絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activatedproteinkinases,MAPK)信號(hào)途徑在真核細(xì)胞基因表達(dá)、細(xì)胞增殖、分化、凋亡、新陳代謝等生理病理過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。通過(guò)遠(yuǎn)緣雜交、雌核發(fā)育操作技術(shù)已經(jīng)成功研制出不同倍性經(jīng)濟(jì)魚(yú)類,其中雌核發(fā)育二倍體鯽鯉具有產(chǎn)生二倍體卵子的現(xiàn)象。不減數(shù)配子的形成可能與生殖細(xì)胞的核內(nèi)復(fù)制或生殖細(xì)胞的細(xì)胞融合有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)以雌核發(fā)育二倍體鯽鯉為材料,研究MAPK家族的主要成員ERK和JNK在雌核發(fā)育二倍體鯽鯉性腺中的表達(dá)分析,為進(jìn)一步解析雌核發(fā)育二倍體鯽鯉不減數(shù)配子發(fā)生中的分子調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。具體研究?jī)?nèi)容如下:(1)根據(jù)已知物種斑馬魚(yú)erk1基因的cDNA序列,克隆了紅鯽、三倍體湘云鯽、異源四倍體鯽鯉和雌核發(fā)育二倍體鯽鯉中erk1基因的編碼區(qū)中間片段序列,測(cè)序得到709bp的中間段序列,其中雌核發(fā)育二倍體鯽鯉與二倍體紅鯽、三倍體湘云鯽,異源四倍體鯽鯉和斑馬魚(yú)erk1基因編碼區(qū)中間片段的相似性分別為99.7%、99.7%、96.3%、91.9%。(2)運(yùn)用Western-blot技術(shù)檢測(cè)JNK、p-JNK、ERK在雌核發(fā)育二倍體鯽鯉和不同倍性魚(yú)性腺組織中表達(dá)分析。結(jié)果顯示,JNK、ERK在魚(yú)類性腺組織中均有較高量的表達(dá),但在魚(yú)類卵巢和精巢間、雌核發(fā)育二倍體鯽鯉和不同倍性魚(yú)的性腺組織間,JNK或ERK的表達(dá)量并不存在明顯的差異。值得關(guān)注的是,P-JNK在雌核發(fā)育二倍體鯽鯉性腺中的表達(dá)量遠(yuǎn)高于三倍體和四倍體鯽鯉的卵巢組織。(3)對(duì)雌核發(fā)育二倍體鯽鯉早期性腺的組織學(xué)觀察表明,6~10月齡雌核發(fā)育二倍體鯽鯉的性腺處于I期卵巢發(fā)育階段。8~10月齡的雌核發(fā)育二倍體鯽鯉的性腺中均可觀察到性原細(xì)胞旺盛的分裂。運(yùn)用Western-blot技術(shù)檢測(cè)JNK、ERK在雌核發(fā)育二倍體鯽鯉早期性腺發(fā)育的表達(dá)。結(jié)果顯示10月齡雌核發(fā)育二倍體鯽鯉性腺中JNK表達(dá)水平較6、8月齡的要高。ERK在6、8、10月齡的雌核發(fā)育二倍體鯽鯉性腺的表達(dá)成下調(diào)趨勢(shì)。(4)采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)了ERK和JNK在雌核發(fā)育二倍體鯽鯉早期性腺組織中的表達(dá)。結(jié)果顯示JNK和ERK在雌核發(fā)育二倍體鯽鯉早期性腺中有陽(yáng)性表達(dá)。其中JNK在10月齡雌核發(fā)育二倍體鯽鯉性腺中的陽(yáng)性反應(yīng)強(qiáng)度高于6、8月齡。而ERK在8月齡和10月齡的性腺中的陽(yáng)性反應(yīng)則弱于6月齡。這與Western-blot技術(shù)檢測(cè)結(jié)果相一致。綜上所述,本研究探討了MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路,尤其是JNK、ERK在雌核發(fā)育二倍體鯽鯉性腺中的功能,結(jié)果表明MAPK通路可能對(duì)雌核發(fā)育二倍體鯽鯉產(chǎn)生不減數(shù)配子具有重要調(diào)控作用。
【學(xué)位單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：S917.4
【部分圖文】：

第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析3.1 紅鯽、三倍體湘云鯽、異源四倍體鯽鯉以及雌核發(fā)育二倍體鯽鯉 erk1 基因的克隆及序列分析分別提取二倍體紅鯽、三倍體湘云鯽、異源四倍體鯽鯉以及雌核發(fā)育二倍體鯽鯉的性腺組織的總 RNA。根據(jù)已知物種斑馬魚(yú)（NM_201507.1）中 erk1 基因的 cDNA 序列，設(shè)計(jì)的引物，通過(guò) PCR擴(kuò)增獲得了 700bp 左右的 DNA 條帶（圖 3-1）。測(cè)序結(jié)果得到 709bp的中間段序列。

26圖 3-2 erk1 基因堿基序列比對(duì)與保守性發(fā)育二倍體鯽鯉（2G）與二倍體紅鯽（2N）、三倍體湘云鯽（3N）、異源四、斑馬魚(yú) erk1 基因編碼區(qū)中間片段堿基序列比對(duì)；圖 B 為雌核發(fā)育二倍體倍體紅鯽（2N）、三倍體湘云鯽（3N）、異源四倍體鯽鯉（4N）、斑馬魚(yú)中間片段在進(jìn)化上的保守性分析。

28圖 3-3 MAPK 在雌核發(fā)育二倍體鯽鯉和不同倍性鯽鯉及其原始父母本性腺中表達(dá)圖 A.B.C 分別 JNK、P-JNK、ERK 在雌核發(fā)育二倍體鯽鯉和不同倍性魚(yú)類的性腺組織中的蛋白水平表達(dá)；圖 D、E、F 分別為 A、B、C 的灰度分析結(jié)果圖。圖 3-4 雌核發(fā)育二倍體鯽鯉早期性腺的 HE 染色的組織學(xué)觀察圖 A 為 6 月齡的雌核發(fā)育二倍體鯽鯉性腺組織學(xué)切片；圖 B 為 8 月齡的雌核發(fā)育二倍體鯽鯉性腺組織學(xué)切片；圖 C 為 10 月齡的雌核發(fā)育二倍體鯽鯉性腺組織學(xué)切片。比例尺：100um

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 徐偉麗;孫文廣;馬鶯;;MAPK信號(hào)通路與結(jié)直腸癌[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2010年02期

2 侯炳旭;馮麗英;;JNK信號(hào)通路介導(dǎo)的凋亡在疾病中的作用[J];世界華人消化雜志;2011年17期

本文編號(hào)：2817345