【摘要】：昆蟲保幼激素Ⅲ(Juvenile hormoneⅢ,簡稱JHⅢ),又名返幼激素,是一類具有保持昆蟲幼蟲性狀和促進幼蟲或成蟲期時性腺發(fā)育的半萜烯類物質(zhì)。其主要功能包括兩個方面:一是在昆蟲幼蟲時期保持幼體狀態(tài)并促進其性腺發(fā)育,二是在昆蟲成蟲時期繼續(xù)促進卵巢及卵細胞發(fā)育,廣泛存在于多種昆蟲體內(nèi),是常見的昆蟲內(nèi)分泌調(diào)控激素之一。近年來許多學者在雙齒圍沙蠶的研究中發(fā)現(xiàn),沙蠶腦部可以分泌出一種具有保幼激素功能性質(zhì)的激素—腦激素,該激素對沙蠶卵細胞的早期發(fā)育起到?jīng)Q定性作用。本實驗通過對人工養(yǎng)殖的沙蠶飼喂含有不同濃度昆蟲保幼激素飼料,在不同養(yǎng)殖周期內(nèi),從卵母細胞直徑變化、卵細胞發(fā)育組織學及沙蠶雌成蟲體壁卵黃蛋白表達等不同方面,驗證了昆蟲保幼激素Ⅲ對雙齒圍沙蠶卵細胞發(fā)育的影響。實驗設定了1mg/kg、5mg/kg、25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg五個不同的餌料濃度水平,在20、40、90天的培養(yǎng)周期內(nèi),分別測定了卵細胞直徑以及異沙蠶體變異數(shù)量等上述實驗內(nèi)容的變化情況,得到了昆蟲保幼激素對雙齒圍沙蠶卵細胞發(fā)育影響的初步研究。為進一步研究昆蟲保幼激素及其類似物對沙蠶卵細胞發(fā)育的影響、人工調(diào)控沙蠶卵細胞發(fā)育進程以及沙蠶人工養(yǎng)殖生產(chǎn),提供基礎研究數(shù)據(jù)。具體研究結(jié)果如下：1.濃度為1mg/kg時,昆蟲保幼激素Ⅲ飼料對沙蠶基本沒有影響。在飼料濃度為5mg/kg、25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg時,可以發(fā)現(xiàn)昆蟲保幼激素Ⅲ對沙蠶成蟲卵細胞的發(fā)育起到明顯的促進作用,且在飼喂周期為20d時最為明顯,此時各濃度組的昆蟲保幼激素Ⅲ促進作用隨著濃度的升高而加快。100mg/kg添飼處理組的增長效果最好。但在飼喂周期達40d時,50、100mg/kg添飼處理組的卵細胞發(fā)育在進入成熟后出現(xiàn)滯育現(xiàn)象,分析可能是高濃度昆蟲保幼激素Ⅲ會抑制蟲體進入下一生長階段,但目前作用的機制及通路尚不明確,須進一步研究去證明它的抑制機制。實驗結(jié)果表明,昆蟲保幼激素Ⅲ可以促進沙蠶卵細胞的發(fā)育,并且不同濃度表現(xiàn)出不同程度的劑量效應,這種效應在養(yǎng)殖周期前20d內(nèi)最明顯,表明了昆蟲保幼激素Ⅲ在調(diào)控沙蠶卵細胞發(fā)育進程中具有一定的敏感周期及不同的閾值范圍。2.通過對不同濃度的昆蟲保幼激素Ⅲ飼料下的雙齒圍沙蠶腸道、上皮細胞及卵子發(fā)生的組織切片觀察,測定保幼激素對沙蠶身體組織的影響。發(fā)現(xiàn)在40d的人工養(yǎng)殖周期內(nèi),雙齒圍沙蠶腸道組織的肌肉層厚度、皺壁個數(shù)及皺壁厚度都與對照組無顯著差異,體腔上皮細胞的厚度與對照組均顯示為正常水平,卵細胞發(fā)育過程中沒有造成細胞損傷。因此可以判定昆蟲保幼激素Ⅲ在沙蠶卵細胞發(fā)育的過程中,是一種調(diào)控沙蠶卵細胞發(fā)育的優(yōu)良激素。3.ELISA實驗結(jié)果表明,通過投喂不同濃度的昆蟲保幼激素Ⅲ餌料,在飼喂10d時各濃度組的卵黃蛋白表達量明顯增加。除1mg/kg添飼處理組與對照組的4.卵黃蛋白表達量沒有明顯差異外(P0.05),5、25、50、100 mg/kg添飼處理組的卵黃蛋白表達量均大于對照組的表達量,且與濃度存在遞增關系,100mg/kg添飼處理組的卵黃蛋白表達量達到最高與對照組相比存在極顯著差異(P0.01)。飼喂20d時,25 mg/kg添飼處理組的卵黃蛋白表達量達到最高與對照組相比存在極顯著差異(P0.01),50、100 mg/kg添飼處理組的表達量均低于對照組,并存在顯著性差異(P0.05),飼喂40d時,5、25、50、100 mg/kg添飼處理組的表達量均低于對照組,表達量隨著處理濃度的上升依次遞減。結(jié)合卵細胞發(fā)育程度及卵細胞直徑大小的結(jié)果來看,認為昆蟲保幼激素Ⅲ對沙蠶卵細胞發(fā)育成熟后期無明顯作用,或?qū)ι承Q的后續(xù)變態(tài)產(chǎn)生抑制作用。實驗結(jié)果證明,昆蟲保幼激素Ⅲ在一定養(yǎng)殖周期及濃度范圍內(nèi)對雙齒圍沙蠶卵黃蛋白的表達量有著顯著影響。5.通過計算人工養(yǎng)殖周期90d內(nèi)各處理組與對照組的異沙蠶體出現(xiàn)個數(shù),判定昆蟲保幼激素Ⅲ在一定濃度范圍內(nèi)對雙齒圍沙蠶生殖變態(tài)的影響,發(fā)現(xiàn)50、100mg/kg添飼處理組對沙蠶異沙蠶體的形成有明顯的抑制作用,25mg/kg添飼處理組對沙蠶異沙蠶體的形成有一定的促進作用,1、5mg/kg添飼處理組對沙蠶異蠶體的出現(xiàn)未見明顯影響效果。
【學位授予單位】：大連海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S917.4
【圖文】：

驗方法不同濃度保幼激素Ⅲ對雙齒圍沙蠶卵細胞影響實驗激素Ⅲ飼料制備雛雞飼料與幼牙鲆飼料按照 2：3 的比例配置 1 Kg 飼料，按質(zhì)量素 JHⅢ添加到人工飼料中，再使用粉碎機將混合餌料打磨成粉型動物餌料加工機制作成 2mm 大小的顆粒狀餌料。人工飼料中 JHⅢ的濃度分別為 1mg/Kg、5mg/Kg、25mg/Kg、50mg/Kg、10槽制作與沙蠶投放 12 個 200×100×50 cm 培養(yǎng)槽編上序號 1-12，分上下兩層放在鋼加入消毒后的泥沙至 2/3 高度，將泥沙鋪成斜坡狀，并再出水口預的空地，為制作堵泥閥預留地方，接著用四分管連接、四分拐水通道并用鋼絲箍緊放置掉落（如圖 2-1）。每個培養(yǎng)槽投放 150 力強健的雙齒圍沙蠶。

直徑在 94.2±9.8 μm 之間。在投餌 20 d 后，對照組與 1mg/kg 處理組卵母細胞發(fā)育等級都在 5.7±0.2，發(fā)育程度差距不明顯,卵直徑范圍在 104±8.0 μm，發(fā)育程度增長略快的組為 5、25mg/kg 處理組，兩組卵母細胞平均發(fā)育程度分別為 5.9、6.0，兩組平均卵直徑大于 110μm，經(jīng)過單因素方差分析(P＜0.05)，與對照組相比表現(xiàn)出顯著性差異，50、100 mg/kg 處理組卵母細胞平均發(fā)育程度明顯快于對照組，其中，50mg/kg 處理組平均發(fā)育程度達到的 6.5±0.3 級，平均卵直徑基本在 126.5±9.9 μm 左右，100mg/kg 處理組卵母細胞發(fā)育程度平均可以達到 7.1±0.4，最高可以達到 7.8 級，最大卵母細胞直徑為 165.75 μm，卵膜外出現(xiàn)厚厚一層膠膜,經(jīng)過單因素方差分析(P＜0.01)，與對照組相比表現(xiàn)出極顯著性差異；在投餌 40 d 時， 1、5 mg/kg 處理組與對照組卵母細胞平均發(fā)育程度達到 6.4±0.3 級，平均卵直徑達到 124±9.5 μm，且發(fā)現(xiàn) 5mg/kg 處理組有極少數(shù)卵母細胞發(fā)育等級達到 7 級，卵直徑為 142.4μm，25mg/kg 處理卵母細胞平均發(fā)育程度達到 7.1±0.5，平均卵直徑為 142.5±12.1 μm。50、100mg/kg 處理組卵母細胞發(fā)育程度全部都達到 7 級以上，平均卵直徑為均大于 140 μm。

第二章 昆蟲保幼激素Ⅲ對雙齒圍沙蠶卵母細胞發(fā)育的影響發(fā)育速度出現(xiàn)了不同程度的增長，在培育周期為 20 天時沙蠶卵細胞增長速率著 JHⅢ處理濃度的升高呈階梯式上漲，保幼激素含量越高，卵細胞增長速率塊，而在培育周期為 40 時，卵細胞的增長速率隨著 JHⅢ處理含量的。卵母細胞在初始階段發(fā)育差距不明顯，體腔內(nèi)卵母細胞基本都同屬于次級母細胞后期階段，飼喂 20 d 后，1mg/kg 添飼處理組卵母細胞的增長速度相對對照組卵母細胞增長速度而言差異不顯著（P＞0.05），5、25 mg/kg 濃度處理卵母細胞增長速度相對于對照組有一定程度的提升，50、100mg/kg 濃度組卵細胞的增長速率較對照組有極大的提升，其中 100mg/kg 濃度組的細胞增大速達到 53.93%，經(jīng)單因素方差分析，結(jié)果表現(xiàn)出極顯著差異性（P＜0.01）；飼40 d 后，1、5、mg/kg 濃度處理組與對照組卵母細胞增長速率沒有明顯差異50mg/kg 的增長速率出現(xiàn)大幅度降低與對照組增長速率差距不明顯，100 mg/組卵母細胞增長速率極大幅度下降，甚至低于對照組。25 mg/kg 組濃度增長速稍高于對照組，經(jīng)過單因素方差分析結(jié)果表現(xiàn)為顯著差異（F=152.6,P＜0.05）。

【參考文獻】

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9 王z殃

本文編號：2754739