三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)是我國(guó)特有的淡水良種育珠貝,易受病害威脅而遭受重大經(jīng)濟(jì)損失,開(kāi)展三角帆蚌免疫相關(guān)基因研究具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。本研究采用RACE技術(shù),對(duì)高通量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序所獲得的三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)熱休克蛋白70(HSP70)、腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8(TNFAIP8)、干擾素誘導(dǎo)的鳥(niǎo)苷酸結(jié)合蛋白1(GBP1)與Toll樣受體2(TLR2)基因的長(zhǎng)片段進(jìn)行擴(kuò)增,拼接得到這四種免疫相關(guān)基因的cDNA序列全長(zhǎng),采用熒光定量PCR(qRT-PCR)技術(shù)研究了HcHSP70和HcTNFAIP8基因在各組織中的表達(dá)分布情況及其應(yīng)激表達(dá)情況,并采用Western-blot技術(shù)從蛋白質(zhì)水平研究溫度刺激對(duì)HcHSP70表達(dá)的影響。HcHSP70基因cDNA序列全長(zhǎng)2298 bp,開(kāi)放閱讀框?yàn)?974 bp,編碼657個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)蛋白分子量大小為71.6 kDa。含有三個(gè)HSP70家族典型的標(biāo)簽序列,末端保守區(qū)域EEVD以及典型的重復(fù)位點(diǎn)GGXP。與其他物種HSP70同源性很高,最高達(dá)91%,通過(guò)構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)發(fā)現(xiàn)Hc HSP70與其它4種軟體動(dòng)物HSP70聚為一支。HcHSP70在肝胰腺中表達(dá)量最高,其次是性腺,而在鰓、外套膜及肌肉中的表達(dá)量較低。實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western-blot技術(shù)顯示,鰓組織中HcHSP70 mRNA和蛋白的表達(dá)量隨水溫上升而上調(diào),37℃時(shí)表達(dá)量顯著上升到最高值,而40 ℃時(shí)表達(dá)量恢復(fù)至正常水平。HcTNFAIP8基因cDNA序列全長(zhǎng)1179 bp,開(kāi)放閱讀框?yàn)?73 bp,編碼190個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)分子量大小為23.64 kDa。HcTNFAIP8與長(zhǎng)牡蠣CgTNFAIP8相似性最高為71%,且在系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)的同一個(gè)分支上。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示:HcTNFAIP8在性腺中表達(dá)量最高,其次為肝胰腺,而在鰓、外套膜及心臟中表達(dá)量較低;HcTNFAIP8的表達(dá)并不受PGN的誘導(dǎo)影響,而在LPS刺激后,HcTNFAIP8表達(dá)量出現(xiàn)先顯著下調(diào)再上調(diào)情況,最終恢復(fù)接近到正常值。HcGBP1基因cDNA全長(zhǎng)為2418 bp,開(kāi)放閱讀框?yàn)?947 bp,編碼648個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)分子量大小為76.28 kDa。同源序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)HcGBP1與非洲爪蟾GBP1處于同一個(gè)大分支中;HcTLR2基因cDNA序列全長(zhǎng)1177 bp開(kāi)放閱讀框?yàn)?032 bp,編碼343個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)分子量大小為39.58 kDa,同源序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)三角帆蚌與馬氏珠母貝聚為一支。
【學(xué)位單位】：江西師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類(lèi)】：S917.4
【部分圖文】：

圖 1-3 GBP1 結(jié)構(gòu)域示意圖Fig. 1-3 Structure of GBP1 domain 的調(diào)控多通過(guò)順式作用元件 ISRE 和 GAS 響應(yīng) IFN 等細(xì)胞因子通過(guò)與干擾素調(diào)節(jié)因子 1（IRF1）之間結(jié)合，或結(jié)合信號(hào)

圖 1-4 TLR2 的結(jié)構(gòu)域示意圖Fig. 1-4 Structure of TLR2 domainLR2 的生物學(xué)功能R2 作為一種模式識(shí)別受體，在抗菌、抗病毒、促進(jìn)細(xì)胞凋亡及促進(jìn)

圖 2-2 HcHSP70 基因與其他物種比對(duì)結(jié)果注：相同的氨基酸用黑色陰影表示，保守但不一致的氨基酸用灰色表示Fig. 2-2 Multiple alignment of the deduced amino acid sequence of HSP70 with the sequenceof other HSP60 from different organismsNote：Identical amino acids are shaded in black. Other conserved but not consensus aminoacids are shaded in grey.

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 吳素霞;張賽男;李偉華;楊菲;馮世明;柴立輝;;沉默TNFAIP8基因?qū)m頸癌HeLa細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[J];腫瘤;2015年11期

2 李濤;樊航;姬新穎;張虎;;TNFAIP8家族蛋白的研究進(jìn)展[J];河南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2014年04期

3 任毅鵬;高晶;潘寶平;高虹;閆春財(cái);;青蛤(Cyclina sinensis)TLR2基因的克隆與表達(dá)分析[J];海洋與湖沼;2014年05期

4 朱紫祥;曹陽(yáng)春;曹偉軍;楊帆;馬志永;鄭海學(xué);;干擾素誘導(dǎo)蛋白鳥(niǎo)苷酸結(jié)合蛋白1研究進(jìn)展[J];病毒學(xué)報(bào);2014年04期

5 周鑫;董云偉;王芳;董雙林;;草魚(yú)hsp70和hsp90對(duì)溫度急性變化的響應(yīng)[J];水產(chǎn)學(xué)報(bào);2013年02期

6 馮冰冰;牛東紅;鐘玉民;陳慧;林國(guó)文;李家樂(lè);;縊蟶ScHsc70 cDNA的分子特性和表達(dá)分析[J];中國(guó)水產(chǎn)科學(xué);2012年01期

7 謝彥海;胡寶慶;文春根;;褶紋冠蚌熱休克蛋白HSP70基因的克隆及表達(dá)研究[J];南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(理科版);2011年05期

8 韓俊英;李健;李吉濤;常志強(qiáng);陳萍;李華;;脊尾白蝦熱休克蛋白HSP70基因的克隆及其表達(dá)分析[J];水產(chǎn)學(xué)報(bào);2011年08期

9 何小兵;房永祥;賈懷杰;陳國(guó)華;曾爽;瞿惠玲;景志忠;;Toll樣受體介導(dǎo)的先天性抗病毒免疫反應(yīng)研究進(jìn)展[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2011年06期

10 袁嘉恩;許忠能;韓博平;孔義軍;雷臘梅;謝數(shù)濤;;鋸緣青蟹(Scylla serrata)Hsp70基因cDNA的克隆及序列分析[J];生態(tài)科學(xué);2008年01期

本文編號(hào)：2825254