【摘要】：p53,是一種重要的腫瘤抑制基因(tumor suppressor gene),同時(shí)也是一種重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,其通過調(diào)控一系列不同的靶基因來發(fā)揮其不同的生理功能,如誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、參與細(xì)胞周期調(diào)控以及抗病毒反應(yīng)等。NF-κB是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子,能夠調(diào)節(jié)一系列基因表達(dá)參與細(xì)胞增殖分化、炎癥反應(yīng)、先天免疫以及凋亡等生理過程。PKR是先天免疫抗病毒信號(hào)通路中一種重要的效應(yīng)蛋白,且作用機(jī)制研究的比較透徹。魚類p53在先天免疫中的作用也逐漸被報(bào)道。但對(duì)于p53與NF-κB、PKR之間的相關(guān)研究報(bào)道甚少。因此,本文主要為了研究p53所介導(dǎo)的NF-κB/PKR兩者之間的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制,從而進(jìn)一步表明p53在魚類先天免疫反應(yīng)的重要地位。為了研究草魚(Ctenopharyngodon idella)p53(Cip53)在先天免疫信號(hào)通路中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制,我們首先克隆與鑒定了草魚p53基因的全長cDNA序列(KX871190)及其啟動(dòng)子序列。Cip53全長cDNA為1879bp,包括1個(gè)146bp的5'非翻譯區(qū)、1個(gè)617bp的3'非翻譯區(qū)和1個(gè)編碼371個(gè)氨基酸的1116bp的開放閱讀框;Cip53蛋白結(jié)構(gòu)包含一個(gè)DNA結(jié)合區(qū)域與位于C端的寡聚化區(qū)域。Cip53啟動(dòng)子為距離轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游991bp的序列,其中包括Rel-A、IRF3、XBP-1及p53潛在調(diào)控位點(diǎn)。通過熒光定量PCR實(shí)驗(yàn),我們分析了在poly I:C刺激之后p53在草魚不同組織以及草魚腎細(xì)胞(CIK)中的表達(dá)特征。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Cip53在草魚所測各個(gè)組織(腦、眼、皮、鰓、脾、腎)中,在6h與24h、48h均出現(xiàn)表達(dá)上調(diào);且在CIK細(xì)胞中刺激6h后出現(xiàn)大幅度上調(diào)。另外,通過體外非放射性凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)分析了Cip65蛋白與Cip53啟動(dòng)子的親和性以及Cip53蛋白與Ci PKR啟動(dòng)子的親和性,結(jié)果分別表明Cip65能夠明顯阻滯Cip53啟動(dòng)子片段遷移,且Cip53能夠明顯阻滯Ci PKR啟動(dòng)子片段遷移。說明Cip53能夠被Cip65所調(diào)控,且Cip53是CiPKR潛在的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。本研究還通過構(gòu)建了真核表達(dá)載體pCDNA3.1-Cip65與pGL-Cip53啟動(dòng)子報(bào)告載體以及pCDNA3.1-Cip53與pGL-CiPKR,然后分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染于CIK細(xì)胞中,雙熒光素酶活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Cip65能夠激活Cip53的轉(zhuǎn)錄且Cip53能夠顯著激活CiPKR的轉(zhuǎn)錄。為了進(jìn)一步分析Cip53在Cip65與CiPKR之間的轉(zhuǎn)錄調(diào)控關(guān)系,本研究還通過設(shè)計(jì)了敲降Cip53的si RNA,通過干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在Cip53在轉(zhuǎn)錄水平被顯著敲低后,Cip65與CiPKR的轉(zhuǎn)錄水平也顯著降低。表明p53參與了NF-κB和PKR所介導(dǎo)抗病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。綜上所述,通過對(duì)Cip53在先天免疫信號(hào)通路的轉(zhuǎn)錄機(jī)制分析,體現(xiàn)了Cip53在魚類抗病毒作用過程的重要地位。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S917.4
【圖文】：

圖 1.1 人 p53 蛋白結(jié)構(gòu)示意圖(引自文獻(xiàn)[51])Figure 1.1 The structure of human p53 protein p53 的生物學(xué)功能

.圖 3.1 草魚 p53 基因 RACEFig. 3.1 Race of Cip53 gene) M：DL5000 分子量標(biāo)準(zhǔn)；1：Cip53 ORF 片段。(B) M：DL5000 分子量標(biāo)準(zhǔn)；1：Cip5'RACE 片段。(C) M：DL5000 分子量標(biāo)準(zhǔn)；1：Cip53 3'RACE 片段。.1.2 草魚 p53 基因序列分析

30圖 3.5 草魚 p53 基因的定量表達(dá)分析Figure 3.5 Quantitative Expression Analysis of Cip53(A) poly I:C 刺激后草魚 p53 基因的組織表達(dá)。經(jīng) poly I:C 刺激后的草魚各組織(腦、眼、皮、鰓、脾、腎)，qRT-PCR檢測草魚 p53在各組織中的表達(dá)量。以 0h眼的 Cip53相對(duì)于內(nèi)參β-acti的表達(dá)量值設(shè)為 1 作為對(duì)照；實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為三次獨(dú)立重復(fù)實(shí)驗(yàn)的平均值。(B) poly I:C 刺激后草魚 p53 基因在 CIK 細(xì)胞中的表達(dá)。CIK 經(jīng) 10μL poly I:C(1mg/mL)刺激后，qRT-PCR 檢測在不同時(shí)間點(diǎn)(0h，6h，12h，24h，48h，72h)的 Cip53mRNA 的表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為三次獨(dú)立重復(fù)實(shí)驗(yàn)的平均值。*表示差異顯著(p <0.05)，**表示極顯著性差異(p <0.01)。poly I:C 刺激 CIK 細(xì)胞后，qRT-PCR 結(jié)果顯示 Cip53 的表達(dá)水平提高，刺激6h 后表達(dá)量增高，持續(xù)在 12h 達(dá)到峰值后到 72h 逐漸回落 (圖 3.5 B)。3.4 草魚 p65 與 p53 的啟動(dòng)子及草魚 p53 與 PKR 的啟動(dòng)子親和性分析3.4.1 草魚 p65 與 p53 啟動(dòng)子的非放射性凝膠阻滯分析由實(shí)驗(yàn)室保存的 Cip65 以及 Cip65- N 與 Cip65- C 的蛋白(圖 3.6 A)，通過

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7 崔玉坤;1. 人hsp90β組成性和絲裂原誘導(dǎo)表達(dá)機(jī)制的研究 2. 抑癌基因產(chǎn)物p53對(duì)人hsp90β轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1997年

8 劉巨洪;人熱休克蛋白90β（hsp90β）的轉(zhuǎn)錄調(diào)控[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1995年

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本文編號(hào)：2753726