本文研究發(fā)酵海帶對刺參的飼養(yǎng)效果,通過分析發(fā)酵海帶蛋白含量的變化、發(fā)酵海帶作為刺參飼料和飼料中添加殼寡糖對刺參生存與生長、消化酶活性及消化道菌群結(jié)構(gòu)、刺參非特異性免疫機能等方面的影響來評價發(fā)酵海帶作為刺參飼料的營養(yǎng)價值與開發(fā)前景,除此之外,文中還就發(fā)酵海帶的條件優(yōu)化、海洋酵母的篩選鑒定等內(nèi)容進行闡述,具體研究結(jié)果如下:1、人為添加枯草芽孢桿菌進行海帶發(fā)酵,其適宜發(fā)酵溫度為30℃、適宜發(fā)酵時間為96 h,接種劑量為12%(w/v,108 cfu/m L),發(fā)酵后海帶的粗蛋白含量為14.65%,相對提高15.17%。配合飼料中添加30%的發(fā)酵海帶喂養(yǎng)刺參,在36 d飼養(yǎng)時間內(nèi)能顯著提高刺參特定生長率、血淋巴液溶菌活性、總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、酸性磷酸酶活性(ACP)、蛋白酶活性和淀粉酶活性(P0.05),但是對刺參體腔細胞數(shù)、纖維素酶活性無顯著影響(P0.05)。此外,投喂發(fā)酵飼料還可見刺參消化道異養(yǎng)菌總數(shù)、弧菌相對數(shù)量降低、芽孢桿菌相對數(shù)量升高等現(xiàn)象:異養(yǎng)菌總數(shù)由3.23×106 cfu.ɡ-1減少至2.86×106cfu.ɡ-1,弧菌相對數(shù)量由36.68%降低為26.82%,芽孢桿菌由8.92%升至15.01%。2、以黑曲霉發(fā)酵海帶,適宜發(fā)酵溫度為34℃,發(fā)酵時間120 h,接種劑量10%(w/v,108 cfu/m L),發(fā)酵后海帶的粗蛋白含量為16.53%,相對提高27.64%。配合飼料中添加30%的發(fā)酵海帶喂養(yǎng)刺參,在36 d的試驗性養(yǎng)殖時間內(nèi)能顯著提高刺參特定生長率、血淋巴液溶菌活性、總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、酸性磷酸酶(ACP)活性、蛋白酶活性和淀粉酶活性(P0.05),但是對刺參體腔細胞數(shù)、纖維素酶活性無顯著影響(P0.05)。此外,投喂發(fā)酵飼料使刺參腸道異養(yǎng)菌總數(shù)、弧菌占總菌數(shù)比例低于原有水平。異養(yǎng)菌總數(shù)由3.23×106 cfu.ɡ-1減少至2.76×106 cfu.ɡ-1;弧菌相對數(shù)量由36.68%降低為29.12%。3、從自然海水中和刺參腸道中分離、篩選出6株酵母菌,運用生理生化和分子生物學方法對其進行鑒定,結(jié)果是:HS-1為漢遜德巴利酵母(Debaryomyces hansenii),HS-2為釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),H-4為膠紅酵母(Rhodotorula mucilaginosa),H-5為雙倒卵形紅冬孢酵母(Rhodosporidium diobovatum),H-10為中國漢納酵母(Hannaella sinensis),H-12為海濱紅酵母(Rhodotorula marina);采用凱氏定氮法測定其粗蛋白含量等指標,結(jié)果顯示:HS-1的生物量(g/L)及蛋白質(zhì)含量(w/w)分別為5.95、33.131,HS-2分別為6.22、35.972,H-4分別為4.45、44.424,H-5分別為5.82、50.674,H-10分別為4.65、44.381,H-12為4.35、44.871,其中H-5的粗蛋白含量顯著高于其他菌株(P0.05)。選取雙倒卵形紅冬孢酵母發(fā)酵海帶,經(jīng)測定,其粗蛋白含量為14.51%,相對提高11.50%。配合飼料中添加30%的發(fā)酵海帶喂養(yǎng)刺參,在36 d的試驗期限內(nèi)刺參特定生長率、體腔液溶菌活性、總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、酸性磷酸酶(ACP)活性、蛋白酶活性和淀粉酶活性皆有顯著提高(P0.05),但是刺參體腔液中血淋巴細胞數(shù)量、纖維素酶活性并無顯著變化(P0.05),刺參腸道異養(yǎng)菌總數(shù)及弧菌所占比例則有所下降。異養(yǎng)菌總數(shù)由3.23×106 cfu.ɡ-1減少至2.81×106 cfu.ɡ-1;弧菌相對數(shù)量由36.68%降低為31.04%。4、在刺參基礎(chǔ)飼料中分別添加0.5%、0.75%、1.0%、1.5%商品殼寡糖(青島博智匯力生物科技有限公司,分子量3000,純度97%)和1.0%自制殼寡糖進行刺參喂養(yǎng)試驗,結(jié)果顯示:飼料中添加殼寡糖能顯著提高刺參特定生長率、體腔液溶菌活性、總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、酸性磷酸酶(ACP)活性、蛋白酶活性和淀粉酶活性(P0.05),但是,對刺參體腔液中的血淋巴細胞數(shù)量、纖維素酶活性等生理生化指標無顯著影響(P0.05),對刺參腸道異養(yǎng)菌、弧菌甚至是枯草芽孢桿菌則有抑制作用,弧菌、枯草芽孢桿菌分別在0.5%和1.0%濃度的培養(yǎng)液中不能繼續(xù)增殖。從上述檢測指標中還發(fā)現(xiàn):購自于青島博智匯力生物科技有限公司的殼寡糖在刺參飼料中的添加量達到0.75%時使用效果最顯著;飼料中添加自制殼寡糖與商品殼寡糖喂養(yǎng)效果差異不大。綜合上述可見,枯草芽孢桿菌、黑曲霉、海洋酵母發(fā)酵海帶以及飼料中添加殼寡糖喂養(yǎng)刺參均能促進刺參生長,提高免疫酶活性和消化酶活性,并且能夠降低腸道異養(yǎng)菌總數(shù)和弧菌比例。此外,殼寡糖對枯草芽孢桿菌和弧菌均有抑制作用。
【學位單位】：集美大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2015
【中圖分類】：S968.9
【文章目錄】：
中文摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 刺參概述
        1.1.1 刺參自然資源狀況
        1.1.2 刺參養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀
        1.1.3 刺參飼料的發(fā)展歷程
        1.1.4 刺參營養(yǎng)需求的研究進展
        1.1.5 刺參飼料的種類
    1.2 海帶簡介
        1.2.1 海帶營養(yǎng)價值
        1.2.2 海帶在水產(chǎn)飼料中的應(yīng)用
    1.3 微生物發(fā)酵飼料
        1.3.1 微生物發(fā)酵飼料的概念
        1.3.2 發(fā)酵工藝
        1.3.3 發(fā)酵菌種
        1.3.4 微生物發(fā)酵飼料的優(yōu)點
        1.3.5 微生物發(fā)酵飼料在水產(chǎn)動物中的應(yīng)用
    1.4 海洋酵母
        1.4.1 海洋酵母的概念及其營養(yǎng)成分
        1.4.2 海洋酵母在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用
    1.5 殼寡糖
        1.5.1 殼寡糖的生物功能
        1.5.2 殼寡糖在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用
    1.6 本項目的意義
第2章 枯草芽孢桿菌發(fā)酵海帶在刺參養(yǎng)殖中的應(yīng)用
    2.1 材料
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗用發(fā)酵微生物
        2.1.3 實驗用主要藥品及試劑
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 發(fā)酵微生物菌種準備
        2.2.2 海帶發(fā)酵條件的優(yōu)化
        2.2.3 刺參養(yǎng)殖試驗
        2.2.4 發(fā)酵樣品制備
        2.2.5 養(yǎng)殖試驗樣品采集與處理
        2.2.6 發(fā)酵樣品粗蛋白測定
        2.2.7 體腔液蛋白含量測定
        2.2.8 刺參生長率測定
        2.2.9 免疫相關(guān)指標測定
        2.2.10 消化酶活性測定方法
        2.2.11 刺參腸道主要菌群數(shù)量分析
    2.3 數(shù)據(jù)處理與分析
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 發(fā)酵條件對發(fā)酵海帶的影響
        2.4.2 枯草芽孢桿菌發(fā)酵海帶正交試驗
        2.4.3 枯草芽孢桿菌發(fā)酵海帶對刺參生長率的影響
        2.4.4 枯草芽孢桿菌發(fā)酵海帶對刺參免疫活性的影響
        2.4.5 枯草芽孢桿菌發(fā)酵海帶對刺參消化酶活性的影響
        2.4.6 枯草芽孢桿菌發(fā)酵海帶對刺參腸道菌群的影響
    2.5 討論
        2.5.1 枯草芽孢桿菌發(fā)酵海帶對其粗蛋白含量的影響
        2.5.2 枯草芽孢桿菌發(fā)酵海帶對刺參生長率的影響
        2.5.3 枯草芽孢桿菌發(fā)酵海帶對刺參非特異性免疫的影響
        2.5.4 枯草芽孢桿菌發(fā)酵海帶對刺參消化酶活性的影響
        2.5.5 枯草芽孢桿菌對刺參腸道菌群的影響
    2.6 小結(jié)
第3章 黑曲霉發(fā)酵海帶在刺參養(yǎng)殖中的應(yīng)用
    3.1 材料
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗用發(fā)酵微生物
        3.1.3 主要實驗藥品及試劑
        3.1.4 主要儀器設(shè)備
    3.2 方法
        3.2.1 發(fā)酵微生物菌種準備
        3.2.2 海帶發(fā)酵條件的優(yōu)化
        3.2.3 刺參養(yǎng)殖試驗
        3.2.4 發(fā)酵樣品制備
        3.2.5 養(yǎng)殖試驗樣品采集與處理
        3.2.6 發(fā)酵樣品粗蛋白測定
        3.2.7 體腔液蛋白含量測定
        3.2.8 刺參生長率測定
        3.2.9 免疫相關(guān)指標測定
        3.2.10 消化酶活性測定方法
        3.2.11 刺參腸道主要菌群數(shù)量分析
    3.3 數(shù)據(jù)處理與分析
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 發(fā)酵條件對黑曲霉發(fā)酵海帶的影響
        3.4.2 黑曲霉發(fā)酵發(fā)酵海帶正交試驗
        3.4.3 黑曲霉發(fā)酵發(fā)酵海帶對刺參生長的影響
        3.4.4 黑曲霉發(fā)酵海帶對刺參免疫活性的影響
        3.4.5 黑曲霉發(fā)酵發(fā)酵海帶對刺參消化酶活性的影響
        3.4.6 黑曲霉發(fā)酵發(fā)酵海帶對刺參腸道菌群的影響
    3.5 討論
        3.5.1 黑曲霉發(fā)酵海帶的營養(yǎng)成分變化
        3.5.2 投飼黑曲霉發(fā)酵海帶對刺參生長的影響
        3.5.3 投飼黑曲霉發(fā)酵海帶對刺參非特異性免疫的影響
        3.5.4 投飼黑曲霉發(fā)酵海帶對刺參消化酶活性的影響
        3.5.5 投飼黑曲霉發(fā)酵海帶對刺參消化道菌群的影響
    3.6 小結(jié)
第4章 海洋酵母的分離培養(yǎng)及其發(fā)酵海帶在刺參養(yǎng)殖中的應(yīng)用
    4.1 材料
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 實驗用海帶發(fā)酵微生物
        4.1.3 實驗用主要藥品及試劑
        4.1.4 主要儀器設(shè)備
        4.1.5 海洋酵母培養(yǎng)基
    4.2 方法
        4.2.1 海洋酵母的分離與篩選
        4.2.2 海洋酵母細胞干重的測定
        4.2.3 海洋酵母的形態(tài)和培養(yǎng)特征
        4.2.4 海洋酵母的生理生化特征
        4.2.5 海洋酵母 18srDNA序列分析
        4.2.6 海洋酵母用作發(fā)酵微生物菌種準備
        4.2.7 海帶發(fā)酵
        4.2.8 刺參養(yǎng)殖試驗
        4.2.9 養(yǎng)殖試驗樣品采集與處理
        4.2.10 發(fā)酵海帶粗蛋白測定
        4.2.11 刺參體腔液蛋白含量測定
        4.2.12 刺參生長率測定
        4.2.13 刺參免疫相關(guān)指標測定
        4.2.14 刺參消化酶活性測定方法
        4.2.15 刺參腸道主要菌群數(shù)量分析
    4.3 數(shù)據(jù)處理與分析
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 菌株粗蛋白含量及細胞干重測定結(jié)果
        4.4.2 菌株菌落形態(tài)與細胞形態(tài)特征觀察結(jié)果
        4.4.3 菌株生理生化鑒定結(jié)果
        4.4.4 分子生物學鑒定結(jié)果
        4.4.5 6株菌最終鑒定結(jié)果
        4.4.6 發(fā)酵后海帶中粗蛋白含量
        4.4.7 海洋酵母發(fā)酵海帶對刺參生長的影響
        4.4.8 海洋酵母發(fā)酵海帶對刺參免疫機能的影響
        4.4.9 海洋酵母發(fā)酵海帶對刺參消化酶活性的影響
        4.4.10 海洋酵母對刺參腸道菌群的影響
    4.5 討論
        4.5.1 海洋酵母在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用
        4.5.2 投飼海洋酵母發(fā)酵海帶對刺參生長的影響
        4.5.3 投飼海洋酵母發(fā)酵海帶對刺參免疫功能的影響
        4.5.4 投飼海洋酵母發(fā)酵海帶對刺參消化酶活性的影響
        4.5.5 投飼海洋酵母對刺參腸道菌群的影響
    4.6 小結(jié)
第5章 飼料中添加殼寡糖對刺參飼養(yǎng)效果的影響
    5.1 材料
        5.1.1 實驗材料
        5.1.2 主要實驗藥品及試劑
        5.1.3 主要儀器設(shè)備
    5.2 方法
        5.2.1 實驗設(shè)計
        5.2.2 樣品采集與處理
        5.2.3 刺參生長率測定
        5.2.4 體腔液蛋白含量測定
        5.2.5 免疫相關(guān)指標測定
        5.2.6 消化酶活性測定方法
        5.2.7 刺參腸道主要菌群數(shù)量分析
        5.2.8 不同殼寡糖濃度對溶藻弧菌、枯草芽孢桿菌抗菌性能的測定
    5.3 數(shù)據(jù)處理與分析
    5.4 結(jié)果與分析
        5.4.1 飼料中添加殼寡糖對刺參生長的影響
        5.4.2 飼料中添加殼寡糖對刺參免疫指標的影響
        5.4.3 飼料中添加殼寡糖對刺參消化酶活性的影響
        5.4.4 飼料中添加殼寡糖對刺參腸道菌群的影響
        5.4.5 不同濃度殼寡糖對溶藻弧菌的抑制作用
        5.4.6 不同濃度殼寡糖對枯草芽孢桿菌的抑制作用
    5.5 討論
        5.5.1 殼寡糖對刺參生長特性的影響
        5.5.2 殼寡糖對刺參免疫功能的影響
        5.5.3 殼寡糖對刺參消化酶活性的影響
        5.5.4 殼寡糖對刺參腸道菌群的影響
        5.5.5 殼寡糖對副溶血弧菌、枯草芽孢桿菌的抑制作用
    5.6 小結(jié)
總結(jié)
致謝
參考文獻
在學期間發(fā)表的學術(shù)論文

【參考文獻】

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本文編號：2836367