【摘要】：嗜水氣單胞菌是水產(chǎn)養(yǎng)殖中常見的致病菌,能引起大規(guī)模漁業(yè)疫情的爆發(fā),給漁業(yè)養(yǎng)殖帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。此外,也有相關(guān)報(bào)道該菌能夠引起鳥類和哺乳類的腹瀉和敗血癥。因此,嗜水氣單胞菌的相關(guān)研究受到了國內(nèi)外的廣泛重視。本文從實(shí)驗(yàn)菌株的毒力基因檢測、人工感染試驗(yàn)、細(xì)菌鑒定和細(xì)菌的組織中分布情況等方面進(jìn)行初步研究,相關(guān)研究結(jié)果為有關(guān)嗜水氣單胞菌的傳播途徑和致病機(jī)理提供理論支持。實(shí)驗(yàn)菌株由上海海洋大學(xué)楊先樂教授實(shí)驗(yàn)室惠贈(zèng),菌株經(jīng)NB液體培養(yǎng)基活化后提取核酸。嗜水氣單胞菌的毒力基因檢測實(shí)驗(yàn)是根據(jù)已報(bào)道的氣溶素(AH-78-2-Aer)基因的保守序列設(shè)計(jì)特異性引物,利用PCR技術(shù)對嗜水氣單胞菌氣溶素基因進(jìn)行擴(kuò)增,獲得了氣溶素基因的特異片段。測序結(jié)果證明擴(kuò)增片段為氣溶素基因,其同源性與已報(bào)道的嗜水氣單胞菌氣溶素基因同源性為99%�；诖�,顯示實(shí)驗(yàn)菌株帶有毒力基因,是有致病性的嗜水氣單胞菌。以錦鯉為試材,對實(shí)驗(yàn)組錦鯉采取人工注射不同濃度的嗜水氣單胞菌,定期觀察及記錄實(shí)驗(yàn)魚的臨床癥狀和死亡情況。實(shí)驗(yàn)組臨床癥狀主要表現(xiàn)為：魚體表面均充血、變黑,有腐爛現(xiàn)象；魚腹部膨脹,肛門紅腫突出；解剖見病魚腹腔積水,內(nèi)臟有充血現(xiàn)象,腸壁周圍有較多的淡黃色粘液；魚鰾體積變大,魚鰾壁有加厚現(xiàn)象,魚鰓失血且蒼白；對照組無任何不良癥狀和死亡記錄。利用組織劃線分離法,對實(shí)驗(yàn)組感病魚體內(nèi)細(xì)菌進(jìn)行分離,直至獲得純培養(yǎng)。通過菌落形態(tài)觀察、革蘭氏染色、生理生化反應(yīng)分析、掃描電鏡觀察及16SrDNA序列鑒定,確定了引起實(shí)驗(yàn)組魚發(fā)病的菌株為接種菌株,并可以從病、死魚體內(nèi)分離到實(shí)驗(yàn)菌株,顯示該菌株對錦鯉有極強(qiáng)的致病作用。采用藥敏紙片法對15種抗生素進(jìn)行藥敏試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)菌株對頭孢氨芐、頭孢噻吩、利福平、丁胺卡那、慶大霉素等藥物有敏感作用。說明在當(dāng)前漁業(yè)養(yǎng)殖中大規(guī)模應(yīng)用抗生素的情況下,該菌株已具有一定的耐藥性。模擬自然感染條件,在水族箱中直接加入實(shí)驗(yàn)菌株感染錦鯉,待實(shí)驗(yàn)魚有發(fā)病癥狀出現(xiàn)后,分別取不同組織制備組織切片,再通過特異性探針與組織切片進(jìn)行原位雜交,分析嗜水氣單胞菌在各組織器官內(nèi)的分布情況。結(jié)果顯示：在錦鯉肌肉、腸、腎臟、肝臟、鰓、腦組織中均檢測到嗜水氣單胞菌；其中,在肝臟和腎臟組織中,陽性信號分布多,在感染程度較重,部分雜交信號呈紫黑色,且出現(xiàn)大塊沉淀。
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S943

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2771052