嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)屬于氣單胞菌科,氣單胞菌屬,是人類-畜類以及水生動物類共同患病的條件致病菌。嗜水氣單胞菌屬于革蘭氏陰性菌、短桿形狀,無芽孢,也無莢膜,在0～41℃都可以生長,該菌在營養(yǎng)瓊脂和血瓊脂平板上極易生長。大多研究者普遍認為嗜水氣單胞菌分泌的毒素是導致發(fā)病的主要原因,臨床上主要表現(xiàn)為細菌性的出血病癥狀。最近幾年,我國水環(huán)境被嚴重破壞,隨著集約化養(yǎng)殖技術(shù)發(fā)展、養(yǎng)殖密度增加,嗜水氣單胞菌造成的團頭魴等淡水養(yǎng)殖魚類暴發(fā)性流行性的病害頻頻發(fā)生,加重經(jīng)濟損失。目前,水產(chǎn)上主要用抗生素治療由嗜水氣單胞菌引發(fā)的疾病,喹諾酮類藥物療效最好,但大量抗生素也導致很多耐藥菌株的產(chǎn)生。本論文開展了對南京地區(qū)團頭魴出血性病魚流行病學調(diào)查,通過病原分離及人工回感試驗證明,嗜水氣單胞菌是引起該疾病暴發(fā)的主要病原菌,之后開展了嗜水氣單胞菌的分離、鑒定及藥敏試驗等實驗,并對其菌株的耐藥性進行了研究,為基層水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的科學用藥提供有價值的理論依據(jù),以確保水產(chǎn)品的質(zhì)量安全。1、團頭魴出血病的流行病學調(diào)查經(jīng)過實地走訪、調(diào)查發(fā)現(xiàn),南京地區(qū)暴發(fā)的團頭魴大多是由嗜水氣單胞菌引起的,但危害程度有所不同。江寧、浦口等重點養(yǎng)殖區(qū)域發(fā)病比較嚴重,具有來勢兇猛、涉及范圍廣、流行速度特別快等特點。根據(jù)調(diào)查數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn),嗜水氣單胞菌全年均有檢出,由嗜水氣單胞菌病引起的疾病一般從6月份出現(xiàn),疾病隨著氣溫水溫的升高呈加重趨勢,7、8月份為疾病流行的高峰季。在淺水河口、高密度塘和單養(yǎng)池中,多數(shù)病例為急性,發(fā)病迅速,發(fā)病后2-3d內(nèi)死亡加重,10d左右則出現(xiàn)死亡的高峰期。在面積較大,養(yǎng)殖密度低的池塘或混養(yǎng)池塘團頭魴發(fā)病較為緩慢,每天的死亡數(shù)量并沒有明顯變化,但是發(fā)病過程較長,經(jīng)常會持續(xù)到10月份左右。發(fā)病初期魚的攝食沒有什么影響,發(fā)病后期出現(xiàn)不攝食、亂游、亂竄等現(xiàn)象。發(fā)病魚體體表充血,腹部、腹鰭基部充血明顯,有的頭部充血嚴重,眼球外凸,肛門腫大,體內(nèi)多臟器發(fā)炎充血,消化道炎癥明顯,腹腔內(nèi)有腹水。發(fā)病魚體有嚴重貧血癥狀,鰓絲發(fā)白,鰭條末梢、肝臟、腎臟有貧血癥狀。由于發(fā)病過程長短不一、年齡大小不一、疾病的發(fā)展程度不同,病魚的癥狀表現(xiàn)為多種多樣性。2、團頭魴出血病病原的分離鑒定及人工回感實驗在無菌環(huán)境下,從病魚腎臟取材,用LB固體培養(yǎng)基分離培養(yǎng)細菌。培養(yǎng)基上的菌落呈淡黃色、圓形、中部凸起、不透明、光滑。結(jié)果表明,N03、TRP、Glu、ADH、ESC、GEL、PNPG、GLU、ARA、MNE、NAG、MAL、GNT、CAP、MLT均為陽性,被鑒定為嗜水氣單胞菌。實驗結(jié)果表明,在LB固體培養(yǎng)基上提取的菌落,具有較強的致病性,記為JNYK1702。菌液密度高低直接影響試驗組魚的存活率,當密度為1×106cfu/尾時試驗組魚死亡率最高,當菌液密度為1×103cfu/尾時試驗組的魚只有一部分死亡。人工感染團頭魴的魚體癥狀與自然發(fā)病魚體病癥相同,因此得出結(jié)論經(jīng)細菌學分離鑒定得到的菌株JNYK1702-1與供試菌株JNYK1702一致,為同一種菌。3、致病性嗜水氣單胞菌藥敏實驗及耐藥性試驗藥敏試驗采用KB紙片法進行,在無菌環(huán)境下用已經(jīng)滅菌過的棉簽蘸取密度調(diào)整為1×107～1×108cfu/尾的菌懸液,在LB培養(yǎng)基上均勻涂布。將測試的藥敏試紙貼在LB培養(yǎng)基表面,然后將平板置于28℃培養(yǎng)箱中24h,觀察各藥物敏感紙抑菌圈的直徑。從測試結(jié)果可知,菌株對青霉素、氨芐西林、四環(huán)素、阿莫西林、苯唑西林表現(xiàn)出耐藥性。對氧氟沙星、慶大霉素、鏈霉素、諾氟沙星、羅紅霉素、氟苯尼考、頭孢曲松藥物敏感。根據(jù)日本化學治療學會(1975)的方法,測定硫酸鏈霉素、氨芐西林、土霉素、鹽酸金霉素、恩諾沙星、氟苯尼考、諾氟沙星和諾氟沙星確定致病菌株的藥物敏感性。制備液體,經(jīng)膜過濾器過濾,然后滅菌后用BHI培養(yǎng)基稀釋,最后將試管制成雙稀釋抗菌劑。結(jié)果表明:鹽酸金霉素、氟苯尼考、硫酸鏈霉素恩諾沙星的抑菌效果最佳,最小抑菌濃度分別為2、4、4、5 μg/mL,其次效果為土霉素和諾氟沙星2種藥物,最小抑菌濃度均為15 μg/mL;7種藥物中,氨芐西林的效果最差,最小抑菌濃度高于40 μg/mL。
【學位單位】：南京師范大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：S943
【部分圖文】：

圖２．１南京市地域分布（百度百科）??Ｆｉｇ．?２．１?Ｔｈｅ?ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ?ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｎａｎｊｉｎｇ??表??表２．１嗜水氣單胞菌病原普查情況表??Ｔａｂｌｅ２．１?Ｃａｓｅ?ｓｔｕｄｙ?ｏｆ?Ａ．?ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ?ｄｉｓｅａｓｅ??９??

２０１７年７月底，南京市江寧區(qū)某水產(chǎn)養(yǎng)殖場的團頭魴出現(xiàn)大量死亡情況。??檢查的團頭魴體長約２６？３２ｃｍ，高度約１２？１５ｃｍ，體重約２６０ｇ。病魚表面有明??顯出血癥狀（見圖３．１）。??Ｉ?，?■??圖３．１體表出血癥狀??Ｆｉｇ．?３．１?Ｓｉｇｎｓ?ｏｆ?ｂｌｅｅｄｉｎｇ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｂｏｄｙ??１３??

３．３．１菌落形態(tài)特征??從團頭魴的腎臟組織中分離出細菌，在培養(yǎng)基上發(fā)現(xiàn)大量的優(yōu)勢菌落，光滑、??中央凸起、不透明、淺黃色或白色的菌（圖３．２）。ＬＢ培養(yǎng)基上菌落呈淡黃色或??白色，圓形，不透明，中央凸起，光滑。血平板上的菌落是灰色的并且具有溶血??圈（圖３．３）。革蘭氏染色顯微鏡檢查呈陰性，具有短狀和特定形狀（見圖３．４）。??＿??圖３．２在ＬＢ培養(yǎng)基上的個體形態(tài)特征??Ｆｉｇ．?３．２?Ｔｈｅ?ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ?ｏｆ?ＬＢ?ｍｅｄｉｕｍ??１５??
【參考文獻】

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1 周毅;張培培;徐曄;曹潔;孟學平;段宏安;;金魚嗜水氣單胞菌的分離鑒定及藥敏試驗[J];水產(chǎn)科學;2014年06期

2 楊寧;黃海;張希;姜芳燕;;尼羅羅非魚嗜水氣單胞菌病的病原分離鑒定和藥敏試驗[J];水產(chǎn)科學;2014年05期

3 靳曉敏;葛慕湘;張艷英;房海;陳翠珍;;不同來源嗜水氣單胞菌溶血素基因檢測及序列分析[J];淡水漁業(yè);2014年01期

4 丁瑞;;中藥抗病原微生物作用的現(xiàn)代研究進展[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2013年21期

5 陶健;李紹戊;劉紅柏;;21種中草藥及復方制劑對嗜水氣單胞菌的體外抑菌作用[J];水生態(tài)學雜志;2013年03期

6 鄭世雄;祖國掌;;池塘養(yǎng)殖中華絨螯蟹細菌性疾病病原的分離與鑒定[J];水產(chǎn)養(yǎng)殖;2013年01期

7 王靜波;徐立蒲;王小亮;曹歡;周增超;王姝;;北京地區(qū)養(yǎng)殖魚類來源嗜水氣單胞菌耐藥性研究[J];北京農(nóng)業(yè);2012年30期

8 夏飛;梁利國;謝駿;;團頭魴病原嗜水氣單胞菌的分離鑒定及藥敏試驗[J];水產(chǎn)科學;2012年10期

9 夏飛;梁利國;謝駿;;異育銀鯽病原維氏氣單胞菌的分離鑒定及藥敏試驗[J];淡水漁業(yè);2012年05期

10 董忠典;周芬娜;袁顏顏;馮艷艷;王慧;;尼羅羅非魚致病性嗜水氣單胞菌的分離鑒定與藥敏試驗[J];東北農(nóng)業(yè)大學學報;2012年06期

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1 朱大玲;嗜水氣單胞菌毒力基因及基因工程疫苗[D];中國科學院研究生院（水生生物研究所）;2006年

相關(guān)碩士學位論文 前5條

1 陳婷婷;團頭魴源嗜水氣單胞菌流行病調(diào)查及致病性、耐藥性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2014年

2 溫華成;黃顙魚源嗜水氣單胞菌的分離鑒定及對三種氟喹諾酮類藥物和氟苯尼考的耐藥性研究[D];廣西大學;2012年

3 蔣啟歡;嗜水氣單胞菌的分離鑒定及控制方法研究[D];合肥工業(yè)大學;2012年

4 田甜;魚源嗜水氣單胞菌的分離鑒定及耐藥性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2010年

5 吳學敏;嗜水氣單胞菌主要粘附素基因序列及其重組基因表達產(chǎn)物功能分析[D];福建農(nóng)林大學;2010年

本文編號：2862843