發(fā)布時間：2020-08-01 16:22

【摘要】：維氏氣單胞菌(Aeromonas veronii,A veronii)是一種人-獸-魚共患病原菌,它普遍分布于自然環(huán)境中,能引起魚蝦等多種水生動物發(fā)病而大量死亡,部分國家已將其列為檢疫項目,國內(nèi)外已陸續(xù)開展了有關維氏氣單胞菌的科研工作。胞外產(chǎn)物(Extracellular products,ECPs)是病原菌在生長發(fā)育與繁殖過程中接連不斷向外環(huán)境分泌的產(chǎn)物,其具有良好的免疫原性,能夠引起宿主產(chǎn)生免疫應答反應,是一種有效的保護性抗原。目前國內(nèi)外還沒有維氏氣單胞菌胞外產(chǎn)物免疫效果的研究。本文以維氏氣單胞菌TH0426株為實驗材料,制備其胞外產(chǎn)物,觀察胞外產(chǎn)物對錦鯉的免疫保護效果,同時對胞外產(chǎn)物進行免疫蛋白組學分析,鑒定免疫原性蛋白。首先采用超濾濃縮法制備維氏氣單胞菌TH0426株的胞外產(chǎn)物,應用SDS-PAGE電泳對其進行初步分析,通過平板瓊脂擴散法對其主要酶成分進行初步研究,對蛋白酶、脂酶、卵磷脂酶、淀粉酶、脲酶、明膠酶和溶血活性進行測定,同時對錦鯉腹腔注射胞外產(chǎn)物測定其致病性。結果表明維氏氣單胞菌TH0426株胞外產(chǎn)物具有脂酶、淀粉酶、蛋白酶和溶血酶活性,不具有卵磷脂酶、脲酶和明膠酶活性,對錦鯉具有明顯的致病性,其LD50為391.6μg/條。對胞外產(chǎn)物進行免疫保護力研究。將240尾錦鯉分為四組,每組60尾。第一組免疫聯(lián)合弗氏佐劑的ECPs蛋白(即ECPs),第二組免疫聯(lián)合弗氏佐劑的ECPs與維氏氣單胞菌TH0426滅活全菌混合劑(即FKC+ECPs),第三組免疫聯(lián)合弗氏佐劑的維氏氣單胞菌TH0426滅活全菌(即FKC),第四組免疫滅菌PBS緩沖液作為對照。實驗前預養(yǎng)一周,免疫后第三周進行二次免疫,以觀察在加強免疫后的錦鯉免疫指標變化。免疫期間每隔一周采血一次,每組隨機選擇5尾錦鯉進行尾靜脈采血,采血后的錦鯉做淘汰處理,采集的血清進行白細胞介素1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、溶菌酶(LZM)和IgM含量的檢測;首次免疫四周后,各組隨機選取20尾錦鯉腹腔注射0.2mL2×106cfu/mL的維氏氣單胞菌TH0426,觀察各組的相對免疫保護率,并評估其免疫保護效果。結果顯示免疫后各實驗組錦鯉顯著提高抵抗細菌的侵襲的能力,提高了免疫保護力,并且免疫ECPs的效果較佳,其相對免疫保護率達到了75%,免疫FKC+ECPs和FKC的相對免疫保護率也達到了55%和70%。各免疫指標也顯示免疫ECPs后能夠誘導錦鯉機體產(chǎn)生免疫應答反應,并能形成較高保護力。胞外產(chǎn)物進行了免疫蛋白組學2-DE圖譜分析和2-DE凝膠的免疫印跡分析,鑒定胞外產(chǎn)物中具有免疫原性的蛋白,并運用PCR檢測三種免疫原性蛋白在維氏氣單胞菌不同分離株中的分布。實驗結果表明胞外產(chǎn)物含有11種具有免疫原性的蛋白,分別為肽酶S8、長鏈脂肪酸轉運蛋白、膜蛋白、溶血素樣毒素、主要外膜蛋白OmpAI、麥芽糖、ABC底物結合轉運蛋白和幾種假設蛋白。其中三種高豐度的蛋白,膜蛋白、長鏈脂肪酸轉運蛋白和肽酶S8在維氏氣單胞菌不同分離株的分布率分別為97%(97/100)、89%(89/100)和77%(77/100)。這些免疫原性蛋白作為疫苗候選蛋白,為維氏氣單胞菌胞外產(chǎn)物亞單位疫苗的研制提供了理論參考。
【學位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S941.4
【圖文】：

圖 3.1 雙向凝膠電泳原理圖[75]Fig3.1 Scheme of principle of 2D gel electrophoresis.[75備過程中蛋白質的電荷不能有任何改變。這意劑，如 SDS，都不能使用。因此，必須依靠

圖 3.2 基于 2D 凝膠的蛋白質組學原理圖[75]Fig3.2 Scheme of principle of 2D gel-based proteomics[75]學鑒定水平要高于鳥槍法蛋白質組學分析[84,85]。因此，基于

圖 1.1 蛋白含量檢測標準曲線Fig1.1 Protein content detection standard curve酶活性檢測結果擴散后，胞外產(chǎn)物酶活性試驗結果表明，胞外產(chǎn)物在脂

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3 王斌;于蘭萍;袁甜;姜志強;;哈氏弧菌胞外產(chǎn)物對紅鰭東方渶的致病性[J];中國水產(chǎn)科學;2010年01期

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6 祝玲;林阿乞;李娟;劉麗;蔡俊鵬;吳忠業(yè);;雜交鮑稚鮑“漫爬病”潛在病原菌胞外產(chǎn)物的分析及種類鑒定[J];水產(chǎn)科學;2007年10期

7 周葉方,胡方平,葉誼,謝聯(lián)輝;水稻細菌性條斑病菌胞外產(chǎn)物的性狀[J];福建農(nóng)業(yè)大學學報;1998年02期

8 張春嵋,王建生,邵碧英,吳祖建,林奇英,謝聯(lián)輝;鱉病原細菌的分離鑒定及胞外產(chǎn)物的初步分析[J];福建農(nóng)業(yè)大學學報;1999年01期

9 張朝霞,王軍,蘇永全,幺久剛,周勝利,鄢慶枇;斑節(jié)對蝦病原菌胞外產(chǎn)物的致病性研究[J];海洋學報(中文版);2000年05期

10 王志,蔡俊鵬,徐麗,楊吉霞,張昕;南方九孔鮑培苗過程中潛在致病菌胞外產(chǎn)物的分析[J];微生物學報;2005年04期

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6 曾靜;董慶利;高翠;熊成;;冷卻豬肉中氣單胞菌生長模型的構建及其貨架期預測[A];第七屆全國食品冷藏鏈大會論文集[C];2010年

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8 向楨;鄭曙明;吳青;;沒食子酸對維氏氣單胞菌毒力基因表達的影響[A];2013年中國水產(chǎn)學會學術年會論文摘要集[C];2013年

9 厲保秋;楊志堅;Takayaki;朱振平;于麗華;;重組蛋氨酸酶在獼猴體內(nèi)的藥代動力學、免疫原性及系統(tǒng)毒性[A];山東省藥學會第一屆學術年會論文集（下）[C];2005年

10 ;免疫學技術、方法[A];第七屆全國免疫學學術大會論文集[C];2010年

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4 偉嘉集團河南分公司 崔海霞;構建家禽堅強免疫體系的解決方案[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2010年

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