【摘要】：變形假單胞菌是重要的水產病原菌,近年來給海水養(yǎng)殖業(yè)帶來了重大的經濟損失。變形假單胞菌的致病性與海水溫度密切相關,發(fā)病溫度范圍在15-20℃。為探究變形假單胞菌致病性溫度依賴的分子機制,本實驗室前期測定了不同溫度下變形假單胞菌的轉錄組。結果發(fā)現變形假單胞菌的一種轉錄調節(jié)子基因L321_20267的表達水平在18℃顯著地高于28℃,qRT-PCR也驗證了這一結果,因此猜測L321_20267基因與變形假單胞菌毒力有關。為研究L321_20267基因與變形假單胞菌毒力的關系,本文設計并合成了5對針對L321_20267基因的shRNA序列,用本實驗室改造的pCM130/tac質粒來構建重組質粒,結果發(fā)現所構建的變形假單胞菌5個突變株的L321_20267基因都被顯著沉默,其中突變株L321_20267-shRNA882減少量最高達到90.63%。以變形假單胞菌L321_20267-RNAi(L321_20267-shRNA882)沉默株感染斜帶石斑魚比野生株感染斜帶石斑魚的死亡率下降了50%,斜帶石斑魚開始出現死亡的時間延遲了以及脾臟白點病癥狀也減輕了。取變形假單胞菌L321_20267-RNAi沉默株和野生株感染斜帶石斑魚24h的脾臟進行RNA-seq比較分析。L321_20267基因的沉默導致了脾臟的轉錄組表達水平也發(fā)生了重大的變化。GO和KEGG分析的結果表明變形假單胞菌L321_20267基因引起了宿主脾臟中絲氨酸水解酶、抗原處理和呈遞通路、B細胞受體信號通路和趨化因子信號通路的基因發(fā)生了顯著的變化。同時,宿主免疫基因分別與不同數目的miRNA和lncRNA相關聯,一些miRNA可能調控多個基因。本文的研究結果表明:1、L321_20267是變形假單胞菌的一個毒力基因。2、宿主免疫通路的上調使石斑魚更加的容易殺死L321_20267-RNAi沉默株變形假單胞菌。3、免疫基因的表達受到miRNA和lncRNA復雜的調控。
【學位授予單位】：集美大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S943
【圖文】：

圖 2-1 質粒 pCM130/tac 圖譜1）挑單菌落：含有四環(huán)素的平板固體 LB 培養(yǎng)基中落。（2）搖菌培養(yǎng)：單菌落接種到 30mLLB 液體在 0.5 左右。（3）質粒提�。�1、取 OD600值為 0.5

圖 2-2 變形假單胞菌基因 L321_20267 在不同溫度下的表達情況表誤差范圍，* P<0.05; **P<0.01; ***P<0.001（下同）。質粒測序測序公司所測得的測序結果顯示在圖 2-3 中。圖中均能找到一

RNA提取后的瓊脂糖凝膠電泳圖

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