【摘要】：p53,是一種重要的腫瘤抑制基因(tumor suppressor gene),同時也是一種重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,其通過調(diào)控一系列不同的靶基因來發(fā)揮其不同的生理功能,如誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、參與細(xì)胞周期調(diào)控以及抗病毒反應(yīng)等。NF-κB是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子,能夠調(diào)節(jié)一系列基因表達(dá)參與細(xì)胞增殖分化、炎癥反應(yīng)、先天免疫以及凋亡等生理過程。PKR是先天免疫抗病毒信號通路中一種重要的效應(yīng)蛋白,且作用機(jī)制研究的比較透徹。魚類p53在先天免疫中的作用也逐漸被報道。但對于p53與NF-κB、PKR之間的相關(guān)研究報道甚少。因此,本文主要為了研究p53所介導(dǎo)的NF-κB/PKR兩者之間的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制,從而進(jìn)一步表明p53在魚類先天免疫反應(yīng)的重要地位。為了研究草魚(Ctenopharyngodon idella)p53(Cip53)在先天免疫信號通路中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制,我們首先克隆與鑒定了草魚p53基因的全長cDNA序列(KX871190)及其啟動子序列。Cip53全長cDNA為1879bp,包括1個146bp的5'非翻譯區(qū)、1個617bp的3'非翻譯區(qū)和1個編碼371個氨基酸的1116bp的開放閱讀框;Cip53蛋白結(jié)構(gòu)包含一個DNA結(jié)合區(qū)域與位于C端的寡聚化區(qū)域。Cip53啟動子為距離轉(zhuǎn)錄起始位點上游991bp的序列,其中包括Rel-A、IRF3、XBP-1及p53潛在調(diào)控位點。通過熒光定量PCR實驗,我們分析了在poly I:C刺激之后p53在草魚不同組織以及草魚腎細(xì)胞(CIK)中的表達(dá)特征。實驗結(jié)果表明Cip53在草魚所測各個組織(腦、眼、皮、鰓、脾、腎)中,在6h與24h、48h均出現(xiàn)表達(dá)上調(diào);且在CIK細(xì)胞中刺激6h后出現(xiàn)大幅度上調(diào)。另外,通過體外非放射性凝膠阻滯實驗分析了Cip65蛋白與Cip53啟動子的親和性以及Cip53蛋白與Ci PKR啟動子的親和性,結(jié)果分別表明Cip65能夠明顯阻滯Cip53啟動子片段遷移,且Cip53能夠明顯阻滯Ci PKR啟動子片段遷移。說明Cip53能夠被Cip65所調(diào)控,且Cip53是CiPKR潛在的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。本研究還通過構(gòu)建了真核表達(dá)載體pCDNA3.1-Cip65與pGL-Cip53啟動子報告載體以及pCDNA3.1-Cip53與pGL-CiPKR,然后分別瞬時轉(zhuǎn)染于CIK細(xì)胞中,雙熒光素酶活性實驗結(jié)果表明Cip65能夠激活Cip53的轉(zhuǎn)錄且Cip53能夠顯著激活CiPKR的轉(zhuǎn)錄。為了進(jìn)一步分析Cip53在Cip65與CiPKR之間的轉(zhuǎn)錄調(diào)控關(guān)系,本研究還通過設(shè)計了敲降Cip53的si RNA,通過干擾實驗結(jié)果表明,在Cip53在轉(zhuǎn)錄水平被顯著敲低后,Cip65與CiPKR的轉(zhuǎn)錄水平也顯著降低。表明p53參與了NF-κB和PKR所介導(dǎo)抗病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。綜上所述,通過對Cip53在先天免疫信號通路的轉(zhuǎn)錄機(jī)制分析,體現(xiàn)了Cip53在魚類抗病毒作用過程的重要地位。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S917.4
【圖文】：

圖 1.1 人 p53 蛋白結(jié)構(gòu)示意圖(引自文獻(xiàn)[51])Figure 1.1 The structure of human p53 protein p53 的生物學(xué)功能

.圖 3.1 草魚 p53 基因 RACEFig. 3.1 Race of Cip53 gene) M：DL5000 分子量標(biāo)準(zhǔn)；1：Cip53 ORF 片段。(B) M：DL5000 分子量標(biāo)準(zhǔn)；1：Cip5'RACE 片段。(C) M：DL5000 分子量標(biāo)準(zhǔn)；1：Cip53 3'RACE 片段。.1.2 草魚 p53 基因序列分析

30圖 3.5 草魚 p53 基因的定量表達(dá)分析Figure 3.5 Quantitative Expression Analysis of Cip53(A) poly I:C 刺激后草魚 p53 基因的組織表達(dá)。經(jīng) poly I:C 刺激后的草魚各組織(腦、眼、皮、鰓、脾、腎)，qRT-PCR檢測草魚 p53在各組織中的表達(dá)量。以 0h眼的 Cip53相對于內(nèi)參β-acti的表達(dá)量值設(shè)為 1 作為對照；實驗數(shù)據(jù)為三次獨立重復(fù)實驗的平均值。(B) poly I:C 刺激后草魚 p53 基因在 CIK 細(xì)胞中的表達(dá)。CIK 經(jīng) 10μL poly I:C(1mg/mL)刺激后，qRT-PCR 檢測在不同時間點(0h，6h，12h，24h，48h，72h)的 Cip53mRNA 的表達(dá)量。實驗數(shù)據(jù)為三次獨立重復(fù)實驗的平均值。*表示差異顯著(p <0.05)，**表示極顯著性差異(p <0.01)。poly I:C 刺激 CIK 細(xì)胞后，qRT-PCR 結(jié)果顯示 Cip53 的表達(dá)水平提高，刺激6h 后表達(dá)量增高，持續(xù)在 12h 達(dá)到峰值后到 72h 逐漸回落 (圖 3.5 B)。3.4 草魚 p65 與 p53 的啟動子及草魚 p53 與 PKR 的啟動子親和性分析3.4.1 草魚 p65 與 p53 啟動子的非放射性凝膠阻滯分析由實驗室保存的 Cip65 以及 Cip65- N 與 Cip65- C 的蛋白(圖 3.6 A)，通過

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 吳炯;;癌基因產(chǎn)物對轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)[J];國外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)分冊);1988年06期

2 劉金香;;基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控[J];江西教育學(xué)院學(xué)報(綜合版);1989年03期

3 鄒青宇;劉富;侯濤;;轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)模塊和模體識別算法研究進(jìn)展[J];計算機(jī)應(yīng)用研究;2012年11期

4 梁麗靜;;釀酒酵母轉(zhuǎn)錄調(diào)控位點生物信息學(xué)研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)世界;2013年03期

5 喬志新;于群;;全局轉(zhuǎn)錄調(diào)控及其在代謝工程中的應(yīng)用[J];生物技術(shù)通訊;2009年05期

6 胡俊;;預(yù)測轉(zhuǎn)錄調(diào)控模塊的數(shù)學(xué)模型[J];中山大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2009年S1期

7 胡俊;;預(yù)測轉(zhuǎn)錄調(diào)控模塊的數(shù)學(xué)模型[J];中山大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2009年S3期

8 王閣;肝再生信號轉(zhuǎn)錄調(diào)控進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(消化系疾病分冊);2003年04期

9 李江琪,郭坤元,周凌,段連寧,杜江;人CD34分化抗原轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列的克隆與調(diào)控表達(dá)[J];中國腫瘤生物治療雜志;2000年04期

10 許銳銳;韓慧;賀文靜;陳耿臻;;整合素β6基因在HepG2細(xì)胞中主要轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)的定位分析[J];中華普通外科學(xué)文獻(xiàn)(電子版);2013年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 裴新輝;趙斌;;芳香烴受體轉(zhuǎn)錄調(diào)控的機(jī)理研究[A];中國化學(xué)會第28屆學(xué)術(shù)年會第2分會場摘要集[C];2012年

2 陳偉;張旋旋;熊丹丹;唐雙焱;;利用轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白構(gòu)建小分子化合物的新型體外檢測平臺[A];第十一屆中國酶工程學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2017年

3 翟亞峰;束剛;朱曉彤;高萍;傅偉龍;江青艷;;腸道特異性轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件的轉(zhuǎn)錄活性篩選及細(xì)胞特異性鑒定[A];全國動物生理生化第十一次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2010年

4 朱定爾;聶怡玲;李厚敏;楊友云;田菁燕;楊宇;;β-珠蛋白基因的“個體”轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件與功能基因組“體系”的可能關(guān)系[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會第八屆會員代表大會暨全國學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2001年

5 任麗;余小玲;余安;甘莉;楊在清;;Visfatin基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控及糖異生的調(diào)控作用[A];全國動物生理生化第十二次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2012年

6 蘇樂;陳奧;安超強;周磊;楊在清;;CIDEc互作蛋白篩選、轉(zhuǎn)錄調(diào)控與功能研究[A];全國動物生理生化第七屆全國代表大會暨第十三次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2014年

7 徐讓;錢關(guān)祥;;轉(zhuǎn)錄因子對Survivin基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會2006年學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2006年

8 曹必好;雷建軍;夏勇;陳國菊;曾國平;;結(jié)球甘藍(lán)轉(zhuǎn)錄調(diào)控腫瘤蛋白基因(TCTP)的分離與表達(dá)特性研究[A];蔬菜分子育種研討會論文集[C];2004年

9 崔光照;張勛才;曹祥紅;;重建轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)[A];中國生物工程學(xué)會第四次會員代表大會暨學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2005年

10 鮑永利;烏垠;于春雷;孟祥穎;孫穎;李玉新;;人多藥耐藥基因MDR1啟動子克隆及轉(zhuǎn)錄調(diào)控的初步研究[A];吉林省第六屆生命科學(xué)大型學(xué)術(shù)報告會論文集[C];2008年

相關(guān)重要報紙文章 前1條

1 記者 耿挺;為T細(xì)胞“戰(zhàn)士”打造“武器”[N];上�？萍紙�;2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 沈淑鈴;CitAP2.10和CitMYC3對甜橙果實特征芳香物質(zhì)瓦倫烯合成的轉(zhuǎn)錄調(diào)控[D];浙江大學(xué);2017年

2 閆振偉;細(xì)胞分裂素B類ARRs在發(fā)育和環(huán)境信號對TAA1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控中扮演核心的角色[D];廈門大學(xué);2017年

3 鄭冠濤;非編碼RNA在人類癌癥中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究[D];華東師范大學(xué);2017年

4 顏峻;Cyclin D3參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控，p110C誘導(dǎo)凋亡及活性寡糖的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

5 朱慶林;核心結(jié)合因子α亞基對釉原蛋白轉(zhuǎn)錄調(diào)控的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

6 高大明;核受體mLRH-1異構(gòu)體的發(fā)現(xiàn)及轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2006年

7 崔玉坤;1. 人hsp90β組成性和絲裂原誘導(dǎo)表達(dá)機(jī)制的研究 2. 抑癌基因產(chǎn)物p53對人hsp90β轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1997年

8 劉巨洪;人熱休克蛋白90β（hsp90β）的轉(zhuǎn)錄調(diào)控[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1995年

9 王瑞山;γ-分泌酶組分基因APH-1A和PEN-2的轉(zhuǎn)錄調(diào)控[D];廈門大學(xué);2007年

10 張德楠;基于高通量數(shù)據(jù)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控預(yù)測分析與調(diào)控網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 郁小寧;多粘類芽孢桿菌SC2菌株msmR1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

2 魏欣悅;利用CRISPR/Cas9技術(shù)轉(zhuǎn)變內(nèi)源性WT1亞型導(dǎo)致其下游基因表達(dá)譜變化的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2018年

3 黃青麗;草魚p53介導(dǎo)的NF-κB與PKR的轉(zhuǎn)錄調(diào)控分析[D];南昌大學(xué);2018年

4 張萍;豬miR-122的靶基因鑒定、轉(zhuǎn)錄調(diào)控及其對PCV2復(fù)制的效應(yīng)[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

5 李龍;豬ANK1基因啟動子活性與轉(zhuǎn)錄調(diào)控及多態(tài)性分析[D];廣西大學(xué);2017年

6 郭克;Pur α與Egr1對Aβ前體蛋白（APP）的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2013年

7 趙鮮仙;釀酒酵母糠醛耐受關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)控基因的篩選及其被調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄分析[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

8 張廷煥;豬MITF基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域克隆及活性分析[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

9 楊青;轉(zhuǎn)錄調(diào)控信息文本挖掘算法及實現(xiàn)[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

10 張誠誠;基于深度自編碼器和XGBoost的轉(zhuǎn)錄調(diào)控構(gòu)建算法研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2017年

本文編號：2753726