【摘要】：錐狀斯氏藻(Scrippsiella trochoidea)是對蝦養(yǎng)殖池塘常見的有害甲藻優(yōu)勢種之一。當養(yǎng)殖水體中甲藻、藍藻等有害微藻成為優(yōu)勢種并形成生態(tài)優(yōu)勢時,會誘發(fā)養(yǎng)殖病害頻繁發(fā)生。以綠藻、硅藻等有益微藻為優(yōu)勢種的微藻群落,則有利于營造優(yōu)良的水質(zhì)環(huán)境,促進養(yǎng)殖生物健康生長。因此,在養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中不僅需要防控水體甲藻、藍藻等有害微藻大量生長,同時需要營造以綠藻、硅藻為優(yōu)勢藻種的養(yǎng)殖水體。溶藻細菌控藻作為一種控制有害微藻的新型生物方法,其能夠調(diào)控微藻群落結(jié)構(gòu),從而維持養(yǎng)殖水體環(huán)境的生態(tài)平衡。本文通過將前期分離獲得的A1、A2、A3、A4四株溶藻細菌分別以初始濃度107 CFU·m L-1加入到錐狀斯氏藻藻液中,分析其對藻細胞的影響,篩選對錐狀斯氏藻具有較好溶藻效果的菌株。然后將初步篩選獲得的A2、A3、A4三株菌分別以初始濃度107 CFU·m L-1加入到蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)、四尾柵藻(Scenedesmus quadricauda)、條紋小環(huán)藻(Cyclotella striata)的純培養(yǎng)藻液中,探究A2、A3、A4三株溶藻細菌對池塘常見有益微藻是否存在不良影響。最后在四種微藻(錐狀斯氏藻、蛋白核小球藻、四尾柵藻、條紋小環(huán)藻)兩種藻混合及三種藻混合培養(yǎng)條件下,探究A2、A3、A4三株菌對四種微藻混合培養(yǎng)時微藻群落結(jié)構(gòu)的影響,并對以上四株實驗菌株進行菌種鑒定。結(jié)果顯示:1.在錐狀斯氏藻純培養(yǎng)藻液中,A1菌對錐狀斯氏藻的溶藻效果最差,A2、A3菌次之,A4菌的溶藻效果最優(yōu)。A1菌組藻細胞于實驗前3 d保持運動活性,第5 d所有藻細胞失去運動活性,第6 d藻細胞破裂溶解;A2和A3菌組實驗結(jié)果類似,第2 d藻細胞拉長變形,細胞出現(xiàn)質(zhì)壁分離,第5 d細胞破裂溶解;A4菌組藻細胞于第2 d發(fā)生破裂溶解。第10 d對照組以及A1、A2、A3、A4菌組藻細胞密度分別為2.90×104 cells·m L-1、2.72×103 cells·m L-1、3.60×102 cells·m L-1、7.07×102cells·m L-1、84 cells·m L-1。因此,初步篩選對甲藻溶藻效果相對較好的A2、A3、A4三株菌開展進一步的溶藻特性實驗。2.在蛋白核小球藻、四尾柵藻、條紋小環(huán)藻純培養(yǎng)藻液中,A2、A3、A4三株菌對蛋白核小球藻、四尾柵藻生長無溶藻作用,而對條紋小環(huán)藻具有較弱的溶藻效應(yīng)。實驗期間對照組與各加菌組蛋白核小球藻細胞密度均顯著升高,第10 d對照組與A2、A3、A4加菌組蛋白核小球藻細胞密度分別為2.09×107 cells·m L-1、2.95×107 cells·m L-1、2.58×107 cells·m L-1、2.87×107 cells·m L-1;實驗期間對照組與加菌組四尾柵藻細胞密度都呈波動趨勢,第10 d對照組與A2、A3、A4加菌組四尾柵藻細胞密度分別為1.75×105 cells·m L-1、1.91×105 cells·m L-1、1.68×105cells·m L-1、2.08×105 cells·m L-1。第10 d對照組與A2、A3、A4加菌組條紋小環(huán)藻細胞密度分別為4.38×105 cells·m L-1、1.33×105 cells·m L-1、1.78×105 cells·m L-1、6.13×104 cells·m L-1。結(jié)果表明,A2、A3、A4三株溶藻細菌對蛋白核小球藻、四尾柵藻、條紋小環(huán)藻無溶藻作用或者溶藻作用較弱,因此推測將三株菌應(yīng)用于養(yǎng)殖水體中,在對水體有害甲藻產(chǎn)生有效溶解作用的同時對水體中的有益綠藻、硅藻無不良影響或影響較少。3.甲藻—綠藻—硅藻混合培養(yǎng)條件下,A2、A3、A4三株菌總體上均能有效溶解甲藻錐狀斯氏藻,而對綠藻門的蛋白核小球藻與四尾柵藻無溶解作用,對硅藻門的條紋小環(huán)藻具有較弱的溶解效應(yīng)。(1)錐狀斯氏藻—蛋白核小球藻混合培養(yǎng)條件下,第10 d時A2、A3、A4對照組錐狀斯氏藻細胞密度分別為1.66×104cells·m L-1、1.92×104 cells·m L-1、1.03×104 cells·m L-1,加菌組錐狀斯氏藻細胞密度分別為1.30×103 cells·m L-1、1.36×103 cells·m L-1、40 cells·m L-1;而各加菌組與對照組蛋白核小球藻細胞密度均顯著升高。(2)錐狀斯氏藻與條紋小環(huán)藻混合培養(yǎng)條件下,第10 d時A2、A3、A4對照組錐狀斯氏藻細胞密度分別為3.52×104 cells·m L-1、2.43×104 cells·m L-1、5.31×104 cells·m L-1,加菌組錐狀斯氏藻細胞密度分別為4.71×102 cells·m L-1、3.93×102 cells·m L-1、64 cells·m L-1;第10 d時A2、A3、A4對照組條紋小環(huán)藻細胞密度分別為3.80×104 cells·m L-1、6.07×104 cells·m L-1、6.00×104 cells·m L-1,各加菌組條紋小環(huán)藻的細胞密度分別為6.67×103 cells·m L-1、2.87×104 cells·m L-1、3.33×103 cells·m L-1。(3)錐狀斯氏藻—蛋白核小球藻—條紋小環(huán)藻混合培養(yǎng)條件下,第10 d時A2、A3、A4對照組組錐狀斯氏藻細胞密度分別為7.73×104 cells·m L-1、8.17×104 cells·m L-1、1.27×105 cells·m L-1,各加菌組錐狀斯氏藻細胞密度分別為2.23×103 cells·m L-1、2.83×103 cells·m L-1、1.42×103 cells·m L-1;各組蛋白核小球藻細胞密度均顯著升高;第10 d時A2、A3、A4對照組條紋小環(huán)藻細胞密度分別為5.20×104 cells·m L-1、5.477×104 cells·m L-1、8.87×104 cells·m L-1,各加菌組條紋小環(huán)藻的細胞密度分別為3.93×104 cells·m L-1、3.27×104 cells·m L-1、2.67×103 cells·m L-1。(4)錐狀斯氏藻—四尾柵藻—條紋小環(huán)藻混合培養(yǎng)條件下,第10 d時A2、A3、A4對照組組錐狀斯氏藻細胞密度分別為3.43×104 cells·m L-1、4.92×104 cells·m L-1、8.70×105 cells·m L-1,各加菌組錐狀斯氏藻細胞密度分別為5.44×102 cells·m L-1、31 cells·m L-1、1.93×102 cells·m L-1;第10 d時A2、A3、A4對照組四尾柵藻細胞密度分別為2.33×104 cells·m L-1、1.27×104 cells·m L-1、1.13×104cells·m L-1,各加菌組四尾柵藻細胞密度分別為2.67×104 cells·m L-1、1.20×104cells·m L-1、1.27×104 cells·m L-1;第10 d時A2、A3、A4對照組條紋小環(huán)藻細胞密度分別為3.20×104 cells·m L-1、5.13×104 cells·m L-1、4.93×104 cells·m L-1,各加菌組條紋小環(huán)藻的細胞密度分別為1.20×104 cells·m L-1、1.80×104 cells·m L-1、1.80×103cells·m L-1。結(jié)果表明,幾種微藻混合培養(yǎng)條件下,A2、A3、A4三株菌總體上均能有效溶解甲藻錐狀斯氏藻,而對綠藻門的蛋白核小球藻與四尾柵藻無溶解作用,對硅藻門的條紋小環(huán)藻具有較弱的溶解效應(yīng),推測將三株菌A2、A3、A4應(yīng)用于養(yǎng)殖水體中對有害甲藻進行調(diào)控時,三株菌能夠起到調(diào)控微藻群落結(jié)構(gòu)的作用,在有效調(diào)控有害甲藻的同時使得水體微藻群落向著以綠藻、硅藻為優(yōu)勢種的方向演替。4.經(jīng)16S r DNA方法鑒定,菌株A1、A2、A3屬于海桿菌屬(Marinobacter sp.),A4屬于芽孢桿菌屬(Bacillus sp.)。
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S942.3
【圖文】：

曲線 2-1 所示，四株菌的生長曲線雖然存在一定的差異，但總體來看較小。其中 A1、A2 菌經(jīng)過 6 h 延滯期，第 6 h 時兩株菌的濃度CFU mL-1、1.18×105CFU mL-1，相對于初始濃度有所下降。6 指數(shù)生長期，指數(shù)生長期為 6-24 h，第 24 h A1、A2 兩株菌的109CFU mL、2.44×109CFU mL-1，24 h 之后兩株菌均進入穩(wěn)定株菌生長速率基本相同，在 120 h 內(nèi) A1、A2 菌均未出現(xiàn)衰亡期菌初始濃度為 2.13×103CFU mL-1，其生長的延滯期為 0-12 h，期，指數(shù)生長期為 12-36 h，36 h 時菌濃度達到 3.08×109CFU進入穩(wěn)定期，穩(wěn)定期持續(xù)時間為 18 h， 54 h 之后菌株進入衰亡度持續(xù)下降，120 h 時 A3 菌的濃度為 8.95×107CFU mL-1。菌未經(jīng)過延至期直接進入指數(shù)生長期，其指數(shù)生長期持續(xù)時間為A4 菌的濃度為 3.67×108CFU mL-1。12 h 之后 A4 菌進入穩(wěn)定期的濃度為 1.08×108CFU mL-1。實驗期間菌株生長未出現(xiàn)衰亡期

四株細菌均以初始濃度107CFU mL-1加入到錐狀斯氏藻藻液中。對照組錐狀斯氏藻細胞形態(tài)保持完整如圖2-2(a)。A1 菌組錐狀斯氏藻細胞于實驗前 3 d 保持運動活性，第 5 d 所有錐狀斯氏藻細胞失去運動活性，第 6 d 大量藻細胞壁破裂，藻溶解如圖 2-2 (b)；A2 菌組于實驗第 2 d 大部分錐狀斯氏藻細胞拉長變形，細胞質(zhì)壁分離，第 5 d 細胞壁破裂藻溶解如圖 2-2(c)；A3 菌組第 2 d 錐狀斯氏藻細胞大部分拉長變形，細胞質(zhì)壁分離，第 5 d 細胞壁破裂藻溶解如圖 2-2(d)；A4 菌組錐狀斯氏藻細胞于實驗第 2 d 細胞壁破裂，細胞溶解如圖 2-2 (e)。圖 2-2 四株菌對錐狀斯氏藻細胞形態(tài)的影響Fig 2-2. Morphology of Scrippsiella trochoidea under the effects of strain A1, A2

組藻細胞密度在實驗前 4 d 呈不明顯的下降趨勢，第 4 d 藻細胞密cells mL-1。4 d 之后藻細胞密度呈顯著的下降趨勢，第 10 d 時藻細胞.72×103cells mL-1。A3 菌組的藻細胞密度變動趨勢相似，第 2 d A2、A3 菌組藻細胞密降為 8.72×103cells mL-1與 9.08×103cells mL-1，第 8 d 時 A2、A3 菌分別下降為 9.47×102cells mL-1與 1.59×103cells mL-1，第 10 d 兩實度分別下降為 3.60×102cells mL-1與 7.07×102cells mL-1。組藻細胞密度在實驗前 2 d 呈顯著的下降趨勢，第 2 d 藻細胞密度cells mL-1，實驗第 2 d 至第 6 d 藻細胞密度仍然呈顯著的下降趨勢，降趨勢平緩，第 6 d 藻細胞密度下降為 2.49×102cells mL-1，第 6 d 至變動不顯著，第 10 d 藻細胞密度為 84 cells mL-1。，四株菌相較而言，A1 菌對錐狀斯氏藻的溶藻效果最差，A2、A3次之，A4 菌對錐狀斯氏藻的溶藻效果最好。

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本文編號：2817236