現(xiàn)如今,我國(guó)作為水產(chǎn)養(yǎng)殖大國(guó),漁藥的使用必不可少,尤其是對(duì)抗生素的使用頗為依賴,從而引起許多抗生素殘留等問(wèn)題,不僅對(duì)養(yǎng)殖環(huán)境造成危害,對(duì)人體健康也構(gòu)成了威脅。強(qiáng)力霉素就是一種最為常見(jiàn)的漁藥抗生素,作為四環(huán)素類藥物,可以治療衣原體支原體感染,對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭陰性桿菌也有作用。強(qiáng)力霉素具有抗菌譜廣,抗菌作用強(qiáng)等特點(diǎn),因此被廣泛地應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè),但四環(huán)素類藥物對(duì)人體的毒害作用也是非常大的,通常刺激人體胃腸道黏膜,影響食欲,引起嘔吐,惡心等不良反應(yīng),對(duì)肝臟和腎臟也有損害,造成肝腹水及腫大。我國(guó)農(nóng)業(yè)部《動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量》規(guī)定肌肉、肝臟、腎臟的最高殘留量為100mg/kg、300mg/kg、600mg/kg,快速檢測(cè)可以達(dá)到池邊監(jiān)控的目的,發(fā)現(xiàn)漁藥殘留超標(biāo),可進(jìn)行簡(jiǎn)單處理,即延長(zhǎng)休藥期,防患于未然。本文目的為強(qiáng)力霉素單克隆抗體的制備及快速檢測(cè)試劑條的研制。1、強(qiáng)力霉素人工抗原的合成與鑒定:強(qiáng)力霉素做為小分子半抗原,無(wú)免疫原性,采用戊二醛法（GA）將強(qiáng)力霉素分別與牛血清白蛋白（BSA）、雞卵清蛋白（OVA）進(jìn)行偶聯(lián),偶聯(lián)后得到強(qiáng)力霉素免疫原（DC-BSA）和強(qiáng)力霉素包被原（DC-... 

【文章來(lái)源】：魯東大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖現(xiàn)狀
        1.1.1 我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖現(xiàn)狀
        1.1.2 我國(guó)漁藥使用現(xiàn)狀
        1.1.3 引起漁藥殘留的原因
    1.2 漁藥殘留的危害
        1.2.1 漁藥殘留對(duì)動(dòng)物體及環(huán)境的危害
        1.2.2 漁藥殘留對(duì)人體的危害
    1.3 漁藥殘留的檢測(cè)方法
        1.3.1 微生物檢測(cè)方法
        1.3.2 色質(zhì)譜檢測(cè)方法
        1.3.3 免疫分析檢測(cè)法
    1.4 強(qiáng)力霉素概述
    1.5 單克隆抗體技術(shù)
    1.6 本文研究目的及意義
第2章 強(qiáng)力霉素人工抗原的制備及鑒定
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 藥品
        2.1.2 緩沖液配制
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 戊二醛法（GA）合成強(qiáng)力霉素人工抗原
        2.2.2 人工完全抗原的鑒定
            2.2.2.1 人工完全抗原蛋白濃度測(cè)定
            2.2.2.2 紫外分光光度法（UV法）
            2.2.2.3 SDS-PAGE電泳法檢測(cè)
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 人工完全抗原的濃度
        2.3.2 紫外掃描及SDS-PAGE電泳圖譜
    2.4 結(jié)果分析與討論
        2.4.1 偶聯(lián)蛋白的選擇
        2.4.2 人工完全抗原鑒定分析
第3章 強(qiáng)力霉素人工抗原免疫原性的評(píng)價(jià)
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料及藥品
        3.1.2 緩沖液配制
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 小鼠免疫方法
        3.2.2 血清抗體效價(jià)的測(cè)定
        3.2.3 多抗血清特異性的檢測(cè)
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 血清抗體效價(jià)的測(cè)定結(jié)果
        3.3.2 多抗血清特異性的檢測(cè)結(jié)果
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與討論
        3.4.1 免疫方法對(duì)抗體效價(jià)的影響分析
        3.4.2 多抗血清特異性檢測(cè)分析
第4章 制備與篩選雜交瘤細(xì)胞
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料及藥品
        4.1.2 溶液配制
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 SP2/0 的復(fù)蘇
        4.2.2 SP2/0 擴(kuò)大培養(yǎng).
        4.2.3 細(xì)胞融合
        4.2.4 雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)及陽(yáng)性篩選
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 細(xì)胞融合結(jié)果及融合率
        4.3.2 雜交瘤細(xì)胞陽(yáng)性孔的篩選
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與討論
        4.4.1 培養(yǎng)狀態(tài)良好的骨髓瘤細(xì)胞
        4.4.2 細(xì)胞融合方法的選擇
第5章 雜交瘤細(xì)胞的克隆及單克隆抗體的制備
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料及藥品
        5.1.2 溶液配制
        5.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        5.1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 雜交瘤細(xì)胞的克隆
        5.2.2 單抗細(xì)胞的篩選
        5.2.3 單抗的制備
        5.2.4 單抗的純化
        5.2.5 單克隆抗體交叉實(shí)驗(yàn)
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 單克隆抗體細(xì)胞的篩選
        5.3.2 單克隆抗體純化后濃度
        5.3.3 交叉實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論與分析
        5.4.1 篩選克隆細(xì)胞
        5.4.2 克隆細(xì)胞的擴(kuò)大培養(yǎng)
        5.4.3 單克隆抗體的制備及純化
        5.4.4 特異性檢測(cè)及交叉實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析
第6章 強(qiáng)力霉素快速檢測(cè)試劑條的制備
    6.1 實(shí)驗(yàn)材料.
        6.1.1 實(shí)驗(yàn)藥品
        6.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑配制
        6.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    6.2 實(shí)驗(yàn)方法
        6.2.1 制備膠體金
        6.2.2 單克隆抗體膠體金的標(biāo)記
        6.2.3 金標(biāo)抗體最佳工作濃度的確定
        6.2.4 試劑條最低檢測(cè)限確定
        6.2.5 膠體金試劑條的制備
    6.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        6.3.1 制備膠體金結(jié)果
        6.3.2 膠體金最佳標(biāo)記量
        6.3.3 試劑盒最低檢測(cè)量
        6.3.4 試劑條制備結(jié)果
        6.3.5 試劑條最低檢測(cè)限結(jié)果
    6.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與討論
        6.4.1 膠體金制備
        6.4.2 膠體金最佳標(biāo)記量及最佳工作濃度
        6.4.3 試劑條檢測(cè)結(jié)果分析
第7章 實(shí)驗(yàn)結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄A
    實(shí)驗(yàn)主要藥品
    緩沖液配制
    實(shí)驗(yàn)儀器
作者簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[9]磺胺類藥物膠體金快速檢測(cè)試劑條的研制及在水產(chǎn)品中的應(yīng)用[J]. 張敏,李翹,盛慧萍.  中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2013(08)
[10]蜂蜜中四環(huán)素類抗生素的放射免疫法檢測(cè)[J]. 周浩,李俊霞,楊紅,肖全偉,葉梅,萬(wàn)渝平.  食品研究與開(kāi)發(fā). 2012(11)

碩士論文
[1]強(qiáng)力霉素單克隆抗體的制備及其初步應(yīng)用研究[D]. 余少梅.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[2]頭孢噻肟鈉人工抗原的合成與單克隆抗體的研究[D]. 王守海.魯東大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3021145