【摘要】：凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)是世界三大養(yǎng)殖蝦類(lèi)品種之一,近年來(lái)養(yǎng)殖速度的過(guò)快增長(zhǎng)造成一系列疾病的暴發(fā),其中急性肝胰腺壞死病(Acute Hepatopancreas Necrosis Disease,AHPND)是近年來(lái)危害最為嚴(yán)重的對(duì)蝦疾病,目前還沒(méi)有行之有效的措施防治AHPND,成為制約養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的重要因素。本研究針對(duì)養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦AHPND主要致病菌進(jìn)行有效抑菌中草藥的篩選,并對(duì)篩選出的復(fù)方中草藥對(duì)凡納濱對(duì)蝦的安全性,免疫性能等進(jìn)行研究,以期為研發(fā)專(zhuān)用中草藥、防控AHPND和實(shí)現(xiàn)對(duì)蝦健康養(yǎng)殖提供理論依據(jù)和參考。本研究選用抑菌圈法和改良微量二倍稀釋法測(cè)定了24種廣譜抑菌中草藥對(duì)凡納濱對(duì)蝦急性肝胰腺壞死病六種重要致病菌副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)、哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)、Vibrio.sp.Ex-25、麥?zhǔn)匣【?Vibrio metschnikovii)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)的體外抑菌效果。結(jié)果顯示,地榆、訶子、黃連和烏梅四味單方中草藥的綜合抑菌效果最好,他們的平均抑菌濃度(MIC)分別為6.38 mg/ml、7.29 mg/ml、11.98 mg/ml、7.68 mg/ml,平均殺菌濃度(MBC)分別為25 mg/ml、19.27 mg/ml、25mg/ml、16.15 mg/ml。將這四味單方中草藥按照正交實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)組成16種復(fù)方,進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明復(fù)方抑菌圈和MIC、MBC值均顯著優(yōu)于單方,平均抑菌圈直徑最大達(dá)到22.08mm,平均MIC最低達(dá)到2.67 mg/ml,平均MBC最低為6.90 mg/ml。通過(guò)體外抑菌實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)HD-4復(fù)方中草藥組的抑菌效果最顯著,最佳質(zhì)量配比為地榆:訶子:黃連:烏梅=1:4:4:4。將不同劑量復(fù)方中草藥HD-4與飼料粘合,復(fù)方中草藥HD-4所占比例從40 000 mg/Kg~639 851 mg/Kg等劑量比設(shè)計(jì)8種不同劑量的藥餌飼料,投喂凡納濱對(duì)蝦進(jìn)行口服安全性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示,復(fù)方中草藥HD-4對(duì)凡納濱對(duì)蝦120 h的半數(shù)致死濃度LD50為(138537.17±4881.93)mg/Kg,根據(jù)毒理學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)判斷為復(fù)方中草藥HD-4是無(wú)毒的。實(shí)驗(yàn)前后對(duì)各組存活凡納濱對(duì)蝦體重進(jìn)行測(cè)量,發(fā)現(xiàn)各組增重情況整體呈現(xiàn)先高后低的趨勢(shì),前5組增重比較顯著,組間差異不顯著(P0.05),120 h內(nèi)增重率在20%~30%之間,與6、7、8組差異顯著(P0.05);后3組增重幅度明顯減緩,尤其是第8組,120 h的增重率不足5%,體重幾乎為增長(zhǎng)。將復(fù)方中草藥HD-4以0.5%、1%、2%的比例添加到對(duì)蝦飼料中,空白對(duì)照組投喂基礎(chǔ)飼料,陽(yáng)性對(duì)照組投喂1%的酵母細(xì)胞壁多糖,投喂30天測(cè)定凡納濱對(duì)蝦血清中的酸性磷酸酶(Acid phosphatase,ACP)、堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,AKP)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)以及溶菌酶(Lysozyme,LSZ)的變化,分析30 d的體重變化以及研究中草藥對(duì)凡納濱對(duì)蝦組織結(jié)構(gòu)的影響,最后進(jìn)行人工感染副溶血弧菌實(shí)驗(yàn),分析免疫保護(hù)率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)2%中草藥投喂組在實(shí)驗(yàn)15天和20天時(shí)AKP活性均顯著高于空白組(P0.05),1%中草藥組在第20天時(shí)也顯著高于空白組(P0.05);1%中草藥組在10天和15天時(shí)ACP活性均顯著高于空白組(P0.05),2%中草藥組在實(shí)驗(yàn)到10天時(shí)達(dá)到峰值,與空白組差異顯著(P0.05);三個(gè)劑量中草藥組對(duì)SOD和LSZ酶在實(shí)驗(yàn)期間沒(méi)有產(chǎn)生明顯的變化。隨著中草藥添加量的增加,凡納濱對(duì)蝦的相對(duì)增重率和特定生長(zhǎng)率也伴隨著增加,其中生長(zhǎng)狀況最好的是2%中草藥組,增重率達(dá)到(69.71±0.09)%,特定生長(zhǎng)率達(dá)到(13.3±2.1)%。采用二次回歸曲線(xiàn)獲得中草藥添加劑量為2.39%時(shí)增重率最高。人工感染副溶血弧菌后測(cè)定7 d的存活數(shù)量,發(fā)現(xiàn)0.5%、1%、2%三個(gè)中草藥組均呈現(xiàn)一定的免疫保護(hù)作用,免疫保護(hù)率分別為(23.33±6.67)%、(30.00±10.00)%、(46.67±6.67)%。對(duì)投喂中草藥的凡納濱對(duì)蝦取樣進(jìn)行組織切片觀(guān)察發(fā)現(xiàn)中草藥對(duì)凡納濱對(duì)蝦的肝胰腺和中腸組織并沒(méi)有產(chǎn)生損害。本研究篩選出對(duì)凡納濱對(duì)蝦的急性肝胰腺壞死病病原菌有顯著抑菌效果的復(fù)方中草藥HD-4,并從臨床安全性,非特異性免疫性能等多方面進(jìn)行分析研究,初步確定該復(fù)方安全無(wú)毒,對(duì)病原菌抑菌效果良好,對(duì)凡納濱對(duì)蝦有一定非特異性免疫效果,為研發(fā)專(zhuān)用中草藥、有效防控AHPND和實(shí)現(xiàn)對(duì)蝦健康養(yǎng)殖提供理論依據(jù)和參考。
【學(xué)位授予單位】：大連海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S945.49
【圖文】：

1單圖 1-1 2014 年中國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖蝦類(lèi)主要物種產(chǎn)量Figure 1-1 Chinese main species aquaculture shrimp production

近十年中國(guó)對(duì)蝦養(yǎng)殖總產(chǎn)量及凡納濱對(duì)蝦產(chǎn)量Figure1-2ThemainfarmingproductionandLitopenaeusvannameiproductioninChinainaneardecade

圖 1-3 2014 年中國(guó)凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖主要分布Figure 1-3 Litopenaeus vannamei area of distribution in China in 201品種自 1988 年引進(jìn)以來(lái)，人們開(kāi)始研究生產(chǎn)養(yǎng)殖模式，由于多差異，養(yǎng)殖模式多樣，有池塘精細(xì)養(yǎng)殖、大棚溫養(yǎng)、工廠(chǎng)

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2 衣萌萌;于赫男;林小濤;許忠能;周小壯;;密度脅迫下凡納濱對(duì)蝦的行為與生理變化[J];暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);2012年01期

3 周歧存,丁q

本文編號(hào)：2751186