發(fā)布時(shí)間：2020-10-13 01:29

　　 嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)是導(dǎo)致淡水魚(yú)類細(xì)菌性敗血癥的主要病原,廣泛存在于世界各地,流行地域廣、感染種類多,對(duì)不同生長(zhǎng)階段的魚(yú)類均致病。因發(fā)病周期長(zhǎng)、致死率高,往往給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。多年來(lái),抗菌素一直是漁業(yè)生產(chǎn)中防治病害發(fā)生的主要手段,也對(duì)水產(chǎn)品安全和環(huán)境安全帶來(lái)威脅。目前,替代抗菌素的水產(chǎn)益生菌應(yīng)用已成為水產(chǎn)動(dòng)物病害防控的研究熱點(diǎn)和期望,水產(chǎn)動(dòng)物腸道微生物菌群是開(kāi)發(fā)益生菌重要的來(lái)源之一,具有很好的研究前景。本研究采集養(yǎng)殖水域中患不同程度細(xì)菌性敗血癥的草魚(yú)(Ctenopharyngodon idellus),在病原菌分離、鑒定的基礎(chǔ)上,研究發(fā)病不同程度草魚(yú)組織中致病菌感染量、腸道菌群結(jié)構(gòu)變化,探討致病菌與腸道菌群種類、數(shù)量之間的關(guān)系;進(jìn)一步通過(guò)人工長(zhǎng)期感染該致病菌,弄清草魚(yú)腸道優(yōu)勢(shì)菌群變化規(guī)律與致病菌數(shù)量的關(guān)系,試圖發(fā)現(xiàn)草魚(yú)腸道菌群中拮抗致病菌的有益菌,為開(kāi)發(fā)草魚(yú)專用抗病有益菌提供基礎(chǔ)。獲得研究結(jié)果主要為:1.患病草魚(yú)致病菌的分離、鑒定:從漢中市水產(chǎn)實(shí)驗(yàn)站采集患病草魚(yú),通過(guò)無(wú)菌操作從病灶初步分離得到3株不同形態(tài)的細(xì)菌,其中ZB-1編號(hào)菌株數(shù)量最多,對(duì)草魚(yú)的回感攻毒試驗(yàn)中ZB-1菌株致死率為90%,其余2株很低,確定ZB-1菌株為目標(biāo)菌株,經(jīng)生理生化試驗(yàn)和16S rRNA基因序列比對(duì),鑒定病原菌為嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)。2.患病草魚(yú)腸道菌群結(jié)構(gòu)研究:實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)草魚(yú)組織中致病菌的感染量,對(duì)采集的9尾病魚(yú)進(jìn)行致病菌感染量分析并分為A、B、C三組。通過(guò)Illumina MiSeq測(cè)序系統(tǒng)檢測(cè)草魚(yú)腸道菌群結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)隨著A、B、C三組草魚(yú)腎致病菌感染量的逐漸增加,門(mén)水平上的主要優(yōu)勢(shì)菌門(mén)厚壁菌門(mén)(Firmicutes)所占的比例下降了20%左右,變形菌門(mén)(Proteobacteria)所占的比例下降了10%左右,梭桿菌門(mén)(Fusobacteria)呈現(xiàn)明顯的上升趨勢(shì),平均升高了近20%。屬水平上的主要優(yōu)勢(shì)菌屬芽孢桿菌屬(Bacillus)和假單胞菌屬(Pseudomonas)所占的比例都平均下降10%左右,鯨桿菌屬(Cetobacterium)所占比例呈現(xiàn)明顯的上升趨勢(shì),平均升高了近20%。3.人工感染嗜水氣單胞菌草魚(yú)腸道菌群結(jié)構(gòu)變化研究:3個(gè)不同濃度致病菌長(zhǎng)時(shí)間浸泡感染草魚(yú),在3 d、6 d、9 d、12 d、15 d取得樣品。通過(guò)MiSeq測(cè)序系統(tǒng)檢測(cè)草魚(yú)腸道菌群結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)在門(mén)水平上,感染3d時(shí),處理組厚壁菌門(mén)所占比例與對(duì)照相比均下降了約15%,而后均隨時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)上升趨勢(shì);變形菌門(mén)所占比例從整體來(lái)講,處理組均比對(duì)照要低;梭桿菌門(mén)所占比例在感染3d時(shí)與對(duì)照相比,有5%~30%的上升,之后達(dá)到最高后再降低。屬水平上,感染3d時(shí),處理組芽孢桿菌屬所占比例與對(duì)照相比均有15%~20%降低,而后均隨時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)上升趨勢(shì);與對(duì)照相比,假單胞菌屬和乳球菌屬所占比例隨時(shí)間的延長(zhǎng)均呈上升趨勢(shì),相反氣單胞菌屬(Aeromonas)所占比例有15%~20%的大幅下降;處理組鯨桿菌屬所占比例在感染3d時(shí)與對(duì)照相比,有10%~30%的上升,之后達(dá)到最高后再降低。以上結(jié)果表明,當(dāng)受到嗜水氣單胞菌感染時(shí),草魚(yú)腸道菌群中的主要優(yōu)勢(shì)菌門(mén)厚壁菌門(mén)和變形菌門(mén)所占比例均會(huì)隨致病菌感染量的升高而降低,梭桿菌門(mén)所占比例會(huì)上升;主要優(yōu)勢(shì)菌屬芽孢桿菌屬所占比例會(huì)隨致病菌感染量的升高而降低,鯨桿菌屬所占比例會(huì)升高,氣單胞菌屬所占比例會(huì)下降。
【學(xué)位單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類】：S943
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 嗜水氣單胞菌的危害及疾病控制方法
        1.1.1 嗜水氣單胞菌的危害
        1.1.2 疾病的控制方法
    1.2 魚(yú)類腸道菌群的形成與作用
        1.2.1 魚(yú)類腸道菌群的形成與分布
        1.2.2 腸道菌群的營(yíng)養(yǎng)作用
        1.2.3 腸道菌群的屏障作用
    1.3 水產(chǎn)病原菌拮抗菌的研究
    1.4 本研究的目的意義
第二章 患病草魚(yú)致病菌的分離、鑒定
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 試驗(yàn)試劑
        2.1.3 試驗(yàn)儀器
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 致病菌株的分離純化
        2.2.2 分離菌株的回感試驗(yàn)
        2.2.3 致病菌的生理生化試驗(yàn)
        2.2.4 致病菌的分子生物學(xué)鑒定
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 致病菌的分離
        2.3.2 分離菌株致病性的確定
        2.3.3 致病菌的生理生化特性
        2.3.4 16S rRNA基因測(cè)序結(jié)果
        2.3.5 系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)的構(gòu)建
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 患病草魚(yú)腸道菌群結(jié)構(gòu)研究
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 試驗(yàn)試劑
        3.1.3 試驗(yàn)儀器
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 樣品采集
        3.2.2 組織中致病菌感染量檢測(cè)
        3.2.3 腸道菌群DNA提取與 16S rRNA基因擴(kuò)增
        3.2.4 Illumina MiSeq高通量測(cè)序
        3.2.5 高通量測(cè)序數(shù)據(jù)處理與分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 組織中致病菌感染量
        3.3.2 MiSeq測(cè)序質(zhì)量評(píng)估
        3.3.3 腸道菌群豐富度和Alpha多樣性指數(shù)
        3.3.4 腸道菌群群落結(jié)構(gòu)多樣性
        3.3.5 腸道菌群Beta多樣性分析
        3.3.6 腸道菌群群落物種豐度圖
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 人工感染嗜水氣單胞菌草魚(yú)腸道菌群結(jié)構(gòu)變化研究
    4.1 試驗(yàn)材料
        4.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.2 試驗(yàn)試劑
        4.1.3 試驗(yàn)儀器
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 嗜水氣單胞菌ZB-1 培養(yǎng)與計(jì)數(shù)
        4.2.2 嗜水氣單胞菌感染草魚(yú)與樣品采集
        4.2.3 腎臟中致病菌感染量檢測(cè)
        4.2.4 腸道菌群DNA提取與 16S rRNA基因擴(kuò)增
        4.2.5 Illumina MiSeq高通量測(cè)序
        4.2.6 高通量測(cè)序數(shù)據(jù)處理與分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 草魚(yú)腎臟中致病菌感染量
        4.3.2 MiSeq測(cè)序質(zhì)量評(píng)估
        4.3.3 樣本菌群豐富度和Alpha多樣性指數(shù)
        4.3.4 腸道菌群群落結(jié)構(gòu)多樣性
        4.3.5 腸道菌群Beta多樣性分析
        4.3.6 腸道菌群群落物種豐度圖
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊廣,余文斌,劉金蘭,張定國(guó),郭增兵;嗜水氣單胞菌適宜pH值和溫度的測(cè)定[J];內(nèi)陸水產(chǎn);2000年08期

2 周煜華;甲魚(yú)嗜水氣單胞菌的分離與鑒定[J];中國(guó)獸醫(yī)科技;2001年12期

3 郭闖,王永坤;嗜水氣單胞菌研究進(jìn)展[J];水產(chǎn)科學(xué);2003年06期

4 儲(chǔ)衛(wèi)華,于勇;鱘魚(yú)嗜水氣單胞菌的分離與鑒定[J];淡水漁業(yè);2003年02期

5 李明杰,王志國(guó);泰國(guó)灣鱷嗜水氣單胞菌感染[J];畜牧與獸醫(yī);2003年04期

6 鄭偉,盧強(qiáng),韓文瑜,張雅斌,劉艷輝;耐喹諾酮類藥物嗜水氣單胞菌的分離鑒定及電鏡觀察[J];水產(chǎn)科學(xué);2004年04期

7 方光遠(yuǎn),晏文梅,張志成;1株甲魚(yú)嗜水氣單胞菌的分離和鑒定[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2004年11期

8 龔新勇,歐陽(yáng)歲東,主性;魚(yú)嗜水氣單胞菌疫苗研究進(jìn)展[J];貴州畜牧獸醫(yī);2004年03期

9 張海賓;楊桂芳;;12種中草藥對(duì)嗜水氣單胞菌殺傷能力的研究[J];水產(chǎn)科學(xué);2006年01期

10 吳會(huì)民;林文輝;石存斌;;嗜水氣單胞菌研究概述[J];河北漁業(yè);2007年03期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前8條

1 朱大玲;嗜水氣單胞菌毒力基因及基因工程疫苗[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（水生生物研究所）;2006年

2 盧春霞;復(fù)方植物提取物對(duì)嗜水氣單胞菌抑菌作用的研究[D];江南大學(xué);2011年

3 付立霞;嗜水氣單胞菌非質(zhì)粒依賴性菌蛻疫苗的研制及評(píng)價(jià)[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

4 儲(chǔ)衛(wèi)華;嗜水氣單胞菌侵襲機(jī)制及其胞外蛋白酶的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2002年

5 胡風(fēng)慶;嗜水氣單胞菌聚羥基脂肪酸酯（PHA）合成調(diào)控的初步研究[D];沈陽(yáng)藥科大學(xué);2005年

6 宋學(xué)宏;嗜水氣單胞菌誘導(dǎo)的草魚(yú)腸道炎癥機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2015年

7 羅曉松;魚(yú)源嗜水氣單胞菌aopB~- aopD~- aroA~-缺失株構(gòu)建及其生物學(xué)特性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

8 肖鵬;魚(yú)類疫苗的研究：Ⅰ：海水魚(yú)類病原菌乳化口服疫苗的研究；Ⅱ：遲緩愛(ài)德華氏菌和嗜水氣單胞菌外膜蛋白疫苗的研究[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 姜艷麗;嗜水氣單胞菌毒力基因檢測(cè)及其在錦鯉組織中的分布研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

2 史雪燦;嗜水氣單胞菌脅迫下東北林蛙TLR4信號(hào)通路相關(guān)分子的表達(dá)研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

3 龔雨鑫;嗜水氣單胞菌碳納米管載亞單位疫苗的研制及免疫效果評(píng)價(jià)[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

4 邰光富;嗜水氣單胞菌胞內(nèi)存活相關(guān)基因鑒定及功能研究[D];集美大學(xué);2013年

5 陳文博;嗜水氣單胞菌在巨噬細(xì)胞內(nèi)存活的相關(guān)基因及其功能研究[D];集美大學(xué);2012年

6 溫振才;鯉魚(yú)iNOS全長(zhǎng)cDNA的獲得及在感染條件下的差異表達(dá)分析[D];吉林大學(xué);2016年

7 李碗芯;浮游態(tài)和生物被膜狀態(tài)嗜水氣單胞菌對(duì)四環(huán)素耐藥相關(guān)蛋白的研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2016年

8 李東亮;感染嗜水氣單胞菌草魚(yú)腸道菌群結(jié)構(gòu)研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

9 張星;抗獨(dú)特型單克隆抗體制備的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

10 王春瑞;嗜水氣單胞菌的分子流行病學(xué)調(diào)查及其兩種分型方法的研究[D];寧波大學(xué);2011年

本文編號(hào)：2838551