中國大鯢(Andriasdavidianus)是我國特有的珍稀動物。作為一種較為原始的兩棲類動物,大鯢身體結(jié)構(gòu)體現(xiàn)出從水生脊椎動物到陸生脊椎動物的過渡性,具有重要的研究價(jià)值。同時(shí)大鯢營養(yǎng)豐富,相關(guān)制品可以入藥,具有很高的食用和藥用價(jià)值。目前對大鯢的已有研究主要集中在形態(tài)解剖學(xué)和分子遺傳學(xué)方面,蛋白質(zhì)組學(xué)研究較少。肝臟是生物體內(nèi)重要的器官,在物質(zhì)代謝、免疫、膽汁的合成與分泌及造血儲血等方面發(fā)揮不可替代的作用。其細(xì)胞主要有肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞、肝竇內(nèi)皮細(xì)胞、枯否細(xì)胞和星狀細(xì)胞等,是肝臟功能的基礎(chǔ)。蛋白質(zhì)組學(xué)作為近年來新興的生物學(xué)分支,采用高通量分離和鑒定蛋白質(zhì)的技術(shù),被廣泛應(yīng)用于各類生物領(lǐng)域研究。肝臟的蛋白質(zhì)組學(xué)研究是目前研究熱點(diǎn)與重點(diǎn),“人類肝臟蛋白質(zhì)組計(jì)劃”是我國科學(xué)家領(lǐng)導(dǎo)的第一個(gè)重大國際科研協(xié)作項(xiàng)目,目前已經(jīng)取得了豐碩成果。本課題以大鯢的正常肝臟為研究對象,以雙向電泳和質(zhì)譜鑒定技術(shù)為基礎(chǔ),結(jié)合同位素標(biāo)記相對和絕對定量技術(shù),在大鯢肝臟中共鑒定出2751種蛋白,建立了大鯢肝臟蛋白表達(dá)譜,整合了蛋白的表達(dá)豐度等數(shù)據(jù),通過IPA軟件和相關(guān)網(wǎng)站對所得蛋白數(shù)據(jù)進(jìn)行生物信息學(xué)分析,共從以下四個(gè)生理活動討論了大鯢肝臟中代謝相關(guān)的蛋白:(1)糖代謝相關(guān):直接參與糖代謝的蛋白共檢出98種,涉及單糖代謝、糖原代謝、糖蛋白代謝、糖脂代謝、脂多糖代謝、糖胺聚糖代謝和其它相應(yīng)糖代謝活動。參與調(diào)節(jié)對應(yīng)生理活動信號通路的蛋白有197種,涉及AMPK、HER-2、HIF、p53、PKA和PPAR通路。(2)脂代謝相關(guān):直接參與脂代謝的蛋白共檢出122種,涉及脂肪酸代謝、甘油三酯代謝、磷脂代謝、糖脂代謝、膽固醇代謝活動。參與調(diào)節(jié)對應(yīng)生理活動信號通路的蛋白有185種,涉及AHR、AMPK、DAR、PKA、PPAR和S1P通路。(3)蛋白質(zhì)和氨基酸代謝相關(guān):直接參與蛋白質(zhì)和氨基酸代謝的蛋白共檢出335種,涉及氨基酸及其衍生物代謝、蛋白酶的作用、溶酶體酶的作用、蛋白酶體酶的作用和其它相關(guān)活動。調(diào)節(jié)氨基酸及其衍生物代謝的AHR信號通路涉及44種蛋白。(3)核酸代謝相關(guān)蛋白:直接參與核酸代謝的蛋白共檢出188種,涉及嘌呤核苷酸代謝、嘧啶核苷酸代謝、DNA代謝和RNA代謝活動。參與調(diào)節(jié)對應(yīng)生理活動信號通路的蛋白有30種,涉及ATM、SAPK/JNK、serotonin受體通路。相應(yīng)的蛋白功能和軟件分析證明大鯢肝臟中糖、脂代謝活動較強(qiáng),蛋白質(zhì)和氨基酸代謝中除蛋白酶作用外其余活動均較弱,核酸代謝中核苷酸代謝活動較強(qiáng)。研究結(jié)果表明,大鯢肝臟中蛋白質(zhì)的功能與肝臟整體功能相一致。但通過分析可知大鯢肝臟與目前所公認(rèn)的高等動物肝臟功能存在差異。這也從蛋白質(zhì)組學(xué)角度證明了大鯢在進(jìn)化中處于較原始的地位。
【學(xué)位單位】：河南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：S917.4
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 中國大鯢的研究進(jìn)展
        1.1.1 中國大鯢形態(tài)特征
        1.1.2 中國大鯢的生活習(xí)性
        1.1.3 中國大鯢的研究
    1.2 肝臟蛋白組學(xué)研究進(jìn)展
        1.2.1 肝臟的結(jié)構(gòu)與功能
        1.2.2 蛋白質(zhì)組學(xué)研究
        1.2.3 肝臟蛋白質(zhì)組學(xué)研究
    1.3 本論文的研究目的和意義
        1.3.1 本論文的研究目的
        1.3.2 本論文的研究意義
    參考文獻(xiàn)
第二章 材料與方法
    2.1 中國大鯢的飼養(yǎng)
    2.2 大鯢組織器官的取材
    2.3 組織器官的蛋白樣品制備
    2.4 溶液中的蛋白定量
    2.5 基質(zhì)上的蛋白定量：灰度掃描法
    2.6 蛋白的同位素標(biāo)記
    2.7 蛋白的雙向電泳
    2.8 蛋白質(zhì)的定性分析
        2.8.1 2D/MS法
        2.8.2 iTRAQ法
    2.9 2D/MS和ITRAQ的定量檢測數(shù)據(jù)整合
    2.10 蛋白的平均表達(dá)豐度確定
    2.11 ratio值的算法和意義
    2.12 生理活動及其相關(guān)蛋白的確認(rèn)
    2.13 生理活動相關(guān)信號通路及其蛋白的確認(rèn)
    2.14 蛋白表達(dá)變化預(yù)示的生理活動和信號通路活性分析（Ⅰ）：IPA分析
    2.15 蛋白表達(dá)變化預(yù)示的生理活動和信號通路活性分析（Ⅱ）：蛋白的協(xié)同作用（E_P）分析
    參考文獻(xiàn)
第三章 研究結(jié)果
    3.1 中國大鯢肝臟糖代謝相關(guān)蛋白（酶）的表達(dá)
        3.1.1 中國大鯢肝臟中糖代謝相關(guān)蛋白（酶）表達(dá)豐度和ratio值
        3.1.2 中國大鯢肝臟中糖代謝相關(guān)蛋白（酶）表達(dá)模式
        3.1.3 中國大鯢肝臟中糖代謝相關(guān)蛋白（酶）表達(dá)情況預(yù)示的糖代謝活動及調(diào)節(jié)它們的信號通路活性
    3.2 中國大鯢肝臟脂代謝相關(guān)蛋白（酶）的表達(dá)
        3.2.1 中國大鯢肝臟中脂代謝相關(guān)蛋白（酶）表達(dá)豐度和ratio值
        3.2.2 中國大鯢肝臟中脂代謝相關(guān)蛋白（酶）表達(dá)模式
        3.2.3 中國大鯢肝臟中脂代謝相關(guān)蛋白（酶）表達(dá)情況預(yù)示的脂代謝活動及調(diào)節(jié)它們的信號通路活性
    3.3 中國大鯢肝臟蛋白質(zhì)和氨基酸代謝相關(guān)蛋白（酶）的表達(dá)
        3.3.1 中國大鯢肝臟中蛋白質(zhì)和氨基酸代謝相關(guān)蛋白（酶）表達(dá)豐度及ratio值
        3.3.2 中國大鯢肝臟中蛋白質(zhì)和氨基酸代謝相關(guān)蛋白（酶）表達(dá)模式
        3.3.3 中國大鯢肝臟中蛋白質(zhì)和氨基酸代謝相關(guān)蛋白（酶）表達(dá)情況預(yù)示的蛋白質(zhì)和氨基酸代謝活動及調(diào)節(jié)它們的信號通路活性
    3.4 中國大鯢肝臟核酸代謝相關(guān)蛋白（酶）的表達(dá)
        3.4.1 中國大鯢肝臟中核酸代謝相關(guān)蛋白（酶）表達(dá)豐度和ratio值
        3.4.2 中國大鯢肝臟中核酸代謝相關(guān)蛋白（酶）表達(dá)模式
        3.4.3 中國大鯢肝臟中核酸代謝相關(guān)蛋白（酶）表達(dá)情況預(yù)示的核酸代謝活動及調(diào)節(jié)它們的信號通路活性
第四章 討論
    4.1 中國大鯢肝臟的糖代謝活性與效應(yīng)
    4.2 中國大鯢肝臟的脂代謝活性與效應(yīng)
    4.3 中國大鯢肝臟的蛋白質(zhì)和氨基酸代謝活性與效應(yīng)
    4.4 中國大鯢肝臟的核酸代謝活性與效應(yīng)
    參考文獻(xiàn)
結(jié)論
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間參加的科研項(xiàng)目和已發(fā)表論文

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2836543