【摘要】：本文選用10個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)對(duì)克氏原螯蝦的半同胞家系進(jìn)行分析和親子鑒定,首先用10個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)對(duì)隨機(jī)選取48個(gè)克氏原螯蝦個(gè)體進(jìn)行多態(tài)性檢測(cè),計(jì)算出48個(gè)個(gè)體在10個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)基因座上的平均觀測(cè)雜合度0.3455,平均期望雜合度為0.6224,平均香農(nóng)指數(shù)為1.1335,平均多態(tài)信息含量是0.5656,根據(jù)檢測(cè)結(jié)果,獲得了個(gè)體之間的遺傳距離并且繪制了 UPGMA聚類分析圖,結(jié)果表明基于克氏原螯蝦的這10個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的多態(tài)性可以測(cè)量出各個(gè)個(gè)體間的遺傳距離,這10個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)可以應(yīng)用于克氏原螯蝦遺傳多樣性的分析。在半同胞家系分析中,人工建立半同胞家系,對(duì)隨機(jī)選取的成年的三個(gè)雌蝦和兩個(gè)公蝦放入同一個(gè)水缸內(nèi)讓其自由交配,三個(gè)雌蝦分別抱卵后,從這三個(gè)家系中分別取14、14、15個(gè)子代及對(duì)應(yīng)的親本進(jìn)行3個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的基因型檢測(cè),對(duì)檢測(cè)結(jié)果利用GERUD2.0軟件分析,顯示第一個(gè)半同胞家系內(nèi)的子代最少有兩個(gè)父本,第二個(gè)半同胞家系內(nèi)的子代最少有三個(gè)父本,第三個(gè)半同胞家系內(nèi)的子代最少有四個(gè)父本,證明了克氏原螯蝦的交配方式是一對(duì)多進(jìn)行的,同時(shí)也說(shuō)明在實(shí)驗(yàn)前,雌蝦已經(jīng)和其他雄蝦交配過(guò)。在親子鑒定的實(shí)驗(yàn)中,實(shí)驗(yàn)材料為在半同胞家系實(shí)驗(yàn)中的材料,由于一個(gè)雌蝦可以和多個(gè)雄蝦進(jìn)行交配,產(chǎn)生的后代可以有多個(gè)父本,1號(hào)和2號(hào)為可疑父本,3號(hào)為第一個(gè)母本,從4號(hào)到17號(hào)為3號(hào)的子代,18號(hào)為第二個(gè)母本,19號(hào)到32號(hào)為18號(hào)的子代,33號(hào)為第三個(gè)母本,34號(hào)到48號(hào)為33號(hào)的子代。利用CERVUS3.0軟件計(jì)算這10個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的觀測(cè)雜合度范圍為0.354-0.896,期望雜合度范圍為0.588-0.807,平均期望雜合度為0.7193,多態(tài)信息含量為0.521-0.767,平均多態(tài)信息含量為0.6662,平均每個(gè)位點(diǎn)有5.6個(gè)等位基因。測(cè)量這10個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)親子排除率是:當(dāng)兩個(gè)親本基因型未知時(shí),則測(cè)得每一個(gè)位點(diǎn)的親本排除率(E-1P)范圍是0.177-0.417;當(dāng)一個(gè)親本基因型已知時(shí),測(cè)得另一個(gè)親本的排除率(E-2P)范圍是0.325-0.596;測(cè)得一對(duì)親本組合的雙親排除率(E-PP)是0.487-0.794,則10個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的第一親本累計(jì)非父排除概率是0.97616685,第二親本的累計(jì)非父排除概率是0.99869019,雙親的累計(jì)排除概率是0.99998479。進(jìn)一步的模擬分析,當(dāng)雙親性別知道時(shí),模擬子代選取10000個(gè),候選母本是3,候選父本是2,親本和子代的模擬配對(duì)率為100%;在雙親性別未知時(shí),以100%的鑒定率和95%的置信度標(biāo)準(zhǔn)下,這10個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)可在最多有45個(gè)親本并且雙親未知的情況下做親子鑒定,已經(jīng)滿足了大多數(shù)的同塘繁育實(shí)驗(yàn)需求。在親權(quán)鑒定時(shí),結(jié)果顯示兩個(gè)可疑父本都不是這43個(gè)子代的親生父本,這43個(gè)子代都找到了母本,4號(hào)到17號(hào)這14個(gè)子代的母本是3號(hào)個(gè)體,19號(hào)到32號(hào)這14個(gè)子代的母本18號(hào)個(gè)體,34號(hào)到48號(hào)這15個(gè)子代的母本是33號(hào)個(gè)體。測(cè)量這48個(gè)克氏原螯蝦的遺傳距離,然后根據(jù)遺傳距離繪制了 UPGMA聚類分析圖也證明了這兩個(gè)可疑父本不是仔蝦的生父,親權(quán)鑒定結(jié)果和UPGNA聚類分析圖相符合,表明這10個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)可以應(yīng)用于克氏原螯蝦的親子鑒定。基于獲得的三個(gè)半同胞家系遺傳分析數(shù)據(jù),本文提出了一種有效的鑒別克氏原螯蝦不同家系的分子標(biāo)記方法,在前述親子鑒定的實(shí)驗(yàn)中我們得出三個(gè)半同胞家系的親本沒(méi)有任何關(guān)系,是完全獨(dú)立的三個(gè)半同胞家系,我們用遺傳分析軟件Population軟件分析這三個(gè)家系個(gè)體之間的遺傳距離并構(gòu)建UPGMA進(jìn)化樹(shù),通過(guò)Population軟件計(jì)算出半同胞家系或全同胞家系個(gè)體之間的遺傳距離值域是小于0.579289,若兩個(gè)個(gè)體之間的遺傳距離小于0.579289,我們則考慮這兩個(gè)個(gè)體是全同胞關(guān)系或者半同胞關(guān)系,從而避免了個(gè)體之間的近親繁殖,從UPGMA進(jìn)化樹(shù)同樣可以看出來(lái)自不同家系的個(gè)體聚類在不同分枝上,這個(gè)有效的區(qū)分不同家系的個(gè)體的方法為克氏原螯蝦的選育和防止近親繁殖提供了理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S917.4
【圖文】：

２．２實(shí)驗(yàn)結(jié)果與統(tǒng)計(jì)分析逡逑２．２．１實(shí)驗(yàn)結(jié)果逡逑對(duì)４８?jìng)�(gè)克氏原桯郵個(gè)體共進(jìn)行了邋１０個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的檢測(cè)，圖２－１為引物ＰＣ１Ｇ０７逡逑的ＰＡＧＥ電泳圖譜，圖２－２為引物ＰｃｌＧ２７的ＰＡＧＥ電泳圖譜，圖譜顯示，檢測(cè)的４８?jìng)�(gè)逡逑克氏原呡邱個(gè)體在送１０個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)多態(tài)性豐富，條帶清晰，易于分辨，結(jié)果穩(wěn)定。逡逑＿＾滋？邐２ｉ＇－｜邋ka售’瓣屋Ｉ邐Ｊ塞’置S�！言逦Ｉｔ逦、３餐．输－邋４３－邋４４－逦＇X畺躿摹觥危矗卞濉停�，辶x賢跡玻卞澹校悖歟牽埃芬鋃鑰聳顯瓍縈矢鎏澹ǎ危錚玻擔(dān)危錚矗福┑睦┰黿峁義希疲椋紓玻卞澹裕瑁邋澹幔恚穡歟椋媯椋悖幔簦椋锎蟈澹猓幔睿溴澹錚駑澹校悖歟牽埃峰澹穡潁椋恚澹蟈澹媯錚蟈澹危錚玻擔(dān)危錚矗稿澹椋睿洌椋觶椋洌酰幔歟簀澹錚駑澹鄭錚慊茫悖茫憒蟈義獻(xiàn)ⅲ海灣邐澹停幔潁耄澹潁澹保擔(dān)板搴灣澹保埃板宸直鷸稿澹保擔(dān)埃猓皰搴灣澹歟希希猓�。辶x希危錚簦唬澹哄澹裕瑁邋澹灣澹椋簀澹停幔潁耄澹潁邋澹保擔(dān)板澹椋簀澹保擔(dān)埃猓穡邋澹保埃板澹椋簀澹歟希希猓穡義希常佩澹灣宥�，－？？邋４塞－４７逦４１逦Ｍ．－辶x賢跡玻玻校悖歟牽玻芬鋃鑰聳顯瓩 郵個(gè)體（Ｎｏ．２５－Ｎｏ．４８）的擴(kuò)增結(jié)果逡逑Ｆｉｇ．２－２邋Ｔｈｅ邋ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ｂａｎｄ邋ｏｆ邋ＰｃｌＧ２７邋ｐｒｉｍｅｒ邋ｆｏｒ邋Ｎｏ．２５－Ｎｏ．４８邋ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ邋ｏｆＰｒｏｃａｍｂｎｉｓ邋ｃｌａｒｋｉｉ逡逑注！邋Ｍ邋為邋Ｍａｒｋｅｒ，邋１００邋和邋１５０邋分別指邋ｌＯＯｂｐ邋和邋１５０ｂｐ。逡逑Ｎｏｔｅ：邋Ｔｈｅ邋Ｍ邋ｉｓ邋Ｍａｒｋｅｒ

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【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2768568