【摘要】：線蟲由于種類繁多,形態(tài)相似,僅僅依靠肉眼無法對其進行具體種類的鑒定。在2017年10我們在月,上海某淡水湖泊的魚類調(diào)查中,發(fā)現(xiàn)翹嘴湆(Culter alburnus Basilewsky)和花?(Hemibarbus maculatus Bleeker)腹腔內(nèi)感染線蟲,但無法確定其具體的種類。為了弄清該種線蟲的具體種類及分類地位,對翹嘴湆和花骨魚腹腔內(nèi)采集到的蟲體進行分子生物學分析,通過18S rDNA序列比對,發(fā)現(xiàn)線蟲與寄生在西太公魚(Hypomesus transpacificus nipponensis)腹腔內(nèi)的Eustrongylides ignotus 18S rDNA序列相似度達到100%,與寄生在西部食蚊魚(Gambusia affinis)腹腔內(nèi)的Eustrongylides ignotus 18S rDNA序列相似度達到99.87%,結(jié)果表明,寄生于翹嘴湆和花骨魚腹腔內(nèi)線蟲均為伊格諾圖斯胃瘤線蟲Eustrongylides.ignotus(簡稱伊胃瘤線蟲,登錄號:MK340916)。在根據(jù)18S rDNA序列確定該線蟲為E.ignotus的基礎上,測定了并確定了本線蟲的ITS rDNA序列。通過肉眼、顯微鏡下和掃描電子顯微鏡觀察進行研究,線蟲的主要特征蟲體粉紅色,圓桶形,體中部粗細均勻,兩端逐漸細,頭部呈圓錐形,口呈裂縫狀,蟲體頭部有兩圈乳突,內(nèi)圈6個棘狀乳突,外圈6個乳頭狀乳突,肛門開口于蟲體末端正中央與已報道的伊格諾圖斯胃瘤線蟲外部形態(tài)一致,而且蟲體有三層角質(zhì)層,從而確定該線蟲屬于伊格諾圖斯胃瘤線蟲Ⅳ期幼蟲。新發(fā)現(xiàn)蟲體體表兩側(cè)分布有體側(cè)斑突,有直凹紋,中心處有小點狀微突,另外,新補充測量蟲體體長、食道長、口腔長、棘狀乳突、乳頭狀乳突、側(cè)體斑狀突起、尾斑狀突起的尺寸大小等數(shù)據(jù)。新補充了該蟲體的食道、腸道和生殖系統(tǒng)等內(nèi)部結(jié)構(gòu)的形態(tài)特征�？谇怀蕡A錐形,食道前部較細,后部稍粗,為圓筒型食道,食道長約占蟲體長的五分之一。食道分為一個背側(cè)腺和兩個下腹腺,圍成的食道腔呈三放射形,食道部位外側(cè)的體壁體肌由許多單層縱列肌細胞組成。腸道由前腸部、中腸部和后腸部構(gòu)成,腸道通過腸系膜與體壁連接,由單層柱狀上皮細胞組成。腸道部位外側(cè)的體壁體肌為單層梭形縱列肌細胞層,體肌一般被分隔為4個索區(qū),肌細胞附著在下皮層,另一端伸入體腔,伸出的末端與其它體肌末端或一些特化肌相連。生殖系統(tǒng)分布在蟲體后部,雌蟲生殖系統(tǒng)由卵巢和輸卵管組成,卵巢外層由成纖維細胞組成的結(jié)締組織包圍,內(nèi)部為卵母細胞,輸卵管在體腔內(nèi)有多個迂回,輸卵管外層為成纖維細胞組成的結(jié)締組織,內(nèi)層為短柱狀上皮細胞,未發(fā)現(xiàn)成熟的卵。雄蟲生殖系統(tǒng)主要由精巢與長輸精管組成,精巢外層為由成纖維細胞組成的薄層結(jié)締組織,內(nèi)層為精母細胞,輸精管從蟲體中部開始向后延伸,由外層為成纖維細胞組成的結(jié)締組織和內(nèi)層為短柱狀上皮細胞構(gòu)成,未見伸出體外的針狀體結(jié)構(gòu)。通過組織切片,研究了伊格諾圖斯胃瘤線蟲四期幼蟲對魚體的組織病理損傷,結(jié)果表明:除部分線蟲附著分布在魚腹腔內(nèi)的內(nèi)臟組織器官的表面外,其他線蟲以被包裹的包囊形式寄生于肝臟和腸系膜等組織。包囊呈粉紅色,一般為卵圓形,初期線蟲蟲體的發(fā)育和刺激,寄生的附近組織器官中的成纖維細胞增值,形成結(jié)締組織層,包裹蟲體;中期,包囊壁結(jié)締組織中成纖維細胞等細胞出現(xiàn)壞死,壞死細胞從包囊壁內(nèi)表面逐漸脫落進入包囊腔內(nèi);包囊后期,包囊壁壞死細胞增多,導致包囊壁破裂。在肝臟內(nèi)而形成的包囊,初期對肝臟影響不明顯,隨著包囊壁的增厚,包囊與肝臟緊密結(jié)合處常出現(xiàn)嗜酸性白細胞浸潤現(xiàn)象,肝臟組織充血和含鐵血黃素的色素沉著等現(xiàn)象。在脾臟內(nèi)形成的包囊,引起脾臟內(nèi)出現(xiàn)少量的缺血和出現(xiàn)含鐵血黃素。腸系膜內(nèi)出現(xiàn)數(shù)條線蟲,導致腸系膜內(nèi)出現(xiàn)大量的嗜酸性白細胞,胰腺組織出現(xiàn)分泌顆粒。本文通過分子生物學、形態(tài)學和病理學的分析研究,確定了該線蟲種類、分類地位、特征和其對寄主魚組織病理的損傷,對補充和豐富該線蟲的相關知識以及掌握其對翹嘴湆和花?的組織病理損傷作用等方面都具有重要意義。
【學位授予單位】：上海海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S941.524
【圖文】：

圖 2-1 魚體內(nèi)的線蟲1.線蟲在魚腹腔內(nèi)形成的包囊( )。2.魚腹腔內(nèi)游離的線蟲( )。Figure 2-1 Nematode worms in fish1.A cyst( ) formed by a nematode in the abdominal cavity of a fish. 2. Nematode( )in the

圖 2-2 線蟲 18S rDNAPCR 擴增產(chǎn)物電泳圖.翹嘴湆體內(nèi)線蟲 PCR 擴增產(chǎn)物；2.花 體內(nèi)線蟲 PCRre 2-2 Electrophoresis of PCR products of nematode 18; 1. PCR product of Culter alburnus Basilewsky；2. P3. Blank control group.

?. PCR product of Hemibarbusmaculatus Bleeker；3. Blank control group.來自2種魚的線蟲ITS rDNA PCR擴增產(chǎn)物電泳同樣出現(xiàn)相同單一的條帶（圖2-5），經(jīng)測序序列完全相同，均為 997bp，GenBank 登錄號為（MK340917）經(jīng)比對，未發(fā)現(xiàn) Eustrongylides ignotus 的 ITS rDNA 序列在 GenBank 上有記錄，但與寄生于黃鱔（Monopterus albus）和烏鱧（Channa argus）等魚腹腔內(nèi)的未定種 Eustrongylides sp 在 GenBank 上登錄號分別為(GQ215522.1)（、GQ215576.1）、（GQ215551.1 ）、（GQ215555.1）、（GQ215550.1）、（GQ215536.1 ）、（GQ215543.1）、（GQ215577.1）、（GQ215573.1）和（GQ215542.1）等的 ITS rDNA 序列相似度分別達到 99.80%～100%，與(GQ215522.1)完全一致，與 （GQ215576.1）僅有一個堿基的差異（圖 2-6）。Eustrongylides_sp GQ215522.1 : TTGGATGATTCGGTGAGGTCTTCGGACCGATGCTTCGTGTTGATCCGTTE.ignotus MK340917 : TTGGATGATTCGGTGAGGTCTTCGGACCGATGCTTCGTGTTGATCCGTTEustrongylides_sp GQ215576.1 : TTGGATGATTCGGTGAGGTCTTCGGACCGATGCTTCGTGTTGATCCGTTEustrongylides_sp GQ215522.1 : GCGGATTGGCTGTTGCGTTGGGAAGTTGGCCGAACCCAACCATCTAGAGE.ignotus MK340917 : GCGGATTGGCTGTTGCGTTGGGAAGTTGGCCGAACCCAACCATCTAGAGEustrongylides_sp GQ215576.1 : GCGGATTGGCTGTTGCGTTGGGAAGTTGGCCGAACCCAACCATCTAGAGEustrongylides_sp GQ215522

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本文編號：2772155