江蘇省沿海地區(qū)海、淡水資源豐富,養(yǎng)殖池塘眾多,灘涂廣闊,是我國(guó)重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖基地。近些年,細(xì)菌性疾病在江蘇省沿海地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖中普遍發(fā)生,給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的損失。為了預(yù)防和控制細(xì)菌性疾病,水產(chǎn)養(yǎng)殖從業(yè)人員經(jīng)常使用各種抗菌藥物,一定程度地對(duì)控制疾病起到了較好的作用。但由于在養(yǎng)殖生產(chǎn)上藥物的使用缺乏科學(xué)性,部分抗菌藥物在水產(chǎn)養(yǎng)殖上使用后出現(xiàn)了耐藥現(xiàn)象,一方面影響了產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展,另一方面也威脅著水產(chǎn)品的質(zhì)量安全和水生態(tài)環(huán)境。為了解江蘇省沿海地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖致病菌的耐藥性狀況,本研究以江蘇省沿海地區(qū)發(fā)病和健康水生動(dòng)物為對(duì)象分離獲得了377株細(xì)菌,經(jīng)形態(tài)學(xué)、生理生化和16S r RNA序列比對(duì)的方法鑒定,其中曾報(bào)道為水產(chǎn)養(yǎng)殖致病性細(xì)菌的有274株。來(lái)源分布為:連云港地區(qū)46株,鹽城地區(qū)89株,南通地區(qū)116株;海水菌64株,淡水菌210株;魚(yú)類(lèi)菌150株,甲殼類(lèi)菌99株。其中常見(jiàn)水產(chǎn)養(yǎng)殖主要致病菌187株,包括氣單胞菌90株,弧菌54株,假交替單胞菌22株,美人魚(yú)發(fā)光桿菌7株和不動(dòng)桿菌14株。利用K-B紙片擴(kuò)散和微量肉湯稀釋法對(duì)江蘇省沿海地區(qū)分離的水產(chǎn)養(yǎng)殖致病菌進(jìn)行抗菌藥物敏感性監(jiān)測(cè)。紙片擴(kuò)散試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)江蘇省沿海地區(qū)的水產(chǎn)養(yǎng)殖主要致病菌對(duì)磺胺異VA唑、青霉素、強(qiáng)力霉素和四環(huán)素表現(xiàn)較強(qiáng)耐藥性,耐藥率分別為66.06%、64.23%、32.12%和30.66%;對(duì)環(huán)丙沙星、氧氟沙星、恩諾沙星、新霉素、頭孢曲松、紅霉素、諾氟沙星和氟苯尼考耐藥率較低,依次為5.84%、3.65%、6.57%、5.11%、6.57%、8.03%、9.49%。肉湯稀釋法結(jié)果表明79.07%水產(chǎn)養(yǎng)殖致病菌對(duì)阿莫西林的MIC達(dá)到甚至超過(guò)32μg/m L,96.12%的菌株對(duì)硫酸二甲嘧啶的MIC達(dá)到甚至超過(guò)128μg/m L,表現(xiàn)出較高耐藥性。江蘇省沿海地區(qū)分離的部分水產(chǎn)養(yǎng)殖致病菌出現(xiàn)多重耐藥,二重、三重、四重、五重耐藥率分別為22.3%、13.5%、10.9%、6.6%,甚至出現(xiàn)十一重耐藥的菌株。江蘇省沿海地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖致病菌耐藥性整體上表現(xiàn)出由南向北逐漸增強(qiáng),淡水源菌株高于海水源菌株,魚(yú)源菌株比甲殼類(lèi)菌株嚴(yán)重的規(guī)律。通過(guò)PCR方法對(duì)江蘇省沿海地區(qū)90株水產(chǎn)源氣單胞菌耐藥基因進(jìn)行擴(kuò)增,研究了各耐藥基因的檢出率,統(tǒng)計(jì)了該地區(qū)不同種類(lèi)藥物的耐藥基因型,初步分析了不同基因型與耐藥表型間的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn),江蘇省沿海地區(qū)90株水產(chǎn)源氣單胞菌β-內(nèi)酰胺耐藥基因TEM、IMP、Amp C、OXA-23、OXA-24檢出率分別為0、6.67%、41.11%、4.44%和24.44%,共出現(xiàn)8種耐藥基因型,其中攜帶IMP基因型的菌株75%對(duì)青霉素耐藥,攜帶Amp C和OXA-24基因型的菌株92.86%表現(xiàn)耐藥,其他基因型菌株100%表現(xiàn)耐藥。另有部分菌株未檢測(cè)到β-內(nèi)酰胺耐藥基因,但對(duì)青霉素表現(xiàn)較強(qiáng)耐藥,說(shuō)明在該地區(qū)水產(chǎn)致病菌中介導(dǎo)青霉素耐藥的還存在其他基因。氨基糖苷類(lèi)耐藥基因aph(3')-Ia、aac(6')-Ib、ant(3'')-Ia和ant(3'')-Ia檢出率分別為28.89%、67.78%、32.22%和8.89%,共有11個(gè)氨基糖苷類(lèi)耐藥基因型。試驗(yàn)菌株對(duì)新霉素敏感性較高,分析介導(dǎo)氨基糖苷類(lèi)耐藥機(jī)制可能是多個(gè)基因共同作用的結(jié)果�；前奉�(lèi)耐藥基因sul1、sul2和sul3攜帶率分別為34.44%、28.89%和45.56%,主要有sul1、sul2、sul3、sul1/sul2、sul1/sul3、sul2/sul3、sul1/sul2/sul3七種基因型,相應(yīng)基因型菌株對(duì)磺胺異VA唑耐藥率分別為90%、60%、48%、90%、77.78%、75%和100%。四環(huán)素類(lèi)耐藥基因tet A、tet C和tet M檢出率分別為32.22%、34.44%和60%,共有tet A、tet C、tet M、tet A/tet C、tet A/tet M、tet C/tet M和tet A/tet C/tet M七種基因型,分別有75%、33.33%、22.73%、0%、66.67%、33.33%和36.36%的菌株表現(xiàn)對(duì)強(qiáng)力霉素耐藥,75%、33.33%、27.27%、100%、41.67%、33.33%和27.27%的菌株表現(xiàn)對(duì)四環(huán)素耐藥。tet A和tet M基因的攜帶率與耐藥表型無(wú)明顯相關(guān)性,四環(huán)素類(lèi)不同藥物品種的主要耐藥基因型存在一定差異。氟苯尼考耐藥基因flo R檢出率為76.67%,但攜帶flo R基因的菌株并沒(méi)有表現(xiàn)出較明顯的耐藥性,推測(cè)flo R基因介導(dǎo)氟苯尼考較低水平耐藥。喹諾酮類(lèi)耐藥基因qnr A、qnr B、qnr B-24、qnr S和qep A檢出率分別為3.33%、52.22%、46.67%、26.67%和53.33%,共出現(xiàn)14個(gè)喹諾酮類(lèi)耐藥基因型,但未發(fā)現(xiàn)耐藥表型與耐藥基因型間存在較密切的關(guān)系,分析認(rèn)為介導(dǎo)喹諾酮類(lèi)藥物耐藥可能還與其他基因有關(guān)。綜上所述,江蘇省沿海地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖中條件致病菌較多且分布廣泛,其對(duì)抗菌藥物產(chǎn)生不同程度的耐藥性,特別是對(duì)青霉素、磺胺異VA唑、強(qiáng)力霉素和四環(huán)素等耐藥較為嚴(yán)重,耐藥性在淡水魚(yú)類(lèi)品種上表現(xiàn)尤為突出。建議該地區(qū)在防治水產(chǎn)細(xì)菌性病害過(guò)程中做到科學(xué)用藥,防止藥物的耐藥性進(jìn)一步增強(qiáng)。江蘇省沿海地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖氣單胞菌耐藥基因和基因型多樣性程度高,其與耐藥表型的關(guān)系復(fù)雜,推測(cè)介導(dǎo)江蘇省沿海地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖主要致病菌耐藥是一個(gè)多因子共同作用的結(jié)果。
【學(xué)位單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類(lèi)】：S941.4
【部分圖文】：

.2.1.1 細(xì)菌形態(tài)學(xué)特征LSHD-1菌株在2216E瓊脂平板上菌落為圓形，淺黃色，凸透鏡狀，表面潤(rùn)有光澤，邊緣完整，不透明（圖）。經(jīng)電子顯微鏡觀(guān)察，LSHD-1革蘭氏性，呈短桿狀（圖1）。

.2.1.1 細(xì)菌形態(tài)學(xué)特征LSHD-1菌株在2216E瓊脂平板上菌落為圓形，淺黃色，凸透鏡狀，表面潤(rùn)有光澤，邊緣完整，不透明（圖）。經(jīng)電子顯微鏡觀(guān)察，LSHD-1革蘭氏性，呈短桿狀（圖1）。

圖 3-1 表示的是水產(chǎn)病原細(xì)菌對(duì) 12 種實(shí)驗(yàn)抗菌藥物的耐藥率。由圖可以看出：分離到的水產(chǎn)養(yǎng)殖致病菌對(duì)不同藥物的耐藥率差別較大，部分抗菌藥物出現(xiàn)較高耐藥率，主要有磺胺異VA唑（66.06%）、青霉素（64.23%）、強(qiáng)力霉素（32.12%）、四環(huán)素(30.66%)。274 株水產(chǎn)養(yǎng)殖致病菌對(duì)環(huán)丙沙星、氧氟沙星、恩諾沙星、新霉素、頭孢曲松、紅霉素、諾氟沙星和氟苯尼考耐藥率較低，依次為 5.84%、3.65%、6.57%、5.11%、6.57%、8.03%、9.49%。

【引證文獻(xiàn)】

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1 趙敏;汪開(kāi)毓;王均;陳德芳;黃凌遠(yuǎn);王浩丞;;斑點(diǎn)叉尾洶源維氏氣單胞菌對(duì)四環(huán)素類(lèi)抗生素的耐藥性及耐藥基因的檢測(cè)[A];中國(guó)水產(chǎn)學(xué)會(huì)魚(yú)病專(zhuān)業(yè)委員會(huì)2013年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2013年

本文編號(hào)：2820858