【摘要】：本研究旨在考察不同水平的維生素E對生產(chǎn)中期草魚生長性能、腸道健康、機體健康和鰓健康及肌肉品質(zhì)的影響及其作用機制。試驗選取初始體重為266.39±0.33 g的健康草魚540尾,隨機分成6個處理,分別飼喂維生素E水平為4.93(基礎(chǔ)日糧組),45.07,90.62,135.54,180.29和225.36 mg/kg日糧10周,考察維生素E對生長中期草魚生長性能和肌肉品質(zhì)的影響。生長試驗結(jié)束后,每個處理選取體重相近的15尾魚用于嗜水氣單胞菌攻毒試驗,考察維生素E對生長中期草魚腸道健康和機體健康的影響及其作用機制;另外選取體重相近的15尾魚用于柱狀黃桿菌攻毒試驗,考察維生素E對生長中期草魚鰓健康的影響及其作用機制。研究發(fā)現(xiàn):適宜水平的維生素E顯著提高了生長中期草魚的增重率(PWG)、特異生長率(SGR)、采食量(FI)和飼料效率(FE)(P0.05)。進一步研究發(fā)現(xiàn):適宜水平的維生素E顯著降低了生長中期草魚腸炎、赤皮和爛鰓發(fā)病率(P0.05),提高了草魚腸炎、赤皮和爛鰓的抵抗能力,增強了草魚腸道、機體和鰓健康。一方面,適宜水平的維生素E顯著降低了生長中期草魚腸道、頭腎、脾臟、皮膚和鰓中活性氧(ROS)、脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)和蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物蛋白羰基(PC)的含量(P0.05),顯著提高了腸道、頭腎、脾臟、皮膚和鰓中銅鋅超氧化物歧化酶(CuZnSOD)(中腸除外)、錳超氧化物歧化酶(MnSOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GPx)、過氧化氫酶(CAT)(鰓和皮膚除外)、谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(GST)和谷胱甘肽還原酶(GR)活力以及谷胱甘肽(GSH)含量(P0.05),顯著上調(diào)了 CuZnSOD(中腸除外)、MnSOD(前腸除外)、GPx1a、GPx1b、GPx4a(后腸除外)、GPx4b(后腸除外)、CAT(鰓、皮膚和中腸除外)、GSTr、GSTol(頭腎和脾臟除外)、GSTo2(頭腎、脾臟和前中后前腸除外)和GR及信號分子Nrf2的基因表達水平,下調(diào)了信號分子Keap1a(鰓和脾臟除外)和Keap1b(脾臟除外)的基因表達水平(P0.05),增強了抗氧化能力,降低了氧化損傷;同時,適宜水平的維生素E顯著上調(diào)了生長中期草魚腸道、頭腎、脾臟、皮膚和鰓中B細胞淋巴瘤蛋白-2(Bcl-2)和髓細胞白血病基因-1(Mcl-1)(皮膚和鰓除外)的基因表達水平(P0.05),顯著下調(diào)了 caspase-2、caspase-3、caspase-7、caspase-8(鰓除外)、caspase-9、B 細胞淋巴瘤 2 相關(guān)X 蛋白(Bax)(頭腎和脾臟除外)、凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)、死亡因子Fas配體(FasL)(鰓、中腸和后腸除外)及信號分子c-Jun氨基端激酶(JNK)和p38促分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的基因表達水平(P0.05),抑制了細胞凋亡;此外,適宜水平的維生素E顯著上調(diào)了生長中期草魚腸道、頭腎、脾臟、皮膚和鰓中緊密連接蛋白 Occludin、ZO-1、claudin-3(后腸除外)、claudin-b、claudin-c(后腸除外)的mRNA水平(P0.05),顯著下調(diào)了信號分子肌球蛋白輕鏈激酶(MLCK)的mRNA水平(P0.05),改善了細胞間結(jié)構(gòu)完整性,增強了腸道、頭腎、脾臟、皮膚和鰓的物理屏障功能。另一方面,適宜水平的維生素E顯著提高了腸道、頭腎、脾臟、皮膚和鰓中溶菌酶和酸性磷酸酶活力、補體C3和C4的含量(P0.05),并顯著上調(diào)了腸道、頭腎、脾臟、皮膚和鰓中抗菌肽Leap-2A、Leap-2B、Hepcidin和β-defensin-1、抗炎細胞因子IL-10和TGF-β1以及信號分子IκBα、TOR和S6K1的mRNA水平(P0.05),顯著下調(diào)了促炎細胞因子TNF-α(前腸除外)、IFN-γ2、IL-1β、IL-6和IL-8以及信號分子 NF-κB p65、IKKα、KKβ、IKKy(鰓除外)和 4E-BP1(頭腎除外)的 mRNA水平(P0.05),緩解了炎癥反應(yīng),增強了腸道、頭腎、脾臟、皮膚和鰓的免疫屏障功能。本研究還發(fā)現(xiàn):適宜水平的維生素E提高了生長中期草魚肌肉粗蛋白和粗脂肪含量,降低了水分含量(P0.05)。維生素E提高生長中期草魚肌肉蛋白質(zhì)含量可能與其上調(diào)肌肉中TOR、S6K1、CK2a和CK2b的基因表達有關(guān)。同時,維生素E提高了生長中期草魚肌肉中呈味氨基酸Glu、Ala和Gly、必需氨基酸Lys、Leu、Ile、Thr和His及多不飽和脂肪酸的含量(P0.05),改善了肌肉風(fēng)味及營養(yǎng)價值。此外,維生素E顯著提高了生長中期草魚肌肉中羥脯氨酸含量、pH值和剪切力(P0.05),降低了肌肉中組織蛋白酶B和L活力以及乳酸含量(P0.05);并顯著提高了 GSH的含量和抗氧化酶CuZnSOD、MnSOD、CAT、GPx、GR和GST的活力,上調(diào)了相應(yīng)抗氧化酶的mRNA水平以及信號分子Nrf2的mRNA水平,下調(diào)了信號分子Keap1和Keap1b的mRNA水平(P0.05),降低了肌肉氧化損傷,降低了失水率,提高了肌肉品質(zhì)。綜上所述,適宜水平的維生素E提高了生長中期草魚的生產(chǎn)性能和肌肉品質(zhì),增強了草魚腸炎、赤皮和爛鰓病抵抗能力。適宜水平的維生素E增強草魚腸炎、赤皮和爛鰓病抵抗能力與其提高草魚腸道、頭腎、脾臟、皮膚和鰓結(jié)構(gòu)屏障完整性和免疫屏障功能有關(guān)。一方面,適宜水平的維生素E可能通過Nrf2信號途徑上調(diào)生長中期草魚腸道、頭腎、脾臟、皮膚和鰓中抗氧化酶基因表達,增強抗氧化損傷能力降低氧化損傷,并通過JNK/p38MAPK信號途徑降低腸道、頭腎、脾臟、皮膚和鰓細胞凋亡,保證了細胞結(jié)構(gòu)完整性;同時可能通過MLCK信號途徑上調(diào)了腸道、頭腎、脾臟、皮膚和鰓緊密連接蛋白基因表達,維持了細胞間結(jié)構(gòu)完整性,增強了腸道、頭腎、脾臟、皮膚和鰓的結(jié)構(gòu)屏障完整性。另一方面,適宜水平的維生素E提高了腸道、頭腎、脾臟、皮膚和鰓抗菌殺菌能力,可能通過NF-κB和TOR信號途徑下調(diào)促炎細胞因子的基因表達和上調(diào)抗炎細胞因子的基因表達,緩解了炎癥反應(yīng),增強了腸道、頭腎、脾臟、皮膚和鰓的免疫屏障功能。肌肉品質(zhì)的提高可能與維生素E提高生長中期草魚肌肉營養(yǎng)物質(zhì)沉積、增強抗氧化損傷能力和改善肌肉物理化學(xué)特性有關(guān)。以增重率、腸炎、赤皮和爛鰓抵抗率及肌肉羥脯氨酸含量確定的生長中期草魚(266.39-1026.63g)的維生素E需要量分別為116.2、127.0、130.9、139.6和115.2mg/kg日糧。
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S917.4
【圖文】：

邐結(jié)果逡逑維生素Ｅ對生長中期草魚腸道抗氧化相關(guān)信號分子Ｎｒｆ２、ｋｅａｐｌａ和ｋｅａｐｌｂ基因表逡逑達的影響見圖４。逡逑前腸Ｎｒｆ２邋ｍＲＮＡ水平：維生素Ｅ對前腸Ｎｒｆ２邋ｍＲＮＡ水平的影響呈先上升后降逡逑低的趨勢，在維生素Ｅ水平為９０．６２邋ｍｇ／ｋｇ日糧時達到最高值，之后隨著維生素Ｅ水逡逑平的進一步增加而降低（尸＜0．0５）。逡逑前腸ｋｅａｐｌａ和ｋｅａｐｌｂ邋ｍＲＮＡ水平：維生素Ｅ對前腸ｋｅａｐｌａ和ｋｅａｐｌｂ邋ｍＲＮＡ水平的逡逑影響呈先降低后上升的趨勢，都在維生素Ｅ水平為１３５．５４邋ｍｇ／ｋｇ日糧時達到最低值，逡逑之后隨著維生素Ｅ水平的進一步增加而上升（Ｐ＜０．０５）。逡逑中腸Ｎｒｆ２邋ｍＲＮＡ水平：維生素Ｅ對中腸Ｎｒ￡２邋ｍＲＮＡ水平的影響呈先上升后平臺的逡逑趨勢，都在維生素Ｅ水平為４５．０７邋ｍｇ／ｋｇ日糧時達到最高值（尸＜０．０５），之后隨著維生逡逑素Ｅ水平的進一步增加差異不顯著（尸＞０．０５）。逡逑中腸ｋｅａｐｌａ邋ｍＲＮＡ水平：維生素Ｅ對中腸ｋｅａｐｌａ邋ｍＲＮＡ水平的影響呈先降低后平逡逑臺的趨勢，在維生素Ｅ水平為１８０．２９ｍｇ／ｋｇ日糧時達到最低值（Ｐ＜０．０５），之后隨著維逡逑生素Ｅ水平的進一步增加差異不顯著（Ｐ＞邋０．０５）。逡逑中腸ｋｅａｐ丨ｂ邋ｍＲＮＡ水平：維生素Ｅ對中腸ｋｅａｐｌｂ邋ｍＲＮＡ水平的影響呈先降低后上逡逑升的趨勢，在維生素Ｅ水平為１３５．５４和１８０．２９邋ｍｇ／ｋｇ日糧時達到最低值，之后隨著維生逡逑素Ｅ水平的進一步增加而上升（戶＜邋０．０５）。逡逑后腸Ｎｒｆ２邋ｍＲＮＡ水平．？維生素Ｅ對后腸Ｎｒｆ２邋ｍＲＮＡ水平的影響呈先上升后平臺的逡逑趨勢

５．３．２．２維生素Ｅ對生長中期草魚腸道細胞凋亡的影響逡逑維生素Ｅ對生長中期草魚腸道ｃａｓｐａｓｅ－３、ｃａｓｐａｓｅ－７、ｃａｓｐａｓｅ－８和ｃａｓｐａｓｅ－９基因表逡逑達的影響見圖５。逡逑前腸ｃａｓｐａｓｅ－３、ｃａｓｐａｓｅ－７和ｃａｓｐａｓｅ－９邋ｍＲＮＡ水平：維生素Ｅ對前腸ｃａｓｐａｓｅ－３、逡逑ｃａｓｐａｓｅ－７和ｃａｓｐａｓｅ－９邋ｍＲＮＡ水平的影響呈先降低后上升的趨勢，分別在維生素Ｅ水平逡逑為１３５．５４、１３５．５４和９０．６２邋ｍｇ／ｋｇ日糧時達到最低值，之后隨著維生素Ｅ水平的進一步逡逑增加而升高（Ｐ＜邋０．０５）。逡逑前腸ｃａｓｐａｓｅ－８邋ｍＲＮＡ水平：維生素Ｅ對前腸ｃａｓｐａｓｅ－８邋ｍＲＮＡ水平的影響呈先降低逡逑后上升的趨勢，在維生素Ｅ水平為９０．６２和１３５．５４邋ｍｇ／ｋｇ日糧時達到最低值，之后隨著逡逑維生素Ｅ水平的進一步增加而上升（尸＜０．０５）。逡逑中腸ｃａｓｐａｓｅ－７、ｃａｓｐａｓｅ－８和ｃａｓｐａｓｅ－９邋ｍＲＮＡ水平：維生素Ｅ對中腸ｃａｓｐａｓｅ－７、逡逑ｃａｓｐａｓｅ－８和ｃａｓｐａｓｅ－９邋ｍＲＮＡ水平的影響呈先降低后平臺的趨勢，分別在維生素Ｅ水平逡逑為１３５．５４、１３５．５４和１８０．２９ｍｇ／ｋｇ日糧時達到最低值（尸＜０．０５），之后隨著維生素Ｅ水逡逑平的進一步增加差異不顯著（Ｐ＞邋０．０５）。逡逑中腸ｃａｓｐａｓｅ－３邋ｍＲＮＡ水平：維生素Ｅ對中腸ｃａｓｐａｓｅ－３邋ｍＲＮＡ水平的影響呈逐漸降逡逑低的趨勢

５．３．３．２維生素Ｅ對生長中期草魚腸道抗菌肽的影響逡逑維生素Ｅ對生長中期草魚腸道抗菌肽Ｈｅｐｃｉｄｉｎ，Ｌｅａｐ－２Ａ，Ｌｅａｐ－２Ｂ和ｐ－ｄｅｆｅｎｓｉｎ基逡逑因表達的影響見圖８。逡逑前腸邋Ｈｅｐｃｉｄｉｎ，Ｌｅａｐ－２Ａ，Ｌｅａｐ－２Ｂ邋和邋ｐ－ｄｅｆｅｎｓｉｎｍＲＮＡ邋水平：維生素邋Ｅ邋對前腸逡逑Ｈｅｐｃｉｄｉｎ，Ｌｅａｐ－２Ａ，Ｌｅａｐ－２Ｂ和ｐ－ｄｅｆｅｎｓｉｎｍＲＮＡ水平的影響呈先上升后降低的趨勢，逡逑分別在維生素Ｅ水平為１３５．５４、９０．６２、４５．０７和４５．０７邋ｍｇ／ｋｇ日糧時達到最高值

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