【摘要】：鰻弧菌(Vibrio anguillarum)和海豚鏈球菌(Strepstococcus iniae)是兩種引起經濟魚類大菱鲆和羅非魚大規(guī)模病害的高致死性病原菌,給水產養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的危害和經濟損失。本課題基于抗體標記技術,以量子點CdSe/ZnS為標記物開發(fā)鰻弧菌量子點快速檢測技術。在此基礎上,基于對不同類型的佐劑的篩選,分別制備了鰻弧菌和海豚鏈球菌滅活疫苗,為鰻弧菌和海豚鏈球菌的病害防治工作奠定了基礎。本課題以實驗室分離的一株鰻弧菌毒株MVM425滅活菌體為抗原,制備出V.anguillarum高特異性單克隆抗體683-C5。以量子點材料標記該單克隆抗體,對傳統(tǒng)斑點雜交技術進行改良,開發(fā)出高靈敏度V. anguillarum快速檢測技術。該技術具有良好的特異性,與水產養(yǎng)殖常見病原菌無交叉反應,靈敏度達到1×103 CFU/ml,較V.anguillarum膠體金免疫層析試紙條檢測結果提高了100倍。本課題通過篩選不同類型的佐劑制備了鰻弧菌的滅活疫苗,其中以寡糖H3作為免疫刺激劑的滅活疫苗效果最優(yōu),該疫苗在免疫后28天內保護率達到100%。以MONTANIDETM ISA 763A作為油佐劑的滅活疫苗效果次之,在免疫后60天內的保護率達到了85.2%。本課題分離鑒定了一株海豚鏈球菌S. iniae HT701,并以滅活S. iniae HT701菌體為抗原,利用大腸桿菌表達系統(tǒng)表達的海豚鏈球菌鐵轉運蛋白FtsB為免疫刺激劑,以美孚Marcol 52為佐劑,制備了S. iniae滅活疫苗。該疫苗免疫28天、60天后,對羅非魚的保護率分別達到72%和65%。在此基礎上,考察了疫苗免疫后羅非魚血清中的抗體水平以及各組織中的轉錄水平變化。免疫后第二周MHC Ⅰ途徑的轉錄水平較對照組上調了26.1倍,免疫后第四周,血清中抗體水平及殺菌活力較對照組分別上調了7.1及5.2倍,其結果與免疫保護率實驗呈對應關系。以上研究表明,該疫苗具有良好的保護效果,為S. iniae滅活疫苗的開發(fā)提供了參考。
【學位授予單位】：華東理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S941.4

【參考文獻】

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本文編號：2764165