【摘要】：RING-box protein RBX蛋白是Cullin-RING E3泛素連接酶的重要組成部分,通過(guò)泛素化-蛋白酶體途徑參與細(xì)胞內(nèi)蛋白的降解調(diào)控。這一類泛素化在細(xì)胞周期、生長(zhǎng)發(fā)育、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、DNA復(fù)制和修復(fù)等許多細(xì)胞進(jìn)程中發(fā)揮作用,在中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)精子發(fā)生過(guò)程中同樣十分重要。而其中重要的催化元件RBX蛋白在中華絨螯蟹中還尚未研究。本文根據(jù)中華絨螯蟹基因組及精巢、副性腺轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),通過(guò)實(shí)驗(yàn)克隆獲得了兩個(gè)RBX基因。Es-RBX1 cDNA全長(zhǎng)741個(gè)堿基,編碼124個(gè)氨基酸,Es-RBX2 cDNA全長(zhǎng)1325個(gè)堿基,編碼110個(gè)氨基酸。生物信息學(xué)分析顯示RBX的序列及結(jié)構(gòu)域都非常保守,系統(tǒng)進(jìn)化分析也與傳統(tǒng)的分類方式一致。通過(guò)熒光定量PCR和免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了RBX的表達(dá)情況,結(jié)果顯示RBX1在精巢組織中高表達(dá),并且在精巢發(fā)育的不同階段表現(xiàn)出規(guī)律的變化;而RBX2在雄性生殖組織中沒(méi)有顯著的表達(dá)情況。隨后進(jìn)一步研究了RBX1蛋白,通過(guò)免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)RBX1的亞細(xì)胞定位,發(fā)現(xiàn)RBX1主要分布在細(xì)胞核中,并且在精子發(fā)育過(guò)程中隨著細(xì)胞核形態(tài)的變化而改變,可能與細(xì)胞核的分裂關(guān)系密切。通過(guò)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),中華絨螯蟹中RBX1與Cullin4互相結(jié)合,認(rèn)為RBX1能夠通過(guò)結(jié)合Cullin4形成Cullin-RING E3泛素連接酶,在泛素化中發(fā)揮作用。根據(jù)以上結(jié)果,認(rèn)為RBX1可能通過(guò)CRL4在中華絨螯蟹精子發(fā)生過(guò)程中對(duì)細(xì)胞的分裂起到調(diào)控作用。
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S917.4

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