【摘要】：本論文采用脊尾白蝦(Exopalaemon carinicauda)為實驗動物,研究碳酸鹽堿度對其生長繁殖以及對生長繁殖相關的維甲酸X受體基因的影響,為脊尾白蝦展開鹽堿水養(yǎng)殖提供理論根據(jù)。本研究分為三個部分:第一部分:確定了脊尾白蝦半致死碳酸鹽堿度,確定其對脊尾白蝦生長、繁殖的影響。結(jié)果表明:脊尾白蝦碳酸鹽堿度的96 h LD50為8.73 mmol/L。脊尾白蝦的死亡率、特定生長率、抱卵率、孵化率、性腺發(fā)育及變態(tài)幼體成活率隨堿度(3.5、5、6.5、8mmol/L)的上升而降低,碳酸鹽堿度為3.5 mmol/L的脅迫組與對照組差別不顯著(P≥0.05),碳酸鹽堿度為5、6.5、8 mmol/L的脅迫組與對照組差異顯著(P0.05);3.5 mmol/L低碳酸鹽堿度對脊尾白蝦生長繁殖影響不顯著(P≥0.05),5、6.5、8 mmol/L的碳酸鹽堿度脅迫組與對照組差異顯著(P0.05)。研究結(jié)果表明在3.5 mmol/L低碳酸鹽堿度下脊尾白蝦可以正常的生長繁殖,在高于5mmol/L的碳酸鹽堿度是對于生長繁殖影響較顯著,不適于脊尾白蝦的正常生長繁殖。第二部分:在5、6.5、8 mmol/L的碳酸鹽堿度脅迫下進行酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)、超氧化物岐化酶(SOD)酶活測定。結(jié)果顯示:不同濃度碳酸鹽堿度脅迫后,脊尾白蝦鰓和肝胰腺中酶活性隨著時間的變化,呈先升高后降低的變化趨勢;脅迫72 h后,ACP活性顯著低于對照組(P0.05),AKP活力顯著高于對照組(P0.05),而SOD活性在鰓中顯著低于對照組(P0.05),肝胰腺中顯著高于對照組(P0.05)。本研究結(jié)果表明,碳酸鹽堿度脅迫下脊尾白蝦可以通過調(diào)節(jié)免疫酶的活性更好地應對高堿環(huán)境,對于碳酸鹽堿度具備較高的耐受性。第三部分:本研究進一步運用RACE克隆了脊尾白蝦維甲酸X受體基因,命名為EcRXR基因。該基因cDNA全長1323 bp,開放閱讀框(ORF)855 bp,5′端非編碼區(qū)37 bp,3′非編碼區(qū)431 bp。對氨基酸序列進行生物學分析可得,EcRXR基因編碼的蛋白質(zhì)是由284個氨基酸構(gòu)成,分子量為30.918 kDa,PI(理論等電點)為6.788。推導的氨基酸序列Blastp結(jié)果顯示,EcRXR與已知甲殼動物RXR的一致性為71%~90%,系統(tǒng)進化樹分析表明,脊尾白蝦EcRXR基因與日本沼蝦(Macrobrachium nipponense)RXR基因的同源性最高。熒光定量結(jié)果顯示,EcRXR基因在各組織中均有表達,而在眼柄相對表達量最高,鰓、胃中次之,血淋巴中最低。EcRXR基因在蛻皮周期中的表達規(guī)律表明,EcRXR基因在不同蛻皮時期存在明顯變化,在眼柄、肝胰腺、胃和腸中整體呈現(xiàn)上升趨勢,在鰓中呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢,在表其中呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢。通過分析EcRXR基因在溫度、鹽度和碳酸鹽堿度脅迫進程中的表達規(guī)律發(fā)現(xiàn):溫度、鹽度和碳酸鹽堿度脅迫均可顯著改變EcRXR基因在鰓和肝胰腺中的表達模式。溫度脅迫下EcRXR在鰓中呈先上升后下降的表達趨勢,肝胰腺中整體呈先上升后下降再上升再下降的表達趨勢。鹽度對鰓和肝胰腺的調(diào)控模式相同均呈先升高后下降的變化趨勢。碳酸鹽堿度脅迫后,EcRXR基因在鰓中的相對表達量整體上呈現(xiàn)出抑制效應;在肝胰腺中相對表達量在低碳酸鹽堿度時呈現(xiàn)誘導作用,在高濃度的碳酸鹽堿度條件下會呈現(xiàn)抑制效應。該研究結(jié)果說明EcRXR基因在脊尾白蝦蛻皮發(fā)育、酶活性調(diào)節(jié)及滲透壓調(diào)控中發(fā)揮者重要作用,為進一步研究脊尾白蝦和其它甲殼動物維甲酸X受體基因的功能提供了重要信息。
【學位授予單位】：上海海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S917.4
【圖文】：

圖 2.1 碳酸鹽堿度對脊尾白蝦親蝦抱卵率的影響Fig.2.1 Effects of carbonate alkalinity on spawning rate of Exopalaemon carinicauda.不同字母代表處理間差異顯著( P<0.05 )，下同Different letters meant significant different among treatments at 0.05 level. The same below

圖 2.1 碳酸鹽堿度對脊尾白蝦親蝦抱卵率的影響Fig.2.1 Effects of carbonate alkalinity on spawning rate of Exopalaemon carinicauda.不同字母代表處理間差異顯著( P<0.05 )，下同Different letters meant significant different among treatments at 0.05 level. The same below

上海海洋大學碩士學位論文著（P<0.05）；當達到 8 mmol/L 時，親蝦已無法抱卵（如圖 2.3 中所示）。變態(tài)幼體存活率與孵化率呈變化趨勢相同（圖 2.4）。3.5 mmol/L 組與對照低不顯著（P≥0.05）；6.5、8 mmol/L 組孵化出的幼體分別在 12、6 h 內(nèi)全部。

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本文編號：2833589