【摘要】：目前,羅非魚是世界第三重要養(yǎng)殖魚類,其養(yǎng)殖產(chǎn)量預計于2025年達世界水產(chǎn)養(yǎng)殖總產(chǎn)量的六成。無乳鏈球菌(Group B Streptococcus,GBS)是危害羅非魚養(yǎng)殖的重要細菌性病原之一,GBS可造成羅非魚患嚴重疾病,故GBS病是我國亟需凈化水生動物第三類疾病。目前,羅非魚GBS病的應用研究已得到足夠重視和支持,也取得了一定成果,頭腎是魚類重要的免疫造血器官,也是GBS主要侵襲的部位。然而,對GBS對頭腎造成的病理損傷鮮有報道。因此本論文對感染GBS羅非魚的頭腎開展動態(tài)病理損傷研究,以期豐富羅非魚鏈球菌病的基礎研究,為后續(xù)的應用研究奠定基礎,本研究選用(250±10)g健康吉富羅非魚20尾,對頭腎進行大體、組織學和超微結構觀察;160尾,隨機分為5組,使用劑量為1.0×10~7 cfu GBS對羅非魚進行攻毒,于注射GBS后第0、4、8、24和72 h采集頭腎。用光鏡、電鏡技術、流式細胞術和SABC免疫組化染色等方法研究頭腎正常結構和GBS動態(tài)分布規(guī)律,建立病理評分體系,對感染進行分期,探討GBS量對各頭腎病理分期的影響,為揭示頭腎病理損傷機制和GBS的致病機制提供新思路。結果如下:1:羅非魚頭腎位于心腹腔隔膜背前方,分左右兩瓣,成年羅非魚頭腎組織內無腎單位,組織學上,可分為2區(qū),中央?yún)^(qū)和外周區(qū),中央?yún)^(qū)由淋巴樣組織和血竇構成,含黑色素巨噬細胞中心,淋巴組織排列成索狀,圍繞血管呈放射狀分布,淋巴索之間由血竇隔開,外周區(qū)則以彌散性淋巴組織為特征,血竇較少也較小,是典型的造血淋巴組織。2:感染無乳鏈球菌后,魚體大體動態(tài)病理變化主要體現(xiàn)在內臟器官的充血、出血、腫大,角膜渾濁和腦軟化,頭腎主要體現(xiàn)在顏色和頭腎體指數(shù),表現(xiàn)為0-4h,顏色變暗,4-24h,明顯腫大,顏色變暗,呈不同程度的紫紅色,24-72h,頭腎腫大和顏色變暗的程度雖比4-24h減輕,但仍然腫大和顏色變暗;頭腎體指數(shù)在攻毒后0-4h,極顯著增大,8-24h,顯著增大,24-72h,極顯著增大。主要的組織動態(tài)病理學變化為:攻毒后4-8h,黑色素巨噬細胞中心數(shù)量明顯減少,體積縮小,成分少,著色淺,結構松散,動脈內皮細胞脫落,開始出現(xiàn)炎性細胞邊移、貼壁;8-24h,數(shù)量減少甚至消失,僅存少量棕色顆粒,內皮細胞腫脹、脫落,中膜平滑肌變性、壞死,內膜、中膜、外膜各層均有水腫及炎性細胞浸潤,淋巴索排列紊亂,血竇淤血嚴重,血管通透性升高,血管旁出現(xiàn)均質紅染的炎性滲出物和炎性細胞,24h時,頭腎內成團聚集大量GBS,GBS表面有莢膜,在淋巴細胞、巨噬細胞和紅細胞內存活;24-72h,黑色素巨噬細胞中心大量增加,體積小,成分消失,不能著棕褐色或黑色顆粒,結構松散呈空泡,間質變成境界不清條團狀無結構紅染物質,淋巴細胞和巨噬細胞減少,充血嚴重,黑色素巨噬細胞中心壞死溶解,見大量壞死區(qū)。細胞主要的動態(tài)病理變化為:攻毒后0-24h,活細胞數(shù)量無顯著差異;24-72h,活細胞數(shù)量極顯著減少,組織中細胞發(fā)生大量凋亡壞死。細菌在攻毒后4-8h,GBS量顯著增多,24-72h,GBS量極顯著增多。結合典型動態(tài)病理變化和GBS含量,可診斷出感染1.0×10~7 cfu GBS的羅非魚頭腎患急性細菌性化膿性炎癥,病程分3期,反應期(0-4h):大體正常,頭腎體指數(shù)增大,黑色素巨噬細胞中心和血管正常,無GBS,無壞死區(qū);緩滯期(4-8h):大體正常,頭腎體指數(shù)顯著增大,黑色素巨噬細胞中心和淋巴細胞減少,頭腎血管損傷,組織內開始出現(xiàn)少量GBS,無壞死區(qū);危亡期(8-24h):魚體出現(xiàn)典型癥狀,頭腎體指數(shù)顯著增大,黑色素巨噬細胞中心和淋巴細胞減少,頭腎血竇內大量紅細胞充盈、淤血,有大量炎性滲出和GBS,無壞死區(qū);危亡期(24-72h):魚體出現(xiàn)典型癥狀,頭腎體指數(shù)顯著增大,黑色素巨噬細胞中心增多,充血,有大量GBS,有壞死區(qū)。綜上:GBS感染吉富羅非魚后,頭腎結構受到明顯損傷,過度炎癥反應可能是導致魚體急性死亡的重要原因。
【學位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S943
【圖文】：

2.1 頭腎的解剖結構觀察頭腎的解剖位置：取10尾健康羅非魚，剖解前用0.1g/LMS-222麻醉，死后置于冰上。將5尾羅非魚左側平放（圖2-1a），從肛門前端起剪，斜向上至側線，再沿側線下方剪至胸鰭上方，接著斜向下剪至圍心腔前端（圖2-1b），暴露羅非魚腹腔，觀察頭腎位置。同時，將5尾羅非魚右側平放，按相同方式解剖，觀察頭腎位置。圖2-1 羅非魚解剖過程Figure 2-1Anatomical procedure頭腎的形態(tài)觀察：將頭腎暴露后，觀察頭腎的形態(tài)和顏色，再沿著體腔壁小心分離出組織，剔除周圍脂肪，并用PBS洗滌表面血液

3 結果3.1 大體位置羅非魚沿左側剖開后，可見腸道和肝臟充滿整個腹腔（圖2-2a），取除整個腹腔內容物后，可見頭腎位于腎臟最前端，頭部后方，圍心腹腔隔膜背前方，顏色偏暗紅，與體腎連接，呈典型Y字形，沿體柱向后延伸（圖2-2b），羅非魚頭腎左右各一，對稱分布，分為2葉，被膜光滑，30g-360g健康羅非魚頭腎的絕對重量為（0.0327-0.822g）

血竇的大小和形狀不規(guī)則。外周區(qū)則以淋巴細胞排列密集的彌散性淋巴組織為特征，血竇較少也較小。表面有一層膠原纖維結締組織性薄膜，膠原纖維成束平行排列，邊緣部分細胞密度大且細胞間隙小（圖2-3 B）。圖2-3 羅非魚頭腎分區(qū) H&E染色圖A.頭腎橫切面。分為2區(qū)：1.中央?yún)^(qū)，2.外周區(qū)；B. 3.被膜。

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本文編號：2784159