV法）
            2.2.2.3 SDS-PAGE電泳法檢測
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 人工完全抗原的濃度
        2.3.2 紫外掃描及SDS-PAGE電泳圖譜
    2.4 結(jié)果分析與討論
        2.4.1 偶聯(lián)蛋白的選擇
        2.4.2 人工完全抗原鑒定分析
第3章 強力霉素人工抗原免疫原性的評價
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗材料及藥品
        3.1.2 緩沖液配制
        3.1.3 實驗儀器
        3.1.4 實驗動物
    3.2 實驗方法
        3.2.1 小鼠免疫方法
        3.2.2 血清抗體效價的測定
        3.2.3 多抗血清特異性的檢測
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 血清抗體效價的測定結(jié)果
        3.3.2 多抗血清特異性的檢測結(jié)果
    3.4 實驗結(jié)果分析與討論
        3.4.1 免疫方法對抗體效價的影響分析
        3.4.2 多抗血清特異性檢測分析
第4章 制備與篩選雜交瘤細(xì)胞
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗材料及藥品
        4.1.2 溶液配制
        4.1.3 實驗儀器
        4.1.4 實驗動物
    4.2 實驗方法
        4.2.1 SP2/0 的復(fù)蘇
        4.2.2 SP2/0 擴大培養(yǎng).
        4.2.3 細(xì)胞融合
        4.2.4 雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)及陽性篩選
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 細(xì)胞融合結(jié)果及融合率
        4.3.2 雜交瘤細(xì)胞陽性孔的篩選
    4.4 實驗結(jié)果分析與討論
        4.4.1 培養(yǎng)狀態(tài)良好的骨髓瘤細(xì)胞
        4.4.2 細(xì)胞融合方法的選擇
第5章 雜交瘤細(xì)胞的克隆及單克隆抗體的制備
    5.1 實驗材料
        5.1.1 實驗材料及藥品
        5.1.2 溶液配制
        5.1.3 實驗儀器
        5.1.4 實驗動物
    5.2 實驗方法
        5.2.1 雜交瘤細(xì)胞的克隆
        5.2.2 單抗細(xì)胞的篩選
        5.2.3 單抗的制備
        5.2.4 單抗的純化
        5.2.5 單克隆抗體交叉實驗
    5.3 實驗結(jié)果
        5.3.1 單克隆抗體細(xì)胞的篩選
        5.3.2 單克隆抗體純化后濃度
        5.3.3 交叉實驗結(jié)果
    5.4 實驗結(jié)果討論與分析
        5.4.1 篩選克隆細(xì)胞
        5.4.2 克隆細(xì)胞的擴大培養(yǎng)
        5.4.3 單克隆抗體的制備及純化
        5.4.4 特異性檢測及交叉實驗結(jié)果分析
第6章 強力霉素快速檢測試劑條的制備
    6.1 實驗材料.
        6.1.1 實驗藥品
        6.1.2 實驗試劑配制
        6.1.3 實驗儀器
    6.2 實驗方法
        6.2.1 制備膠體金
        6.2.2 單克隆抗體膠體金的標(biāo)記
        6.2.3 金標(biāo)抗體最佳工作濃度的確定
        6.2.4 試劑條最低檢測限確定
        6.2.5 膠體金試劑條的制備
    6.3 實驗結(jié)果
        6.3.1 制備膠體金結(jié)果
        6.3.2 膠體金最佳標(biāo)記量
        6.3.3 試劑盒最低檢測量
        6.3.4 試劑條制備結(jié)果
        6.3.5 試劑條最低檢測限結(jié)果
    6.4 實驗結(jié)果分析與討論
        6.4.1 膠體金制備
        6.4.2 膠體金最佳標(biāo)記量及最佳工作濃度
        6.4.3 試劑條檢測結(jié)果分析
第7章 實驗結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄A
    實驗主要藥品
    緩沖液配制
    實驗儀器
作者簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]廣東典型海水養(yǎng)殖區(qū)沉積物及魚體中磺胺類藥物的殘留及其對人體的健康風(fēng)險評價[J]. 何秀婷,王奇,聶湘平,楊永濤,程章.  環(huán)境科學(xué). 2014(07)
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碩士論文
[1]強力霉素單克隆抗體的制備及其初步應(yīng)用研究[D]. 余少梅.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[2]頭孢噻肟鈉人工抗原的合成與單克隆抗體的研究[D]. 王守海.魯東大學(xué) 2012



本文編號：3021145