【摘要】：鹽酸氯苯胍是一種人工合成的抗球蟲藥,其作用機(jī)理主要是通過影響球蟲蛋白質(zhì)的生物學(xué)過程來抑制球蟲。我國于2010年將此藥規(guī)定為治療魚類粘孢子蟲病的國標(biāo)漁藥,但是目前魚類在該藥使用之后產(chǎn)生的反應(yīng)尚不明確。同時(shí),在該藥的使用過程中,對養(yǎng)殖魚類的其他疾病是否有影響也未知。本課題在以異育銀鯽為實(shí)驗(yàn)對象的基礎(chǔ)上,不僅研究了鹽酸氯苯胍在其體內(nèi)的藥代動力學(xué),還研究了鹽酸氯苯胍對異育銀鯽免疫功能的影響,以及對異育銀鯽病毒病和細(xì)菌病的影響。1.鹽酸氯苯胍在異育銀鯽體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究在水溫為(25±1)℃時(shí),對體質(zhì)量為(120±10)g的異育銀鯽分別口灌劑量為20mg/kg、30mg/kg和40mg/kg的鹽酸氯苯胍,分12個(gè)時(shí)間點(diǎn)取異育銀鯽血液、肌肉、腎臟、肝臟四種組織,并用高效液相色譜法測定鹽酸氯苯胍在其體內(nèi)的藥代動力學(xué)。結(jié)果顯示,三種劑量的鹽酸氯苯胍在異育銀鯽各組織中藥時(shí)曲線均呈“雙峰”現(xiàn)象。20mg/kg、30mg/kg和40mg/kg的藥物在該魚血液中的達(dá)峰時(shí)間分別為:Tmax=2.3h、Tmax=2.1h和Tmax=2.2h;血藥質(zhì)量濃度峰值分別為Cmax=0.55μg/mL、Cmax=0.73μg/mL和Cmax=1.17μg/mL;藥時(shí)曲線下面積分別為:AUC=9.35μg/(mL·h)、AUC=13.02μg/(mL·h)和AUC=13.98μg/(mL·h)。同時(shí),異育銀鯽各組織中鹽酸氯苯胍的藥時(shí)曲線下面積由大到小依次是腎臟、肝臟、血液、肌肉。清除速率顯示,鹽酸氯苯胍在肌肉中清除最慢,其次是血液。ROBH在腎臟和肝臟中具有一定蓄積作用,主要表現(xiàn)在藥物含量高、MRT值偏大。本實(shí)驗(yàn)條件下,鹽酸氯苯胍在異育銀鯽體內(nèi)的休藥期建議不低于9 d。但考慮到實(shí)際養(yǎng)殖情況和天氣原因,臨床休藥期可根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)延長。2.鹽酸氯苯胍對異育銀鯽的保護(hù)性研究在水溫為(25±1)℃時(shí),以口灌給藥的方式,對體質(zhì)量為(120±10)g的異育銀鯽口灌20mg/kg劑量的鹽酸氯苯胍,24h后進(jìn)行腹腔注射濃度分別為10~5、10~6、10~7、10~8、10~9CFU/mL的嗜水氣單胞菌AH10 200μL,觀察96h內(nèi)異育銀鯽的死亡情況。通過Bliss法計(jì)算得出嗜水氣單胞菌AH10對異育銀鯽96h的半致死濃度(LD_(50))為6.98×10~7 CFU/mL,而通過相同濃度的嗜水氣單胞菌AH10腹腔注射異育銀鯽,96hLD_(50)為9.49×10~6 CFU/mL。同時(shí),在相同環(huán)境下,對異育銀鯽分別口灌40mg/kg、20mg/kg和0mg/kg劑量的鹽酸氯苯胍,24h后腹腔注射II型鯉皰疹病毒(CyHV-2)200μL,觀察7天內(nèi)異育銀鯽的死亡率。結(jié)果顯示,攻毒CyHV-2后的異育銀鯽在3天后開始死亡,第四天死亡數(shù)達(dá)到高峰,并在第6天全部死亡,而對照組無死亡現(xiàn)象。由此可知,鹽酸氯苯胍對細(xì)菌病引起的異育銀鯽的死亡率有一定的控制作用,而對病毒病引起的異育銀鯽的死亡率沒有抑制效果。因此,建議在養(yǎng)殖魚類疾病爆發(fā)的前期,適當(dāng)使用鹽酸氯苯胍在防治粘孢子蟲病的同時(shí),還可防止因細(xì)菌病爆發(fā)造成的鯽死亡率。3.鹽酸氯苯胍對異育銀鯽免疫功能影響的研究鹽酸氯苯胍是治療魚類粘孢子蟲的藥物之一,但是該藥對魚類免疫功能的影響尚無任何報(bào)道。以鹽酸氯苯胍在異育銀鯽體內(nèi)藥代動力學(xué)的研究為基礎(chǔ),用異育銀鯽血液中最高濃度1.17μg/mL的鹽酸氯苯胍處理異育銀鯽鰭條細(xì)胞后于24h和48h取細(xì)胞樣品進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序。對測序數(shù)據(jù)進(jìn)行組裝之后,在轉(zhuǎn)錄組序列長度為201bp到13990bp的范圍內(nèi),總共得到了118364個(gè)功能基因。其中,24h產(chǎn)生1976個(gè)差異表達(dá)基因調(diào),包括1271個(gè)上調(diào)基因和705個(gè)下調(diào)基因;48h產(chǎn)生2568個(gè)差異表達(dá)基因,包括2071個(gè)上調(diào)基因和497個(gè)下調(diào)基因;而24h和48h有336個(gè)共同差異基因。KEGG富集分析后,得到了超過20免疫相關(guān)的信號通路。在其中挑選了3條(P0.05),分別是JAK-STAT signaling pathway,Natural killer cell mediated cytotoxicity和Th1 and Th2 cell differentiation。通過進(jìn)一步的KEGG分析(P0.01),在這3條信號通路上挑選了9個(gè)免疫相關(guān)的基因進(jìn)行熒光定量PCR驗(yàn)證。
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S948
【圖文】：

鹽酸氯苯胍標(biāo)準(zhǔn)工作曲線回歸方程為：y=179.35x -3.9238（R2=0.997），在 0.05-1μg/mL 的范圍內(nèi)，ROBH 的峰面積與其質(zhì)量濃度呈較好的線性關(guān)系（圖 1-1）。以2 倍基線噪音的藥量為最低檢測限，得知在檢測環(huán)境下，ROBH 的最低檢測限為20ng/mL。

圖 1-2 不同鹽酸氯苯胍口灌劑量在異育銀鯽各組織內(nèi)的藥-時(shí)曲線Fig.1-2 ROBH concentration-time curves in different tissues of crucian carp atdifferent oral administration dose

表 2-3 口灌不同劑量的鹽酸氯苯胍后感染 CyHV-2 異育銀鯽的死亡數(shù)ble2-3 The results of silver crucian carp on CyHV-2 infected following different doses ROoral administration劑量mg/kg)各組魚總數(shù)（尾）7 天內(nèi)魚死亡情況 7 天內(nèi)累計(jì)死亡總數(shù)1d 2d 3d 4d 5d 6d 7d對照組 10 0 0 0 0 0 0 0 00 10 0 0 1 4 5 0 0 1020 10 0 0 1 5 4 0 0 1040 10 1 1 0 2 3 3 0 10

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本文編號：2746381