【摘要】：甘露糖受體(MR,CD206)是甘露糖受體家族中最先發(fā)現(xiàn)的成員,它能夠識(shí)別多種內(nèi)源性和外源性甘露糖化配體,在宿主免疫和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著重要作用。MR胞外有8個(gè)C-型凝集素樣結(jié)構(gòu)域(CTLDs),CTLD4-8結(jié)構(gòu)域有同等于完整的MR結(jié)合天然糖蛋白配體能力,能介導(dǎo)巨噬細(xì)胞對(duì)多種病原微生物的識(shí)別和吞噬。MR表達(dá)并不局限于巨噬細(xì)胞,在其他細(xì)胞如腎小球系膜細(xì)胞、淋巴和肝內(nèi)皮細(xì)胞、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞、成肌細(xì)胞以及腦中的小膠質(zhì)細(xì)胞等都發(fā)現(xiàn)有MR表達(dá)。相對(duì)于哺乳動(dòng)物MR的結(jié)構(gòu)、功能以及分布已有的詳盡研究,有關(guān)魚類MR的報(bào)道卻很少,尤其是MR蛋白的分布,迄今還沒有過報(bào)道。本研究從MR的CTLD4-8結(jié)構(gòu)域表達(dá)載體的構(gòu)建、原核表達(dá)、蛋白純化等方面入手,進(jìn)而制備了抗團(tuán)頭魴MR的多克隆抗體(Ma MR-CTLD4-8)。結(jié)合免疫組化技術(shù)系統(tǒng)研究了MR蛋白在團(tuán)頭魴胚胎期以及幼魚期各組織的分布,并研究了MR與GFP-E.coli的相互作用,探討其在團(tuán)頭魴巨噬細(xì)胞吞噬病原微生物過程中發(fā)揮的作用,以及引起的免疫應(yīng)答。主要研究結(jié)果如下:(1)在優(yōu)化條件下,高效表達(dá)CTLD4-8重組蛋白。經(jīng)SDS-PAGE和Western-blot鑒定,證明成功表達(dá)了分子量大小為110 k Da的融合蛋白;(2)純化目的蛋白免疫日本大耳白兔三次,制備了多克隆抗體。ELISA檢測抗血清效價(jià)在51,200左右。以提取的團(tuán)頭魴組織總蛋白作為蛋白樣品,經(jīng)Western-blot分析,在PVDF膜上檢測出單一條帶,分子量在170~180 k Da,與預(yù)測的MR大小相符。說明制備的多克隆抗體具有特異性,可用于下面的研究;(3)利用免疫組化技術(shù)研究了MR蛋白在團(tuán)頭魴胚胎期及幼魚各組織中的分布。結(jié)果表明MR首先出現(xiàn)在受精卵期的卵黃囊處,在出膜期分布廣泛。MR蛋白分布與早期巨噬細(xì)胞時(shí)空分布有一定關(guān)聯(lián)性,預(yù)測早期巨噬細(xì)胞就開始表達(dá)MR,而不是局限于終端分化巨噬細(xì)胞。MR廣泛表達(dá)于團(tuán)頭魴頭腎、體腎、肝、腦、腸、鰓、肌肉和心臟等組織,而在脾中的表達(dá)很少,但是嗜水氣單胞菌感染后,MR在脾中的表達(dá)變得非常豐富,頭腎中也是如此;(4)間接免疫熒光分析顯示MR在巨噬細(xì)胞的膜上及胞質(zhì)內(nèi)都有表達(dá);(5)MR介導(dǎo)巨噬細(xì)胞對(duì)表達(dá)綠色熒光蛋白大腸桿菌的非特異性識(shí)別和吞噬,并參與多種炎性介質(zhì)的分泌和表達(dá),包括活性氧、NO以及炎性細(xì)胞因子IL-1β和TNF-α。
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S941
【圖文】：

圖 1.1 甘露糖受體家族和雞卵黃囊 IgY 受體（FcRY）（Llorca 2008）ig. 1.1 Mannose receptor family and chicken yolk sac IgY receptor (FcRY) (Llorca 家族四個(gè)成員具有相似的整體結(jié)構(gòu)，由 N 端依次為：富含半胱氨酸ne-rich domain, CR），Ⅱ型纖維連接蛋白結(jié)構(gòu)域（fibronectin type Ⅱ

1.2 甘露糖受體家族伸展構(gòu)象和壓縮構(gòu)象之間的轉(zhuǎn)變（Llorca odel for the conformational transitions between an extended and aof the mannose receptor family (Llorca 2008)雖然結(jié)構(gòu)相似，但是在功能或分布上卻存在差異。研究CTLDs 結(jié)構(gòu)域都沒有糖結(jié)合能力（Mullin et al 1997）細(xì)胞（dendritic cell, DC），發(fā)揮抗原遞呈作用，而 PLEndo180 和 MR 雖然具有相似的配體結(jié)合成分，都能白，但結(jié)合位點(diǎn)不一樣，Endo180 的糖結(jié)合位點(diǎn)在 C糖結(jié)合位點(diǎn)位于 CTLD4 和 CTLD5（張小磊和趙魯杭。表達(dá)細(xì)胞的類型也有差別，Endo180 主要由基質(zhì)成細(xì)胞表達(dá)，而 MR 主要表達(dá)于巨噬細(xì)胞、上皮細(xì)胞和團(tuán)頭魴 MR 展開了分布和功能研究，以下是對(duì) MR 最述如下：

CTLD4-8片段的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物Fig.2.1ThePCRproductofCTLD4-8

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 于生金;張嘉寧;;甘露糖受體的腫瘤相關(guān)性[J];醫(yī)學(xué)綜述;2009年15期

2 虞鵬程,張豐旺;鄱陽湖漁區(qū)的團(tuán)頭魴胚胎發(fā)育觀察[J];中國水產(chǎn)科學(xué);1998年01期

本文編號(hào)：2746190