發(fā)布時(shí)間：2020-07-13 03:19

【摘要】：魚(yú)傳染性造血器官壞死病(Infectious Haematopoietic Necrosis offish,IHN)是由傳染性造血器官壞死病毒(Infectious Hematopoietic Necrosis Virus,IHNV)引起的一種鮭科魚(yú)類(lèi)的常見(jiàn)急性病毒性傳染病,常造成魚(yú)苗或幼魚(yú)高達(dá)50%-100%的死亡率。IHNV囊膜表面有一個(gè)糖蛋白(Glycoprotein,G)突起。G蛋白在參與細(xì)胞受體與病毒的識(shí)別和結(jié)合等過(guò)程中起著非常重要的作用,并且與病毒的毒力相關(guān)。此外,G蛋白還是病毒的主要抗原,存在保護(hù)性抗原決定簇,能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性中和抗體。因此,G蛋白及其抗體的制備在IHNV診斷試劑的開(kāi)發(fā)、G蛋白功能的研究及基因工程疫苗的研制中具有重要的作用。我國(guó)現(xiàn)行IHNV毒株與歐美等國(guó)家的IHNV流行毒株基因型均有所不同,有可能會(huì)導(dǎo)致G蛋白免疫原性改變。因此,針對(duì)我國(guó)IHNV毒株的免疫學(xué)檢測(cè)方法的建立極為必要。而目前,以全長(zhǎng)G蛋白為抗原制備的多抗與病毒性出血性敗血癥病毒(Viralhaemorrhagic septicemia virus,VHSV)存在交叉反應(yīng)。針對(duì)上述問(wèn)題,本研究在生物信息學(xué)分析的基礎(chǔ)上,對(duì)我國(guó)現(xiàn)行IHNV毒株G蛋白進(jìn)行截短表達(dá)和抗血清的制備,旨在建立我國(guó)現(xiàn)行IHNV的免疫學(xué)檢測(cè)方法。為了深入研究G蛋白的免疫原性,本文通過(guò)相關(guān)軟件分析了 G蛋白的跨膜區(qū)、抗原性和疏水性后,將G蛋白截短表達(dá)。聚丙烯酰胺凝膠電泳(polyacrylamide gelelectrophoresis,PAGE)的結(jié)果顯示,經(jīng)過(guò)截短后的糖蛋白Gs大小為40kDa,將截短后的糖蛋白進(jìn)行純化,用高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)檢測(cè)其純度達(dá)到90%。使用純化后的糖蛋白Gs制備兔抗血清,酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)法(ELISA)間接免疫熒光結(jié)果分析,制備的兔抗血清與IHNV-Sn分離株及參考毒株的反應(yīng)均呈熒光紅色,說(shuō)明兔抗血清與IHNV能發(fā)生特異性的反應(yīng)。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明表達(dá)的Gs蛋白與病毒表面的糖蛋白具有相近的免疫原性,這一結(jié)論可以作為重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù),為建立間接免疫熒光法檢測(cè)傳染性造血器官壞死病和研發(fā)截短G基因的DNA疫苗提供幫助。
【學(xué)位授予單位】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S941.41
【圖文】：

圖１－３邋ＩＨＮＶ－Ｓｎ株Ｇ蛋白的Ｎ－糖基化位點(diǎn)預(yù)測(cè)逡逑Ｆｉｇ．邋１－３邋Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｔ：ｈｅ邋Ｎ－ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ邋ｆｒｏｍ邋ＩｌｉＮＶ－Ｓｎ逡逑２７逡逑

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本文編號(hào)：2752882