【摘要】：脂肪不僅可以作為生物體能量的來源,而且有些脂肪如魚油中所含有的高度不飽和脂肪酸(PUFA)還是魚類生長和發(fā)育過程中的不可缺少的物質(zhì)。但是脂肪特別是魚油極容易被氧化,一旦遭到氧化,脂肪中的不飽和脂肪酸中的非共轆順式雙鍵經(jīng)分解聚合,生成富有毒性的低分子醛和酮的復(fù)雜混合物,或在微生物的作用下最終生成醛和酮,導(dǎo)致油脂的氧化酸敗。氧化的魚油能導(dǎo)致魚類生產(chǎn)性能下降、死亡率增加、肝臟病變、瘦背病及貧血等。目前,國內(nèi)外關(guān)于氧化魚油對(duì)魚類的影響的研究多集中在生長性能及組織學(xué)方面,關(guān)于氧化魚油對(duì)魚類轉(zhuǎn)錄組水平的研究分析還鮮見報(bào)道。本研究旨在研究飼喂三組含有不同氧化程度的魚油飼料(即新鮮魚油組(FO),中度氧化魚油組(MO)和高度氧化魚油組(HO))的泥鰍的肝臟組織通過RNA測序和短read序列組裝得到泥鰍肝臟轉(zhuǎn)錄組。通過轉(zhuǎn)錄組測序,本研究共獲得60,663條Unigenes,平均長度為848.74 bp,FO,MO和HO分別得到50,814,49,584和49,814條Unigenes。在FO和MO比較組,共有2,343條差異表達(dá)基因,其中855條下調(diào)和1,488條上調(diào)基因;HO和FO比較,共有2,813條差異表達(dá)基因,其中1,256條下調(diào)和1,552條上調(diào)基因;MO和HO組比較,共有2,075條差異表達(dá)基因,其中上調(diào)基因1,074條,下調(diào)基因1,001條。分析結(jié)果得到的差異基因包括脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(fatp),脂肪酸結(jié)合蛋白(fabp),脂蛋白(apo),過氧化物增殖物活化受體-γ(ppar-γ),乙酰輔酶A合成酶(acs)和花生四烯酸5脂肪氧合酶(alox5),而這些基因均與脂肪代謝相關(guān),說明泥鰍攝食含有氧化魚油的飼料之后調(diào)節(jié)了這些基因的表達(dá)。本研究對(duì)泥鰍肝臟轉(zhuǎn)錄組做了分析,為泥鰍基因組研究奠定了基礎(chǔ)。更重要的是,本研究分析了一些與飼料氧化魚油相關(guān)的重要基因,這也可以為將來魚類脂肪代謝相關(guān)的研究提供良好的參考�；谵D(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)篩選隨著氧化程度變化發(fā)生明顯變化的基因通路,得到其中變化最明顯的基因--脂肪酸結(jié)合蛋白2(fabp2)。本研究從泥鰍中成功克隆得到fabp2 cDNA的全長,泥鰍fabp2基因的cDNA序列全長為956 bp,其中5’非編碼區(qū)257 bp,3’非編碼區(qū)297 bp,開放閱讀框?yàn)?58 bp-659 bp,長402 bp,編碼134個(gè)氨基酸,與斑馬魚和鯉有較高的同源性。fabp2基因在泥鰍的各個(gè)組織表達(dá)不一,其中在腸道、大腦和肌肉中表達(dá)量較高,在胚胎發(fā)育過程中,受精卵孵化之后才開始表達(dá),為后續(xù)泥鰍fabp2的功能研究奠定了基礎(chǔ)。在攝食氧化魚油之后,泥鰍腸道中fabp2的表達(dá)會(huì)隨著投喂時(shí)間的增加明顯下調(diào),說明氧化魚油對(duì)fabp2基因的表達(dá)具有抑制作用。
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S963
【圖文】：

14圖 2.1 轉(zhuǎn)錄組測序?qū)嶒?yàn)流程圖1 Flow chart of the transcriptome sequencing總 RNA 經(jīng) Agilent 2100 Bioanalyze標(biāo)準(zhǔn)（OD260/280 為 1.8-2.2，28S：18SA（RNAintegrity number）值≥1.8）；）的磁珠從質(zhì)量檢測合格的總 RNA n buffer 將 mRNA 打斷成 200 nt-700 n成使用 Invitrogen 公司的 SuperScriper 隨機(jī)引物；成第二條鏈 cDNA，即首先利用 R刻或缺口，再以 RNA 片段為引物使

圖 2.2 轉(zhuǎn)錄組測序生物信息分析流程圖Figure 2.2 Flow chart of the transcriptome sequencing biological information analysis處理后序列的組裝：使用短 reads 組裝軟件 Trinity（Grabherr et al，2011）進(jìn)行序列的從頭組裝體步驟如下：將具有一定長度序列重疊區(qū)的 reads 首尾相連組成更長的序列片段，這些通序列重疊關(guān)系組裝成的片段被稱為 contig；將 reads 比對(duì)回 contigs，通過 paired-end reads 確定來自同一轉(zhuǎn)錄本的不contigs 以及這些 contigs 之間的距離；利用 Trinity 軟件將這些 contigs 連在一起，獲得兩端不能再延伸的序列，些序列被稱為 Unigene；使用 TGICL（Pretea et al，2003）將組裝得到的 Unigene 去冗余并進(jìn)一步拼再將這些拼接后的 Unigene 序列進(jìn)行同源轉(zhuǎn)錄本聚類，從而獲得最終

氧化油脂誘導(dǎo)泥鰍氧化應(yīng)激的轉(zhuǎn)錄組分析及氧化油脂對(duì) fabp2 表達(dá)的影響研究3.結(jié)果與分析3.1 不同氧化程度魚油對(duì)泥鰍幼魚抗氧化性能的影響圖 2.3 顯示的是不同氧化程度魚油對(duì)泥鰍稚魚肝臟抗氧化性能（包括抗氧化相關(guān)酶活性和 TBARS 值）的影響。隨著飼料中魚油氧化程度的升高，過氧化物酶（CAT）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性顯著降低，而谷胱甘肽過氧化物酶（GPX）的活性則隨著飼料中魚有的氧化程度升高而顯著升高。硫代巴比妥酸（TBARS）值在高度氧化魚油組顯著高于其它兩組。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2752470