三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)是我國特有的淡水良種育珠貝,易受病害威脅而遭受重大經(jīng)濟(jì)損失,開展三角帆蚌免疫相關(guān)基因研究具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。本研究采用RACE技術(shù),對高通量轉(zhuǎn)錄組測序所獲得的三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)熱休克蛋白70(HSP70)、腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8(TNFAIP8)、干擾素誘導(dǎo)的鳥苷酸結(jié)合蛋白1(GBP1)與Toll樣受體2(TLR2)基因的長片段進(jìn)行擴(kuò)增,拼接得到這四種免疫相關(guān)基因的cDNA序列全長,采用熒光定量PCR(qRT-PCR)技術(shù)研究了HcHSP70和HcTNFAIP8基因在各組織中的表達(dá)分布情況及其應(yīng)激表達(dá)情況,并采用Western-blot技術(shù)從蛋白質(zhì)水平研究溫度刺激對HcHSP70表達(dá)的影響。HcHSP70基因cDNA序列全長2298 bp,開放閱讀框?yàn)?974 bp,編碼657個(gè)氨基酸,預(yù)測蛋白分子量大小為71.6 kDa。含有三個(gè)HSP70家族典型的標(biāo)簽序列,末端保守區(qū)域EEVD以及典型的重復(fù)位點(diǎn)GGXP。與其他物種HSP70同源性很高,最高達(dá)91%,通過構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹發(fā)現(xiàn)Hc HSP70與其它4種軟體動(dòng)物HSP70聚為一支。HcHSP70在肝胰腺中表達(dá)量最高,其次是性腺,而在鰓、外套膜及肌肉中的表達(dá)量較低。實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western-blot技術(shù)顯示,鰓組織中HcHSP70 mRNA和蛋白的表達(dá)量隨水溫上升而上調(diào),37℃時(shí)表達(dá)量顯著上升到最高值,而40 ℃時(shí)表達(dá)量恢復(fù)至正常水平。HcTNFAIP8基因cDNA序列全長1179 bp,開放閱讀框?yàn)?73 bp,編碼190個(gè)氨基酸,預(yù)測分子量大小為23.64 kDa。HcTNFAIP8與長牡蠣CgTNFAIP8相似性最高為71%,且在系統(tǒng)進(jìn)化樹的同一個(gè)分支上。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示:HcTNFAIP8在性腺中表達(dá)量最高,其次為肝胰腺,而在鰓、外套膜及心臟中表達(dá)量較低;HcTNFAIP8的表達(dá)并不受PGN的誘導(dǎo)影響,而在LPS刺激后,HcTNFAIP8表達(dá)量出現(xiàn)先顯著下調(diào)再上調(diào)情況,最終恢復(fù)接近到正常值。HcGBP1基因cDNA全長為2418 bp,開放閱讀框?yàn)?947 bp,編碼648個(gè)氨基酸,預(yù)測分子量大小為76.28 kDa。同源序列比對發(fā)現(xiàn)HcGBP1與非洲爪蟾GBP1處于同一個(gè)大分支中;HcTLR2基因cDNA序列全長1177 bp開放閱讀框?yàn)?032 bp,編碼343個(gè)氨基酸,預(yù)測分子量大小為39.58 kDa,同源序列比對發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)三角帆蚌與馬氏珠母貝聚為一支。
【學(xué)位單位】：江西師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類】：S917.4
【部分圖文】：

圖 1-3 GBP1 結(jié)構(gòu)域示意圖Fig. 1-3 Structure of GBP1 domain 的調(diào)控多通過順式作用元件 ISRE 和 GAS 響應(yīng) IFN 等細(xì)胞因子通過與干擾素調(diào)節(jié)因子 1（IRF1）之間結(jié)合，或結(jié)合信號(hào)

圖 1-4 TLR2 的結(jié)構(gòu)域示意圖Fig. 1-4 Structure of TLR2 domainLR2 的生物學(xué)功能R2 作為一種模式識(shí)別受體，在抗菌、抗病毒、促進(jìn)細(xì)胞凋亡及促進(jìn)

圖 2-2 HcHSP70 基因與其他物種比對結(jié)果注：相同的氨基酸用黑色陰影表示，保守但不一致的氨基酸用灰色表示Fig. 2-2 Multiple alignment of the deduced amino acid sequence of HSP70 with the sequenceof other HSP60 from different organismsNote：Identical amino acids are shaded in black. Other conserved but not consensus aminoacids are shaded in grey.

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2825254