大菱鲆（Scophthalmus maximus）是世界范圍內(nèi)公認(rèn)的優(yōu)良經(jīng)濟(jì)魚(yú)種之一,近年來(lái)其集約化養(yǎng)殖導(dǎo)致病害頻發(fā),經(jīng)濟(jì)損失嚴(yán)重,其中遲緩愛(ài)德華氏菌是威脅大菱鲆養(yǎng)殖業(yè)的首要病原菌。常見(jiàn)抗生素防治已導(dǎo)致菌株產(chǎn)生耐藥性,且藥物殘留問(wèn)題威脅食品安全和人類健康。卵黃抗體因具有特異性高、無(wú)耐藥性、符合動(dòng)物權(quán)益保護(hù)等優(yōu)點(diǎn),被視為一種重要的綠色安全抗生素替代品,其作為控制水生動(dòng)物細(xì)菌性傳染疾病的有效手段也越來(lái)越受到人們關(guān)注。本研究以分離自患病大菱鲆的遲緩愛(ài)德華氏菌（Edwardsiella tarda）制備滅活菌苗,免疫蛋雞,經(jīng)水稀釋-凍融-二次鹽析-超濾濃縮-冷凍干燥后獲得卵黃抗體（IgY）提純粉,測(cè)定其純度為83.9%,ELISA測(cè)定抗體效價(jià)高達(dá)1：25000；間接ELISA法檢測(cè)特異性IgY對(duì)同種其他遲緩愛(ài)德華氏菌分離株同樣具有高效結(jié)合活性。特異性IgY對(duì)遲緩愛(ài)德華氏菌的體外抑菌結(jié)果顯示,10 mg/mL特異性IgY能顯著抑制遲緩愛(ài)德華氏菌在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)；免疫熒光及透射電鏡顯示,特異性IgY能夠與病原菌表面有效結(jié)合,使菌體凝集；掃描電鏡進(jìn)一步觀察到IgY處理組遲緩愛(ài)德華氏菌菌體發(fā)生形變... 

【文章來(lái)源】：大連理工大學(xué)遼寧省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 大菱鲆遲緩愛(ài)德華氏菌病研究進(jìn)展
        1.1.1 大菱鲆簡(jiǎn)介
        1.1.2 緩愛(ài)德華氏菌生物學(xué)特征
        1.1.3 流行病學(xué)研究
        1.1.4 遲緩愛(ài)德華氏菌致病機(jī)理
        1.1.5 愛(ài)德華氏菌病的預(yù)防和治療
    1.2 卵黃抗體研究進(jìn)展
        1.2.1 IgY的結(jié)構(gòu)與特點(diǎn)
        1.2.2 IgY的理化特性
        1.2.3 IgY的作用機(jī)理
        1.2.4 IgY在水生和陸生動(dòng)物飼料及疾病防治中的應(yīng)用
    1.3 本論文的研究目的及主要內(nèi)容
2 抗遲緩愛(ài)德華氏菌特異性IgY的制備
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)病原菌
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.4 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.5 溶液配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 遲緩愛(ài)德華氏菌的鑒定
        2.3.2 緩愛(ài)德華氏菌的培養(yǎng)及生長(zhǎng)曲線測(cè)定
        2.3.3 免疫原的制備
        2.3.4 蛋雞的免疫
        2.3.5 水溶性組分的提取
        2.3.6 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)特異性IgY抗體效價(jià)
        2.3.7 IgY的分離與純化
        2.3.8 BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)含量
        2.3.9 SDS-PAGE檢測(cè)抗體純度
        2.3.10 特異性IgY與同屬其他遲緩愛(ài)德華氏菌株的結(jié)合活性
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 遲緩愛(ài)德華氏菌16S rRNA鑒定及系統(tǒng)發(fā)育分析
        2.4.2 抗原最佳包被濃度及抗體稀釋倍數(shù)的確定
        2.4.3 抗遲緩愛(ài)德華氏菌特異性IgY效價(jià)變化趨勢(shì)
        2.4.4 BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)含量
        2.4.5 SDS-PAGE檢測(cè)抗體純化程度
        2.4.6 特異性IgY與其它分離遲緩愛(ài)德華氏菌株的結(jié)合活性
    2.5 討論
    2.6 小結(jié)
3 特異性卵黃抗體對(duì)遲緩愛(ài)德華氏菌的體外抑菌作用研究
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)菌種
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 IgY對(duì)病原菌的體外抑菌生長(zhǎng)試驗(yàn)
        3.2.2 免疫熒光與透射電鏡
        3.2.3 掃描電鏡觀察特異性IgY對(duì)菌體的作用
        3.2.4 IgY對(duì)病原菌生物被膜形成的影響
        3.2.5 IgY對(duì)病原菌疏水性的影響
        3.2.6 IgY對(duì)病原菌菌體細(xì)胞壁完整性的影響
        3.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 IgY對(duì)病原菌的體外生長(zhǎng)抑制
        3.4.2 免疫熒光與透射電鏡
        3.4.3 掃描電鏡觀察特異性IgY對(duì)菌體表面的作用
        3.4.4 IgY對(duì)病原菌生物被膜形成的影響
        3.4.5 IgY對(duì)病原菌疏水性的影響
        3.4.6 IgY對(duì)病原菌細(xì)胞壁完整性的影響
    3.5 討論
    3.6 小結(jié)
4 卵黃抗體對(duì)攻毒大菱鲆的被動(dòng)保護(hù)效果研究
    4.1 前言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備
        4.2.1 試劑
        4.2.2 儀器
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.2.4 菌種
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 灌胃特異性IgY對(duì)大菱鲆存活率的影響
        4.3.2 不同時(shí)間灌胃特異性IgY對(duì)大菱鲆存活率的影響
        4.3.3 大菱鲆體內(nèi)臟器菌數(shù)變化
        4.3.4 飼喂特異性IgY對(duì)大菱鲆的預(yù)防保護(hù)作用
        4.3.5 IgY對(duì)大菱鲆頭腎巨噬細(xì)胞吞噬作用的影響
        4.3.6 IgY對(duì)大菱鲆非特異性免疫酶學(xué)指標(biāo)測(cè)定
        4.3.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 灌胃特異性IgY對(duì)大菱鲆存活率的影響
        4.4.2 不同時(shí)間灌胃特異性IgY對(duì)大菱鲆存活率的影響
        4.4.3 攻毒大菱鲆體內(nèi)臟器菌數(shù)變化
        4.4.4 飼喂特異性IgY對(duì)大菱鲆的預(yù)防保護(hù)作用
        4.4.5 IgY對(duì)大菱鲆頭腎巨噬細(xì)胞吞噬作用的影響
        4.4.6 IgY對(duì)大菱鲆非特異性免疫酶學(xué)指標(biāo)測(cè)定
    4.5 討論
    4.6 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝



本文編號(hào)：2943145