大菱鲆（Scophthalmus maximus）是世界范圍內公認的優(yōu)良經濟魚種之一,近年來其集約化養(yǎng)殖導致病害頻發(fā),經濟損失嚴重,其中遲緩愛德華氏菌是威脅大菱鲆養(yǎng)殖業(yè)的首要病原菌。常見抗生素防治已導致菌株產生耐藥性,且藥物殘留問題威脅食品安全和人類健康。卵黃抗體因具有特異性高、無耐藥性、符合動物權益保護等優(yōu)點,被視為一種重要的綠色安全抗生素替代品,其作為控制水生動物細菌性傳染疾病的有效手段也越來越受到人們關注。本研究以分離自患病大菱鲆的遲緩愛德華氏菌（Edwardsiella tarda）制備滅活菌苗,免疫蛋雞,經水稀釋-凍融-二次鹽析-超濾濃縮-冷凍干燥后獲得卵黃抗體（IgY）提純粉,測定其純度為83.9%,ELISA測定抗體效價高達1：25000；間接ELISA法檢測特異性IgY對同種其他遲緩愛德華氏菌分離株同樣具有高效結合活性。特異性IgY對遲緩愛德華氏菌的體外抑菌結果顯示,10 mg/mL特異性IgY能顯著抑制遲緩愛德華氏菌在液體培養(yǎng)基中的生長；免疫熒光及透射電鏡顯示,特異性IgY能夠與病原菌表面有效結合,使菌體凝集；掃描電鏡進一步觀察到IgY處理組遲緩愛德華氏菌菌體發(fā)生形變... 

【文章來源】：大連理工大學遼寧省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 文獻綜述
    1.1 大菱鲆遲緩愛德華氏菌病研究進展
        1.1.1 大菱鲆簡介
        1.1.2 緩愛德華氏菌生物學特征
        1.1.3 流行病學研究
        1.1.4 遲緩愛德華氏菌致病機理
        1.1.5 愛德華氏菌病的預防和治療
    1.2 卵黃抗體研究進展
        1.2.1 IgY的結構與特點
        1.2.2 IgY的理化特性
        1.2.3 IgY的作用機理
        1.2.4 IgY在水生和陸生動物飼料及疾病防治中的應用
    1.3 本論文的研究目的及主要內容
2 抗遲緩愛德華氏菌特異性IgY的制備
    2.1 前言
    2.2 實驗材料及設備
        2.2.1 實驗動物
        2.2.2 實驗病原菌
        2.2.3 實驗試劑
        2.2.4 實驗儀器
        2.2.5 溶液配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 遲緩愛德華氏菌的鑒定
        2.3.2 緩愛德華氏菌的培養(yǎng)及生長曲線測定
        2.3.3 免疫原的制備
        2.3.4 蛋雞的免疫
        2.3.5 水溶性組分的提取
        2.3.6 酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）檢測特異性IgY抗體效價
        2.3.7 IgY的分離與純化
        2.3.8 BCA法測定蛋白質含量
        2.3.9 SDS-PAGE檢測抗體純度
        2.3.10 特異性IgY與同屬其他遲緩愛德華氏菌株的結合活性
    2.4 結果與分析
        2.4.1 遲緩愛德華氏菌16S rRNA鑒定及系統(tǒng)發(fā)育分析
        2.4.2 抗原最佳包被濃度及抗體稀釋倍數(shù)的確定
        2.4.3 抗遲緩愛德華氏菌特異性IgY效價變化趨勢
        2.4.4 BCA法測定蛋白質含量
        2.4.5 SDS-PAGE檢測抗體純化程度
        2.4.6 特異性IgY與其它分離遲緩愛德華氏菌株的結合活性
    2.5 討論
    2.6 小結
3 特異性卵黃抗體對遲緩愛德華氏菌的體外抑菌作用研究
    3.1 前言
    3.2 實驗材料及設備
        3.2.1 實驗菌種
        3.2.2 實驗試劑
        3.2.3 實驗儀器
    3.3 實驗方法
        3.2.1 IgY對病原菌的體外抑菌生長試驗
        3.2.2 免疫熒光與透射電鏡
        3.2.3 掃描電鏡觀察特異性IgY對菌體的作用
        3.2.4 IgY對病原菌生物被膜形成的影響
        3.2.5 IgY對病原菌疏水性的影響
        3.2.6 IgY對病原菌菌體細胞壁完整性的影響
        3.2.7 統(tǒng)計學分析
    3.4 結果與分析
        3.4.1 IgY對病原菌的體外生長抑制
        3.4.2 免疫熒光與透射電鏡
        3.4.3 掃描電鏡觀察特異性IgY對菌體表面的作用
        3.4.4 IgY對病原菌生物被膜形成的影響
        3.4.5 IgY對病原菌疏水性的影響
        3.4.6 IgY對病原菌細胞壁完整性的影響
    3.5 討論
    3.6 小結
4 卵黃抗體對攻毒大菱鲆的被動保護效果研究
    4.1 前言
    4.2 實驗材料及設備
        4.2.1 試劑
        4.2.2 儀器
        4.2.3 實驗動物
        4.2.4 菌種
    4.3 實驗方法
        4.3.1 灌胃特異性IgY對大菱鲆存活率的影響
        4.3.2 不同時間灌胃特異性IgY對大菱鲆存活率的影響
        4.3.3 大菱鲆體內臟器菌數(shù)變化
        4.3.4 飼喂特異性IgY對大菱鲆的預防保護作用
        4.3.5 IgY對大菱鲆頭腎巨噬細胞吞噬作用的影響
        4.3.6 IgY對大菱鲆非特異性免疫酶學指標測定
        4.3.7 統(tǒng)計學分析
    4.4 結果與分析
        4.4.1 灌胃特異性IgY對大菱鲆存活率的影響
        4.4.2 不同時間灌胃特異性IgY對大菱鲆存活率的影響
        4.4.3 攻毒大菱鲆體內臟器菌數(shù)變化
        4.4.4 飼喂特異性IgY對大菱鲆的預防保護作用
        4.4.5 IgY對大菱鲆頭腎巨噬細胞吞噬作用的影響
        4.4.6 IgY對大菱鲆非特異性免疫酶學指標測定
    4.5 討論
    4.6 小結
結論
參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表學術論文情況
致謝



本文編號：2943145