【摘要】：鰻弧菌(Vibrio anguillarum)和海豚鏈球菌(Strepstococcus iniae)是兩種引起經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)大菱鲆和羅非魚(yú)大規(guī)模病害的高致死性病原菌,給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)了巨大的危害和經(jīng)濟(jì)損失。本課題基于抗體標(biāo)記技術(shù),以量子點(diǎn)CdSe/ZnS為標(biāo)記物開(kāi)發(fā)鰻弧菌量子點(diǎn)快速檢測(cè)技術(shù)。在此基礎(chǔ)上,基于對(duì)不同類(lèi)型的佐劑的篩選,分別制備了鰻弧菌和海豚鏈球菌滅活疫苗,為鰻弧菌和海豚鏈球菌的病害防治工作奠定了基礎(chǔ)。本課題以實(shí)驗(yàn)室分離的一株鰻弧菌毒株MVM425滅活菌體為抗原,制備出V.anguillarum高特異性單克隆抗體683-C5。以量子點(diǎn)材料標(biāo)記該單克隆抗體,對(duì)傳統(tǒng)斑點(diǎn)雜交技術(shù)進(jìn)行改良,開(kāi)發(fā)出高靈敏度V. anguillarum快速檢測(cè)技術(shù)。該技術(shù)具有良好的特異性,與水產(chǎn)養(yǎng)殖常見(jiàn)病原菌無(wú)交叉反應(yīng),靈敏度達(dá)到1×103 CFU/ml,較V.anguillarum膠體金免疫層析試紙條檢測(cè)結(jié)果提高了100倍。本課題通過(guò)篩選不同類(lèi)型的佐劑制備了鰻弧菌的滅活疫苗,其中以寡糖H3作為免疫刺激劑的滅活疫苗效果最優(yōu),該疫苗在免疫后28天內(nèi)保護(hù)率達(dá)到100%。以MONTANIDETM ISA 763A作為油佐劑的滅活疫苗效果次之,在免疫后60天內(nèi)的保護(hù)率達(dá)到了85.2%。本課題分離鑒定了一株海豚鏈球菌S. iniae HT701,并以滅活S. iniae HT701菌體為抗原,利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的海豚鏈球菌鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白FtsB為免疫刺激劑,以美孚Marcol 52為佐劑,制備了S. iniae滅活疫苗。該疫苗免疫28天、60天后,對(duì)羅非魚(yú)的保護(hù)率分別達(dá)到72%和65%。在此基礎(chǔ)上,考察了疫苗免疫后羅非魚(yú)血清中的抗體水平以及各組織中的轉(zhuǎn)錄水平變化。免疫后第二周MHC Ⅰ途徑的轉(zhuǎn)錄水平較對(duì)照組上調(diào)了26.1倍,免疫后第四周,血清中抗體水平及殺菌活力較對(duì)照組分別上調(diào)了7.1及5.2倍,其結(jié)果與免疫保護(hù)率實(shí)驗(yàn)呈對(duì)應(yīng)關(guān)系。以上研究表明,該疫苗具有良好的保護(hù)效果,為S. iniae滅活疫苗的開(kāi)發(fā)提供了參考。
【學(xué)位授予單位】：華東理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S941.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2764165