傳染性造血器官壞死(Infectious haematopoietic necrosis,IHN)是由彈狀病毒科,粒外彈狀病毒屬的傳染性造血器官壞死病毒(Infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV)感染引起的,可以感染所有的鮭科魚(yú)類(lèi),是一種急性的具有高度傳染性的病毒性疾病,高致病力毒株對(duì)鮭鱒幼魚(yú)的致死率達(dá)90%以上,該病現(xiàn)已成為世界性鮭鱒魚(yú)病,給鮭鱒養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)重大經(jīng)濟(jì)損失。但目前尚無(wú)治療IHN的有效藥物,疫苗仍是預(yù)防IHNV的最有效手段之一。IHNV的主要抗原蛋白是表面糖蛋白G,含有可誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生免疫中和抗體的中和抗原表位。本實(shí)驗(yàn)利用生物信息學(xué)原理對(duì)其G蛋白基因序列進(jìn)行信號(hào)肽區(qū)、疏水性跨膜區(qū)和抗原表位區(qū)的生物信息學(xué)分析IHNV HLJ-09株,利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)對(duì)G蛋白基因片段進(jìn)行截短重組表達(dá),分析表達(dá)蛋白的免疫原性和誘導(dǎo)虹鱒幼魚(yú)免疫保護(hù)的效果。試驗(yàn)結(jié)果顯示:1.構(gòu)建了pET-28a-dG原核表達(dá)載體,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后,獲得53 kDa的目的蛋白。目的蛋白純化后經(jīng)Western blotting檢測(cè),目的蛋白可與鼠抗IHNV全病毒血清特異性識(shí)別,具有良好的免疫原性。2.利用純化的目的蛋白(dG)制備鼠抗血清,經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)該鼠抗血清均能與重組蛋白和IHNV HLJ-09株反應(yīng),其效價(jià)分別是1:25600和1:1600。利用制備的鼠抗血清進(jìn)行了病毒中和試驗(yàn)測(cè)定,根據(jù)Reed-Muench氏法,得出其中和效價(jià)為1:112,說(shuō)明該鼠抗血清能識(shí)別IHNV并能產(chǎn)生相應(yīng)的中和抗體,具有一定的中和效應(yīng)。3.為分析IHNV dG誘導(dǎo)虹鱒幼魚(yú)的免疫保護(hù)效果,將純化后的目的蛋白與弗氏不完全佐劑乳化后接種虹鱒幼魚(yú),試驗(yàn)分為3組,即滅活疫苗組、重組蛋白組和PBS對(duì)照組,每尾2μg/g魚(yú)體重的劑量進(jìn)行腹腔注射。免疫后的第0、1、2、3、4、5、6周采集魚(yú)血清,檢測(cè)其特異性抗體IgM水平。結(jié)果顯示,免疫后實(shí)驗(yàn)組魚(yú)抗體水平顯著提高(P0.01),并且顯著高于對(duì)照組(P0.01),在免疫后的第四周達(dá)到高峰,隨后下降。在免疫后的第四周進(jìn)行攻毒保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果顯示,滅活疫苗組和重組蛋白組的相對(duì)保護(hù)率分別為62%和60%。以上結(jié)果表明,本研究利用大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的截短IHNV G蛋白,能夠作為IHNV亞單位疫苗的候選免疫原,可誘導(dǎo)虹鱒幼魚(yú)產(chǎn)生中和抗體,抵抗IHNV的攻擊,為進(jìn)一步研究IHNV的亞單位疫苗奠定了一定理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：S941.414
【部分圖文】：

類(lèi)地位及生物學(xué)特征類(lèi)委員會(huì)（ICTV）對(duì)彈狀病毒描述，IHNV屬于代表，與它同屬的還有病毒性出血敗血癥病毒V）、蛇頭魚(yú)彈狀病毒（Snakehead rhabdovirus,SHvirus,HIRRV），它們的共同特征是在糖蛋白和聚粒外彈狀病毒屬的一個(gè)獨(dú)特的、非結(jié)構(gòu)蛋白，因科，粒外彈狀病毒屬（Novirhabdovirus）的成員[2M、N 和 L 五種結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)和一種非結(jié)構(gòu)蛋白（磷酸化蛋白，糖蛋白，膜基質(zhì)蛋白，核衣殼蛋白成病毒的外形，圓柱形核衣殼螺旋形成二十面體×60~100 nm，核心直徑 60 nm，軸孔直徑 20 nm狀突起，有囊膜和膜粒。由核衣殼、膜蛋白、囊本結(jié)構(gòu)，如圖 1-1 所示。核糖核蛋白（RNP）復(fù)和聚合酶大蛋白三者與病毒的 RNA 之間的相互契和表達(dá)的模板被酶降解，保證了遺傳信息得以正確

經(jīng)常不被研究者使用。而大鱗大馬哈魚(yú)胚胎細(xì)胞系（CHSE-214）、鯉細(xì)胞系（EPC）具有繁殖快，對(duì)環(huán)境的敏感度小等特點(diǎn)而被廣泛的應(yīng)用，并產(chǎn)生細(xì)應(yīng)（cytopathic effect，CPE）。CPE特征為細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)呈顆粒狀、邊緣化，核膜變大；最后細(xì)胞崩解成細(xì)胞碎片[31]。IHNV的最適生長(zhǎng)溫度為14~16℃[20]。在IHNV-214細(xì)胞有很強(qiáng)的適應(yīng)性，在CHSE-214細(xì)胞上能夠快速的繁殖，僅4個(gè)小時(shí)即可增殖的16 h內(nèi)呈指數(shù)生長(zhǎng)，最后生長(zhǎng)到達(dá)平穩(wěn)期[32]。 IHNV 的基因組結(jié)構(gòu)HNV是基因組大小約為11131 bp的單股負(fù)鏈不分節(jié)段的RNA病毒，由磷酸化蛋白P、、膜基質(zhì)蛋白M、核衣殼蛋白N和RNA聚合酶大蛋白L五種結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)和一種獨(dú)特的白（NV）組成�；蚪M由各蛋白基因緊密相連，其各蛋白基因的連接順序?yàn)?’端白-磷酸化蛋白-膜基質(zhì)蛋白-糖蛋白-NV-聚合酶大蛋白-5’端。其基因組的結(jié)構(gòu)模式，所示，有約60個(gè)堿基組成的基因短序列在3’端形成，此基因短序列是不被翻譯的前導(dǎo)前導(dǎo)區(qū)含有上游RNA轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)和下游基因轉(zhuǎn)錄起始信號(hào)，緊隨其后的為基因編因連接區(qū)，最后為基因的5’端，在5’端還有一個(gè)約101個(gè)堿基的短序列[33]，此段短序游基因轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)和多聚腺苷酸化信號(hào)[33]。

東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)碩士學(xué)位論文分析HLJ-09 株 G 截短基因片段的選擇MHMM Server v.2 軟件對(duì) IHNV HLJ-09 株 G 基因片段跨膜區(qū)的84-1836 位氨基酸之間存在一個(gè)跨膜螺旋區(qū)，跨膜區(qū)屬于疏水的形成都是在由親水性氨基酸為基礎(chǔ)的，疏水區(qū)則會(huì)對(duì)其有影響達(dá)，因此要避開(kāi)此區(qū)域。
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李勝利;于向東;王偉杰;胡益源;;采用狂犬病毒G基因原核表達(dá)的間接ELISA方法[J];鄭州輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2014年04期

2 朱明武;徐國(guó)超;李?yuàn)檴?朱明文;;人類(lèi)白細(xì)胞抗原G基因多態(tài)性在臨床疾病中的意義[J];東南國(guó)防醫(yī)藥;2018年01期

3 楊健;張紅普;章民;李曉寧;何曉霞;謝琳娟;陸專(zhuān)靈;韋顯凱;唐海波;羅廷榮;;廣西流行狂犬病毒糖蛋白基因的遺傳性分析[J];南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2012年10期

4 張巍;王麗;孫晨;孫秀萍;蘇高莉;趙魁;陳克研;宋德光;;水泡性口炎病毒糖蛋白主要抗原決定區(qū)片段基因的原核表達(dá)和純化[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2011年04期

5 周松峰;廖文軍;覃紹敏;袁書(shū)智;白安斌;吳健敏;;抗人紅細(xì)胞單鏈抗體與狂犬病毒G蛋白雙功能融合蛋白的構(gòu)建及生物學(xué)活性檢測(cè)[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2012年06期

6 吳建華;張園;郭乃鳳;曹英杰;陳曉嵐;范亞平;;腹膜透析相關(guān)性腹膜炎與C反應(yīng)蛋白啟動(dòng)子區(qū)-717A>G基因多態(tài)性的關(guān)系[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2017年10期

7 熊成龍;姜仁杰;姚文榮;陳胤忠;沈進(jìn)進(jìn);李明慧;盧思奇;董關(guān)木;張永振;;鹽城市狂犬病毒核蛋白及糖蛋白基因序列分析[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2007年06期

8 孟勝利;徐葛林;吳杰;王定明;嚴(yán)家新;楊曉明;;中國(guó)12株狂犬病街毒株G基因序列測(cè)定與分析[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2009年06期

9 明平剛;徐葛林;嚴(yán)家新;吳杰;明賀田;周敦金;肖奇友;楊曉明;;新分離5株狂犬病病毒街毒株N和G基因的序列分析[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2007年08期

10 張永振;熊成龍;鄒洋;王定明;余春;周敬祝;王昭孝;張永榮;;貴州省安龍縣狂犬病的流行病學(xué)研究[J];Virologica Sinica;2006年04期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前6條

1 王艷雪;傳染性造血器官壞死病毒G基因截短原核表達(dá)及其免疫原性研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2019年

2 南松劍;廣西狂犬病野毒株N和G基因的克隆與序列分析[D];廣西大學(xué);2003年

3 劉延亭;狂犬病毒N蛋白和G蛋白的基因結(jié)構(gòu)分析及N蛋白的原核表達(dá)[D];中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;2007年

4 龔文杰;我國(guó)狂犬病病毒株的分離鑒定及其G基因系統(tǒng)發(fā)生分析[D];吉林大學(xué);2008年

5 潘艷;狂犬病病毒ERA株糖蛋白全基因、G基因部分片段缺失表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá)初探[D];廣西大學(xué);2004年

6 劉浩;湖南湘西地區(qū)犬狂犬病的流行病學(xué)研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

本文編號(hào)：2850987