【摘要】：1.一凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖場(chǎng)蝦病原的跟蹤檢測(cè)我國(guó)凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)近十年來得到了迅速發(fā)展,為了追求高產(chǎn),養(yǎng)殖密度普遍偏高,養(yǎng)殖后期因殘餌糞便處理不當(dāng)極易引起水質(zhì)惡化,誘發(fā)多種對(duì)蝦病害發(fā)生。本文采用國(guó)標(biāo)法跟蹤檢測(cè)了一凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖池不同階段水體中氨氮和亞硝氮濃度的變化趨勢(shì),采用平板涂布法對(duì)養(yǎng)殖水體、對(duì)蝦腸道和肝胰腺中微生物組成進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析、并跟蹤了養(yǎng)殖場(chǎng)中弧菌數(shù)量的變動(dòng),對(duì)從發(fā)病養(yǎng)殖池中分離出的弧菌進(jìn)行了毒力評(píng)價(jià)。同時(shí)采用分子生物學(xué)鑒定方法分別對(duì)對(duì)蝦體內(nèi)及水環(huán)境中主要致病性弧菌、蝦肝腸胞蟲(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)及主要病毒毒性病原進(jìn)行了跟蹤檢測(cè)。研究結(jié)果表明該對(duì)蝦養(yǎng)殖場(chǎng)大棚養(yǎng)殖池水體中氨氮和比室外池塘養(yǎng)殖水體中的氨氮濃度偏高,整個(gè)養(yǎng)殖過程中呈現(xiàn)上下浮動(dòng),大棚2(G2)的氨氮最高值達(dá)4.9mg/L,而外池塘氨氮濃度維持在1 mg/L以下;亞硝氮在60d后快速升高,大棚最高能達(dá)到8.3mg/L,而外池塘不到0.4 mg/L;病原檢測(cè)結(jié)果顯示大棚養(yǎng)殖對(duì)蝦在放苗40d內(nèi)即檢出EHP感染,而外池塘在40-60d時(shí)發(fā)現(xiàn)弱陽性感染;養(yǎng)殖場(chǎng)所有的蝦池中均檢出VP_(AHPND)的弱陽性感染,另外通過16SrDNA初步鑒定,檢出的主要弧菌種類包括:Vibrio parahaemolyticus、V.lginolyticus、V.owensii、V.vulnificus、V.harveyi,弧菌在大棚養(yǎng)殖池中的最高數(shù)量級(jí)達(dá)到10~4CFU/mL以上,外池塘為10~3CFU/mL。AHPND的發(fā)生可能與環(huán)境中氨氮及亞硝氮濃度過高有關(guān),需要進(jìn)一步的研究。2.羅非魚循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)中一株脫氮菌的脫氮效果及條件從健康的羅非魚(Oreochromis Niloticus)循環(huán)水養(yǎng)殖水體中分離到一株具有脫氮能力的菌株(編號(hào)DZYC02),研究了不同碳源對(duì)DZYC02脫氮能力的影響;所有的單因素實(shí)驗(yàn)都是檸檬酸鈉作為碳源、NH_4~+-Cl作為為氮源,來研究了不同鹽度、初始pH及碳氮比對(duì)DZYC02脫氮能力的影響。研究結(jié)果顯示,DZYC02在用檸檬酸鈉作為碳源、C:N≥15、pH5~7、鹽度0~15時(shí),該菌脫氮能力比其他條件要高,24h內(nèi)已經(jīng)完全去除濃度為20mg/L的液體培養(yǎng)基中NH_4~+-N,48h內(nèi)已經(jīng)完全去除濃度為20mg/L的液體培養(yǎng)基中的NO_2~--N;將該菌株采用浸泡方式感染斑馬魚(Danio rerio)進(jìn)行生物安全試驗(yàn),結(jié)果表明菌株DZYC02對(duì)斑馬魚表現(xiàn)出較好的安全特性。用16S rDNA序列分析比對(duì)和Biolog細(xì)菌鑒定兩種方法對(duì)DZYC02進(jìn)行鑒定,鑒定結(jié)果顯示菌株DZYC02為一株肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella.pneumoniae)。本研究可為循環(huán)水養(yǎng)殖中開發(fā)利用微生物脫氮技術(shù)提供理論支持。3.脫氮菌在對(duì)蝦養(yǎng)殖中的效果研究利用從健康的水生動(dòng)物的養(yǎng)殖水體中分離出兩株具有高效脫氮能力的菌株Halomonas sp.和K.pneumoniae,通過菌株發(fā)酵制備菌液,用于生物絮團(tuán)對(duì)蝦養(yǎng)殖系統(tǒng)中。通過對(duì)對(duì)蝦養(yǎng)殖水體中氨氮和亞硝氮的濃度的中測(cè)定、對(duì)蝦增重率、存活率、生物絮團(tuán)的形成的統(tǒng)計(jì)及對(duì)血液中血清的總蛋白、超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶活力及酚氧化酶(PO)的相關(guān)免疫酶活進(jìn)行測(cè)定,來評(píng)價(jià)了兩株菌對(duì)對(duì)蝦健康狀況的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示向水體中添加兩種脫氮菌液和碳源都能有效降低水體中的氨氮和亞硝氮的濃度,在5d時(shí)檢測(cè)到Halomonas sp.加蔗糖組氨氮濃度為4.5 mg/L顯著低于空白組的(氨氮濃度7.5mg/L),在20d時(shí),Halomonas sp.加蔗糖組亞硝氮濃度為5mg/L,而空白組為22 mg/L;Halomonas sp.加蔗糖組的對(duì)蝦的成活率和增重率分別為60%和70%,顯著高于空白組的20%和40%,且對(duì)蝦的存活率顯著高于其他組的存活率(P0.05)。應(yīng)用Halomonas sp.菌株對(duì)養(yǎng)殖對(duì)蝦血清中總蛋白、溶菌酶活力、超氧化歧化酶活力、酚氧化酶活力沒有顯著的影響,但K.pneumoniae菌株能夠提高對(duì)蝦血清溶菌酶的活力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,Halomonas sp.菌株和蔗糖聯(lián)合使用,最佳的菌液濃度為10~3-10~4CFU/mL、最適的蔗糖添加量為餌料的50-70%。
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S945.4
【圖文】：

圖 2-9 EHP 的產(chǎn)物 2-9A 是 EHP 一輪引物 PCR 產(chǎn)物; 圖 2-9B 是 EHP 二輪引物 PCR 產(chǎn)物; M. DL2000; C1-C6 蝦苗樣品;E.餌樣品；N. 陰性; P. 陽性1、C2、C3、 C4、C5、C6 代表不同廠家的苗

圖 2-12 80d EHP 的產(chǎn)物圖 2-12A 是 EHP 一輪引物 PCR 產(chǎn)物; 圖 2-12B 是 EHP 二輪引物 PCR 產(chǎn)物; M. DL2000 DNA 分子標(biāo)準(zhǔn); G1G3、W1-W4 對(duì)蝦樣品; N. 陰性; P. 陽性G1、G2、G3 代表大棚養(yǎng)殖池，W1、W2、W3、W4 代表外池塘養(yǎng)殖池

圖 2-14 60d AHPND 的產(chǎn)物圖 2-14A 是 AHPNDD 一輪引物 PCR 產(chǎn)物; 圖 2-14B 是 AHPNDD 二輪引物 PCR 產(chǎn)物; M.DL2000 DNA; G1-G3、W1-W4 對(duì)蝦樣品; N. 陰性; P. 陽性G1、G2、G3 代表大棚養(yǎng)殖池，W1、W2、W3、W4 代表外池塘養(yǎng)殖池

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2759357