【摘要】：仿刺參因其極高的營養(yǎng)和藥用價(jià)值,成為我國單一產(chǎn)值最高的海水養(yǎng)殖品種,年產(chǎn)值高達(dá)300億元以上。然而隨著養(yǎng)殖工業(yè)化程度的不斷深化,成本更低的高密度養(yǎng)殖手段已經(jīng)成為了主流,但是這也增大了疾病傳播和蔓延的風(fēng)險(xiǎn),給海參養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。隨著細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生和不斷增強(qiáng),傳統(tǒng)抗生素療法的弊端也越來越明顯,亟需一種替代抗生素的新型藥劑。本研究將大連地區(qū)刺參腐皮綜合征的主要致病菌黃海希瓦氏菌作為宿主菌,通過雙層平板法在水產(chǎn)品市場污水中篩選裂解性噬菌體。對(duì)噬菌體進(jìn)行透射電鏡觀察,表征其氯仿敏感性、酸堿以及溫度耐受性、宿主譜、裂解量、吸附速率等生物特性,并考察噬菌體體外裂解能力。篩選得到的噬菌體PSM-1屬于肌尾噬菌體,宿主專一性強(qiáng),對(duì)氯仿不敏感。吸附速率實(shí)驗(yàn)顯示大部分噬菌體在8分鐘內(nèi)吸附到宿主體內(nèi)。一步生長曲線顯示PSM-1的潛伏期與裂解期分別為20和40 min,裂解量為219 PFU/infected cell.體外抑菌效果較好,裂解活性在28℃,pH 7.0處最高。噬菌體治療實(shí)驗(yàn)采取浸浴和腹腔注射兩種方式給藥。通過對(duì)比陰性對(duì)照組、陽性對(duì)照組以及不同的給藥濃度和給藥時(shí)間的實(shí)驗(yàn)組,考察噬菌體PSM-1對(duì)于黃海希瓦氏菌感染的防治效果。腹腔注射組可將仿刺參從存活率0%提升到80%以上,最佳給藥時(shí)間在攻毒前2d到攻毒后1d；浸浴組可將仿刺參從存活率0%提升到60%以上,最佳給藥時(shí)間在攻毒前1d到攻毒后2d。兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組在最佳給藥時(shí)間以及最高給藥濃度時(shí),對(duì)仿刺參保護(hù)率均高于90%。采取噬菌體治療實(shí)驗(yàn)中保護(hù)率最高的一組中的給藥濃度以及給藥時(shí)間作為治療組,通過與空白對(duì)照、陰性對(duì)照在不同時(shí)間點(diǎn)內(nèi)超氧化物歧化酶、一氧化氮合酶、溶菌酶等免疫相關(guān)酶及因子在仿刺參體腔液中的變化的對(duì)比,考察噬菌體對(duì)于仿刺參免疫應(yīng)答的影響。實(shí)驗(yàn)表明,噬菌體對(duì)仿刺參體腔液中免疫相關(guān)酶及因子的變化有顯著影響,為噬菌體在仿刺參體內(nèi)裂解病原菌提供了佐證。綜上所述,本研究針對(duì)引起仿刺參腐皮綜合癥的黃海希瓦氏菌篩選分離得到1株裂解性噬菌體,并對(duì)其進(jìn)行了生物特性研究。采取注射和浸浴的給藥方式控制仿刺參的腐皮綜合征,)提高仿刺參保護(hù)率,并考察了給藥后仿刺參體內(nèi)免疫相關(guān)酶及因子的變化,為噬菌體在控制仿刺參細(xì)菌性疾病方面的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：大連理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S947.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2750739