發(fā)布時間：2020-07-22 10:10

【摘要】：團頭魴(Megalobrama amblycephala)又稱武昌魚,是一種優(yōu)良的淡水經(jīng)濟魚類。近年來,隨著自然環(huán)境的不斷惡化以及人類活動的干預等使得其生存環(huán)境中時常出現(xiàn)低氧情形,制約了團頭魴養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。本研究以團頭魴為研究對象,觀察低氧處理后各個組織的結構變化,分析低氧和復氧處理對肝臟中抗氧化酶活性的影響,通過TUNEL及熒光定量PCR檢測分析低氧對心肌細胞凋亡及抑凋亡基因bcl-2表達的影響。另外采用蔗糖梯度離心的方法提取心臟線粒體,并分析線粒體中MDA含量及SOD活性的變化。主要研究結果如下:1.低氧對團頭魴不同組織結構的影響低氧(DO:0.5 mg/L,嚴重低氧)處理團頭魴后取不同組織(心臟、肝臟、腎臟、肌肉、脾臟),通過組織切片染色觀察后發(fā)現(xiàn)低氧對團頭魴心臟和腎臟影響較大,心肌纖維腫脹,排列出現(xiàn)紊亂,而腎臟出現(xiàn)局部血管破裂的現(xiàn)象。低氧對肌肉、肝臟、脾臟結構影響相對較小。電鏡觀察顯示在中度低氧(DO:2.5±0.5 mg/L處理2 h,4 h)條件下,心臟線粒體的結構遭到不同程度的破環(huán),線粒體腫脹,結構紊亂。嚴重低氧時,部分線粒體會發(fā)生破裂。2.低氧引起心臟細胞凋亡為了進一步研究低氧對心臟組織的影響,通過TUNEL(terminal dexynucleotidyl transferase Td T-mediated d UTP nick end labeling)及熒光定量PCR方法分析心臟組織的細胞凋亡、bcl-2的表達變化以衡量心肌細胞的凋亡情況。結果顯示低氧會引起心臟細胞凋亡,并且隨溶氧濃度的降低及低氧處理時間的延長凋亡指數(shù)逐漸增加。在中度低氧組(DO:2.5±0.5 mg/L)心臟中bcl-2的表達量也隨著低氧處理時間的延長逐漸降低,而嚴重低氧組(DO:0.5 mg/L)中,其表達量顯著增加。3.低氧對心臟線粒體SOD、MDA的影響基于蔗糖梯度離心法分離心臟線粒體,測定線粒體提取液蛋白濃度,然后檢測心臟線粒體中SOD和MDA活性。結果顯示在中度低氧處理組(DO:2.5 mg/L±0.5 mg/L)中,兩者都隨著低氧時間的延長而降低,而嚴重低氧組(DO:0.5 mg/L)中,兩者的值又有所回升。4.低氧對肝臟抗氧指標的影響對不同低氧組團頭魴肝臟各種抗氧化酶指標的檢測結果顯示,低氧會導致肝臟中SOD和CAT酶活性、過氧化氫(H2O2)降低。肝臟中一氧化氮(NO)水平隨溶氧濃度的降低及低氧處理時間的延長逐漸增加。肝臟總ROS水平隨著低氧處理時間的延長逐漸降低,而復氧及嚴重低氧時ROS含量回升。
【學位授予單位】：華中農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S917.4
【圖文】：

隨后轉運至線粒體中，進而激活線粒體凋亡途經(jīng)（Li et al 1998），可以在這些細胞中外源性的死亡受體凋亡途徑可以通過內源性的線粒體凋亡通路得到放大（蔣顯 2014）。細胞凋亡的各種途徑如圖 1 所示（Jin 2005），從圖也可以看出線粒體在細胞凋亡中具起到“主開關”的作用。

h 以上）；用于提取線粒體實驗的樣品（心臟）先用預冷的生理鹽水快速洗凈織表面殘留的血液并快速放入液氮中然后于-80 ℃下是存；用于提取 RNA 的品（心臟）放入含 1 mLTrizol 的離心管中并于-80 ℃中是存?zhèn)溆�。為了檢測低氧對團頭魴肝臟組織中抗氧化酶的影響，本研究設計了另外實驗組（實驗魚同上），分別為：溶氧濃度降低至 3.5±0.2 mg/L 組、溶氧濃一步降低至 1.0±0.2 mg/L 組、溶氧濃度恒定在 3.5±0.2 mg/L 處理 6 h 組、復氧（7.5±0.5mg mg/L）處理 24 h 組。低氧處理后每組隨機取 5 尾，放入 MS-222 溶（150 mg/L）中麻醉后取肝臟組織，用于檢測肝臟中 ROS、NO 和 H2O2的以及 CAT 和 SOD 的活性。對于水中溶氧量的檢測和維持采用本實驗室自行設計的低氧裝置（如圖來完成，其基本原理是在通過充氮氣和空氣來維持水中溶解氧在設定值，并通實時監(jiān)控設施來檢測溶氧和溫度。

22圖 3：低氧處理后團頭魴各個組織結構的變化Figure 3: The changes of the different tissue structure of M.amblycephala after hypoxiatreatment注：常氧（DO: 7.5±0.5 mg/L）和嚴重低氧（DO: 0.5 mg/L）條件下的心臟（A、）、肝臟（C、D）、肌肉（E、F）、脾臟（G、H）以及腎臟（I、J）組織切，A、B 放大倍數(shù)為：1000× 其它放大倍數(shù)：400×Note: Slides of heart （A, B），liver （C, D），muscle （E, F），spleen （G,） and kidney （I, J） under normoxia （DO: 7.5±0.5 mg/L）and severe hypoxiaDO: 0.5 mg/L）conditions, magnification of AB:1000× magnification of otherictures: 400×

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4 王q諼

本文編號：2765676