【摘要】：在廣東乃至整個華南地區(qū),由于水系發(fā)達,大部分地區(qū)是以鴨-魚混養(yǎng)模式為主。在養(yǎng)殖過程中,大量的抗菌藥物被用于促生長和防治疾病,導(dǎo)致動物源性致病菌的耐藥性越來越嚴重,這些攜帶有耐藥基因(ARGs)的細菌經(jīng)排泄物等途徑未經(jīng)處理就進入環(huán)境土壤、地表、地下水體中,成為環(huán)境中抗生素耐藥基因的主要來源,而ARGs作為一種潛在的環(huán)境污染物,受到了人們的廣泛關(guān)注。本論文選擇三個廣東地區(qū)典型的鴨魚混養(yǎng)型養(yǎng)殖場,按一年四個季度連續(xù)四次采集養(yǎng)殖場周邊環(huán)境樣品(土壤、底泥、水),通過熒光定量的方法連續(xù)監(jiān)測其耐藥基因豐度;以及通過16S rDNA高通量測序的方法監(jiān)測微生物群落結(jié)構(gòu)的變化情況。監(jiān)測結(jié)果顯示,在所有樣品中磺胺類藥物耐藥基因的豐度較高,其中以sul1基因豐度最高,在土壤、底泥和水中的平均相對豐度分別達到8.15×10-1、3.12×10-1和2.31×10-1copies/16S rDNA copies,高于之前文獻報告的豐度,環(huán)境中耐藥基因污染嚴重;結(jié)合各類基因豐度大小及其相關(guān)性分析,初步確定了每類藥物耐藥基因中具有代表性的指示基因,即磺胺類藥物的sul1基因,四環(huán)素類藥物的tetM基因,喹諾酮類藥物的aac(6’)-Ib基因,酰胺醇類藥物的floR基因,β-內(nèi)酰胺類藥物的blaTEM基因。在不同種類環(huán)境樣品中,微生物群落基因豐度呈現(xiàn)土壤樣品底泥水的變化趨勢(p0.05),而耐藥基因的相對總濃度(∑ARGs)表現(xiàn)為土壤顯著高于底泥和水。在不同的采樣季節(jié)之間,微生物群落(16S rDNA)的豐度和耐藥基因的相對豐度(∑ARGs copies/16S rDNA copies)均出現(xiàn)一定的變化,但無明顯的變化規(guī)律。對環(huán)境樣品的微生物結(jié)構(gòu)多樣性分析結(jié)果表明,不同種類的環(huán)境樣本在不同季節(jié)其微生物群落結(jié)構(gòu)多樣性存在一定的差異,其群落優(yōu)勢細菌為變形桿菌門(Proteobacteria)、擬桿菌門(Bacteroidetes)、放線菌門(Actinobacteria)、厚壁菌門(Firmicutes)和綠彎菌門(Chloroflexi);其中致病優(yōu)勢細菌為不動桿菌屬、假單胞菌屬和黃桿菌素細菌等,且在不同種類環(huán)境樣本和季節(jié)中所占的比例均表現(xiàn)不同。經(jīng)致病菌與耐藥基因的相關(guān)性研究表明,黃桿菌屬、棒狀桿菌和假單胞菌屬與耐藥基因之間具有較強的相關(guān)性,環(huán)境中主要種類抗菌藥耐藥基因的豐度變化與環(huán)境中致病菌之間存在一定關(guān)系。本文研究結(jié)果可為鴨魚混養(yǎng)場在不同季節(jié)的疾病防治及其合理用藥提供一定的參考。
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S917.1
【圖文】：

08copies/g；酰胺醇類耐藥基因（∑cml）的豐度為 7.67×106～2.49×109copie耐藥基因在土壤中的豐度大小為∑sul > ∑cml > ∑qnr > ∑tet >∑bla，其中∑su高，但其與∑qnr，∑cml 在一個數(shù)量級上，比∑tet，∑bla 高一個數(shù)量級。過對土壤，底泥，水中的耐藥基因豐度的比較，其中土壤的耐藥基因豐度比耐藥基因豐度高一個數(shù)量級，底泥則比水中的耐藥基因高一個數(shù)量級。對定量結(jié)果了客觀真實地反映環(huán)境樣品中 ARGs 的分布情況和污染水平，所有 ARG果均通過 16S rDNA 基因均一化處理，目的基因與 16S rDNA 基因絕對含量示 ARGs 的相對豐度。耐藥基因相對豐度的數(shù)據(jù)結(jié)果（ARGs copies/16S rD見附錄。原始數(shù)據(jù)通過 log2 標(biāo)準化處理得到圖 2，可以看到，sul1、sul2、faac(6’)-Ib、cmlA 和 tetA 的豐度在所有樣品中均具有較高的豐度，以磺胺類的豐度最高；土壤樣品中各耐藥基因的豐度的表現(xiàn)高于其他兩類樣品。

圖 3 各類耐藥基因總濃度樣各類基因總濃度變化，b：底泥樣品各類基因總濃度，c：土樣各類基因總最上面一條線表示最大值，最下面一條線表示最小值，中間的紅線表示中位數(shù)數(shù)，Q3 表示上四分位數(shù)；磺胺類的總濃度（sul），四環(huán)素的總濃度（tet），喹（qnr），β-內(nèi)酰胺類的總濃度為（bla），酰胺醇類的總濃度為（cml）。節(jié)對 ARGs 豐度的影響個鴨魚混養(yǎng)場的周圍環(huán)境樣品（水，底泥，土壤）四個不同季節(jié)的6S rDNA）和耐藥基因的豐度進行比較，其結(jié)果見圖 4 和圖 5。微生介質(zhì)中豐度不同，土壤樣品中微生物豐度顯著高于水和底泥，底泥.05），耐藥基因的總濃度（∑ARGs）土壤顯著高于底泥和水，底泥化。樣中，秋季樣品的微生物的豐度與冬季和春季的樣品具有顯著性差

31圖 5 不同季節(jié)，樣品的 ARGs 豐度圖中，四個季度的∑ARGs copies/16S rDNA copies 進行比較，各變化；在底泥中，∑ARGs copies/16S rDNAcopies 在冬季和春秋季相對豐度最高；在土壤中，∑ARGs copies/16S rDNA cop都存在顯著性差異，在冬季相對豐度最高�；蛑g的相關(guān)性pss20.0 軟件，對耐藥基因之間的相關(guān)性進行分析，其結(jié)果如表

【參考文獻】

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本文編號：2773224