自20世紀(jì)中葉起,水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)迅速發(fā)展,成為世界范圍內(nèi)食品領(lǐng)域增長(zhǎng)最快的行業(yè)。然而,在養(yǎng)殖過(guò)程中,細(xì)菌性疾病的頻發(fā)是影響水產(chǎn)品產(chǎn)量品質(zhì)的主要因素。為了控制病害,人類施用了大量抗生素,進(jìn)而造成了細(xì)菌耐藥性的發(fā)展。故此,對(duì)于養(yǎng)殖系統(tǒng)而言,研究細(xì)菌耐藥的傳播機(jī)制至關(guān)重要。本課題主要針對(duì)于時(shí)下流行的循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)展開(kāi)研究,課題以ISCR2元件為研究對(duì)象,通過(guò)解析循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)這一環(huán)境中ISCR2分布狀況,分析ISCR2在環(huán)境細(xì)菌與病原菌之間的轉(zhuǎn)移規(guī)律,以揭示ISCR2在耐藥發(fā)展中的作用。課題研究對(duì)象為爆發(fā)過(guò)石斑魚(yú)腐皮病的循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng),在交替施用漁業(yè)常用抗生素氟苯尼考及諾氟沙星后,病癥并未能有效控制�；驍U(kuò)增及重測(cè)序結(jié)果顯示,floR基因是引發(fā)系統(tǒng)中氟苯尼考耐藥性的主要原因且位于ISCR2下游。MIC結(jié)果顯示,攜帶有ISCR2基因的分離菌耐藥菌比例更高。數(shù)據(jù)庫(kù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,90%的ISCR2基因下游發(fā)現(xiàn)有sul2基因。對(duì)樣品中攜帶有ISCR2基因的菌進(jìn)行結(jié)構(gòu)擴(kuò)增結(jié)果顯示,ISCR2基因與strB,strA,sul2,tet A,tet31,mph-like及mef七種抗生素耐藥基因相連,形成五種不同的結(jié)構(gòu),并且這五種結(jié)構(gòu)在數(shù)據(jù)庫(kù)中均有發(fā)現(xiàn),且多數(shù)為病原菌。針對(duì)上述七種耐藥基因及ISCR2基因進(jìn)行定量檢測(cè),結(jié)果顯示,floR,strA,strB,sul2,tet(31)及tetA基因的豐度變化與ISCR2基因具有正相關(guān)性。依據(jù)上述結(jié)果,我們可得到如下結(jié)論:1)ISCR2元件上攜帶有多種耐藥基因,形成多種結(jié)構(gòu),同一種結(jié)構(gòu)在多株不同種屬菌中均有發(fā)現(xiàn)。并且在環(huán)境微生物中發(fā)現(xiàn)的結(jié)構(gòu),在病原菌中亦有存在。參與介導(dǎo)諸如鏈霉素類,氯霉素類,四環(huán)素類,大環(huán)內(nèi)酯類,磺胺類等多種耐藥基因的水平轉(zhuǎn)移。2)在此循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中,ISCR2元件介導(dǎo)了多種漁業(yè)常用抗生素耐藥基因的傳播,導(dǎo)致了細(xì)菌耐藥的發(fā)展,嚴(yán)重影響了病害的防治工作。3)ISCR2下游連接有sul2基因,并且此結(jié)構(gòu)較為保守。其可能以ISCR2基因?yàn)樯嫌?sul2基因?yàn)橄掠?中間連接有多個(gè)耐藥基因,從而形成一個(gè)獨(dú)立的移動(dòng)單元,以介導(dǎo)多種抗生素耐藥基因的傳播。4)ISCR2基因廣泛分布于多個(gè)種屬菌中,其中,以病原菌為主,且環(huán)境菌中亦有發(fā)現(xiàn)。其可能是介導(dǎo)人體病原菌及環(huán)境微生物耐藥庫(kù)的潛在橋梁,引發(fā)細(xì)菌耐藥性在人體及養(yǎng)殖業(yè)中的交叉污染,為未來(lái)人類使用抗生素治療細(xì)菌性疾病埋下了巨大的隱患。
【學(xué)位單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：S941
【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 抗生素在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的使用
    1.2 抗生素與細(xì)菌耐藥
        1.2.1 抗生素作用機(jī)制
        1.2.2 細(xì)菌耐藥機(jī)制
        1.2.3 細(xì)菌耐藥性的遺傳學(xué)機(jī)制
    1.3 耐藥基因的水平傳播
        1.3.1 質(zhì)粒
        1.3.2 轉(zhuǎn)座子
        1.3.3 整合子
    1.4 ISCR2移動(dòng)元件
        1.4.1 ISCR的發(fā)現(xiàn)
        1.4.2 ISCR的特點(diǎn)
        1.4.3 ISCR2簡(jiǎn)介
    1.5 研究目的和意義
第二章 循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中ISCR2基因與細(xì)菌耐藥性的研究
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 樣品采集及細(xì)菌分離
        2.1.2 主要儀器設(shè)備及試劑
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 準(zhǔn)備試驗(yàn)及通用試驗(yàn)
        2.2.2 水樣中可培養(yǎng)耐藥菌比例測(cè)定
        2.2.3 病魚(yú)病灶可培養(yǎng)菌的分離及鑒定
        2.2.4 病魚(yú)病灶分離菌中氟苯尼考耐藥基因的檢測(cè)
        2.2.5 酚氯仿異戊醇法提取Vibrio sp. L-85基因組DNA
        2.2.6 Vibrio sp. L-85基因組DNA測(cè)序
        2.2.7 病魚(yú)病灶分離菌ISCR2基因檢測(cè)
        2.2.8 病魚(yú)病灶分離菌中耐藥菌比例測(cè)定
    2.3 試驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 水樣中可培養(yǎng)耐藥菌的比例
        2.3.2 病魚(yú)病灶分離菌的 16S rRNA鑒定
        2.3.3 病魚(yú)病灶分離菌氟苯尼考耐藥基因檢測(cè)
        2.3.4 Vibrio sp. L-85基因組DNA測(cè)序結(jié)果
        2.3.5 病魚(yú)病灶分離菌中ISCR2基因的分布
        2.3.6 病魚(yú)病灶分離菌抗生素耐藥菌比例
    2.4 討論
第三章 ISCR2元件分布情況及結(jié)構(gòu)多樣性的研究
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 樣品及菌株來(lái)源
        3.1.2 主要儀器設(shè)備及試劑
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 準(zhǔn)備試驗(yàn)及通用試驗(yàn)
        3.2.2 病魚(yú)病灶分離菌ISCR2基因檢測(cè)
        3.2.3 mph-like基因功能驗(yàn)證
        3.2.4 攜帶mph-like基因的病灶分離菌MIC鑒定
        3.2.5 水樣中相關(guān)耐藥基因定量試驗(yàn)
    3.3 試驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 數(shù)據(jù)庫(kù)中ISCR2結(jié)構(gòu)的多樣性
        3.3.2 病灶分離菌中ISCR2結(jié)構(gòu)的多樣性
        3.3.3 mph-like基因的功能驗(yàn)證
        3.3.4 水樣中抗生素基因及ISCR2的相關(guān)性
    3.4 討論
第四章 總結(jié)與討論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)介

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 關(guān)歆;姚國(guó)成;;世界漁業(yè)總產(chǎn)量發(fā)展分析[J];世界農(nóng)業(yè);2013年01期

2 王雪惠;耿緒云;李翔;董學(xué)旺;孫金生;;點(diǎn)帶石斑魚(yú)潰爛病病原菌的分離與鑒定[J];天津農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào);2012年03期

3 陳超;程波;于宏;王印庚;楊志;史成銀;曲江波;趙叢明;徐靜榮;姜卓;;七帶石斑魚(yú)繁殖群體“突眼”癥病原菌的分離與鑒定[J];漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展;2010年01期

4 陳月忠;黃萬(wàn)紅;蔡清海;周宸;楊火盛;;閩南地區(qū)鮑潰爛病的研究[J];福建水產(chǎn);2008年04期

5 王斌;于蘭萍;胡亮;李艷;劉雙鳳;姜志強(qiáng);;紅鰭東方鲀皮膚潰爛病病原菌的分離與鑒定[J];中國(guó)水產(chǎn)科學(xué);2008年02期

6 謝建軍;王印庚;張正;榮小軍;;養(yǎng)殖刺參腐皮綜合征兩種致病菌Dot-ELISA快速檢測(cè)[J];海洋科學(xué);2007年08期

7 張慶華;熊清明;肖琳琳;楊灝;楊先樂(lè);;大黃魚(yú)潰爛癥的一種致病菌——奇異變形桿菌ZXS02菌株[J];水產(chǎn)學(xué)報(bào);2005年06期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 孫鉑光;哈維氏弧菌VHH溶血素作用機(jī)理的研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2009年

本文編號(hào)：2857725