發(fā)布時間：2020-08-07 22:16

【摘要】：中國大鯢是我國二級珍貴保護動物,同時也是我國重要的特種經(jīng)濟動物之一,大鯢是魚類和爬行類的過渡物種,有著獨特的生物學(xué)特性、生活環(huán)境和進(jìn)化地位。研究表明,腸道菌群和動物機體的生長發(fā)育、營養(yǎng)吸收、物質(zhì)代謝、疾病發(fā)生和免疫調(diào)控等有著非常密切的關(guān)系,大鯢在獨特的生活環(huán)境下或許有著獨特的菌群結(jié)構(gòu),但是,目前有關(guān)大鯢腸道菌群的研究報道仍十分缺乏。本實驗采用變性梯度凝膠電泳(PCR-DGGE)、高通量測序技術(shù)和傳統(tǒng)培養(yǎng)法研究了重慶市武隆區(qū)火爐鎮(zhèn)大鯢養(yǎng)殖場大鯢的腸道菌群結(jié)構(gòu),同時使用30種抗生素對分離出的大鯢腸道細(xì)菌進(jìn)行藥敏特性研究,以期進(jìn)一步揭示大鯢腸道菌群與健康的關(guān)系,為大鯢的疾病防控提供一定的實驗依據(jù)。研究結(jié)果如下:1.大鯢腸道菌群的變性梯度凝膠電泳(PCR-DGGE)分析采用PCR-DGGE技術(shù),研究大鯢腸道菌群結(jié)構(gòu),得到了大鯢腸道內(nèi)優(yōu)勢菌群的基因指紋圖譜。結(jié)果顯示,不同健康大鯢的腸道菌群結(jié)構(gòu)組成相似度達(dá)到42%,腸道內(nèi)細(xì)菌種類豐富,香農(nóng)維納多樣性指數(shù)較高,腸道細(xì)菌均勻度十分接近,無較大差異。對全部56個條帶進(jìn)行切膠回收,成功測序的條帶有39個,腸道核心菌群為變形菌門、放線菌門、擬桿菌門、厚壁菌門4個門類,最亮的條帶主要是Aquabacterium屬、Lacinutrix屬、Actinopolyspora屬、節(jié)桿菌屬、沙雷氏菌屬和梭菌屬。2.大鯢腸道菌群的高通量測序分析為了進(jìn)一步了解大鯢腸道菌群的全貌,采用高通量測序技術(shù),對大鯢腸道菌群結(jié)構(gòu)進(jìn)行了詳細(xì)的研究。結(jié)果顯示,養(yǎng)殖大鯢腸道內(nèi)的細(xì)菌種類豐富,核心菌群包括擬桿菌門、變形菌門、厚壁菌門和疣微菌門,而且擬桿菌門的數(shù)量最多,大鯢的腸道優(yōu)勢菌為擬桿菌屬的細(xì)菌。經(jīng)過饑餓處理之后,核心菌群種類基本沒有變化,但是變形菌門和梭桿菌門的數(shù)量有一定的下降,而厚壁菌門的數(shù)量有較明顯的上升趨勢。對腸道細(xì)菌樣本進(jìn)行α多樣性分析,發(fā)現(xiàn)饑餓處理后腸道細(xì)菌的多樣性、豐富度、均勻度都有一定程度的下降。進(jìn)行β多樣性分析發(fā)現(xiàn),在攝食組和饑餓組組內(nèi),腸道細(xì)菌的物種多樣性差異很小,攝食組與饑餓組腸道細(xì)菌的物種多樣性差異較大。攝食組組內(nèi)物種組成結(jié)構(gòu)非常相似,但是,攝食組和饑餓組進(jìn)行比較時,發(fā)現(xiàn)兩組間物種組成差異非常明顯。3.傳統(tǒng)培養(yǎng)法分離鑒定大鯢腸道細(xì)菌采用傳統(tǒng)培養(yǎng)法,利用LB、TSA、EE、BHI 4種培養(yǎng)基對健康大鯢腸道細(xì)菌進(jìn)行分離純化,并對分離菌株進(jìn)行16S和生理生化鑒定。結(jié)果顯示,本試驗共分離得到9株細(xì)菌,包括7株變形菌門細(xì)菌和2株厚壁菌門細(xì)菌。健康大鯢腸道正常細(xì)菌包括益生菌、條件致病菌和致病菌,其中,益生菌是巴達(dá)維亞芽孢桿菌,條件致病菌包括嗜水氣單胞菌、弗氏檸檬酸桿菌、鯰魚愛德華氏菌、產(chǎn)氣腸桿菌、塔氏弧菌、奇異變形桿菌和純黃腸球菌,致病菌是類志賀鄰單胞菌。4.大鯢腸道分離細(xì)菌藥敏性分析采用30種抗生素研究了9株腸道細(xì)菌的藥敏特性。結(jié)果顯示,9株腸道細(xì)菌對多數(shù)抗生素有較強的敏感性,使用抗生素對腸道細(xì)菌有較大的影響。頭孢他啶、氧氟沙星、多西環(huán)素、哌拉西林和頭孢曲松能抑制多種條件致病菌和致病菌,同時對有益細(xì)菌影響較小,可以有效改善大鯢腸道菌群結(jié)構(gòu)。綜上所述,本文結(jié)論如下:本研究采用的三種不同方法研究了大鯢腸道菌群結(jié)構(gòu),傳統(tǒng)培養(yǎng)法局限性較大,無法全面揭示腸道菌群結(jié)構(gòu),PCR-DGGE只能測出腸道優(yōu)勢菌的序列,微量細(xì)菌的序列無法得到,三種方法中以高通量測序技術(shù)的測序量足夠且可信,不僅能得到優(yōu)勢菌的序列,還能得到微量細(xì)菌的序列,能較為準(zhǔn)確和全面地反映健康大鯢腸道菌群結(jié)構(gòu)。養(yǎng)殖大鯢腸道核心菌群主要是擬桿菌門、厚壁菌門、變形菌門以及疣微菌門的細(xì)菌組成,其中,擬桿菌屬的細(xì)菌是腸道內(nèi)的優(yōu)勢菌。藥敏特性研究顯示,30種抗生素對每種大鯢腸道細(xì)菌有不同程度的影響,應(yīng)合理使用抗生素治療大鯢疾病,盡量選用對條件致病菌和對致病菌敏感而益生菌不敏感的抗生素。
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S947.3;S917

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2784599