【摘要】：翹嘴鱖(Siniperca chuatsi)是經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高的名貴魚(yú)類(lèi),具有生長(zhǎng)快、肉質(zhì)肥美、味道鮮甜、營(yíng)養(yǎng)成分高等優(yōu)良性狀,是我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)重要養(yǎng)殖品種。饑餓脅迫是魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)過(guò)程中經(jīng)常面臨的問(wèn)題之一,饑餓會(huì)導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng),首先是活性氧自由基(ROS)的上升,攻擊細(xì)胞內(nèi)的蛋白分子、脂肪酸分子及核酸等,然后機(jī)體啟動(dòng)自身的抗氧化酶系統(tǒng)產(chǎn)生的SOD,CAT,GST等來(lái)清除活性氧自由基,當(dāng)抗氧化系統(tǒng)無(wú)法清除活性氧自由基時(shí),機(jī)體開(kāi)始引發(fā)自噬。Keap1與轉(zhuǎn)錄因子Nrf2一起構(gòu)成了細(xì)胞對(duì)氧化應(yīng)激反應(yīng)的主要傳感器,對(duì)維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要。饑餓對(duì)于氧化應(yīng)激和自噬相關(guān)的研究主要集中在哺乳動(dòng)物方面,例如小鼠。本研究圍繞氧化應(yīng)激和自噬兩個(gè)主題,研究了短期饑餓對(duì)翹嘴鱖腸道氧化應(yīng)激及細(xì)胞自噬的影響。主要研究結(jié)果如下:1.Keap1基因的克隆及序列分析研究根據(jù)翹嘴鱖成魚(yú)骨骼肌轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)中翹嘴鱖Keap1基因部分序列,采用cDNA末端擴(kuò)增技術(shù)(RACE)克隆得到了Keap1 cDNA序列(登錄號(hào)MK654680)全長(zhǎng)為5026bp,生物信息學(xué)分析表明:翹嘴鱖Keap1基因編碼區(qū)長(zhǎng)度為1878bp,共編碼625個(gè)氨基酸。對(duì)氨基酸序列的分析發(fā)現(xiàn),Keap1的N末端含有一個(gè)高度保守的DNA結(jié)合域,由BTB結(jié)構(gòu)域(48AA-150AA),BACK結(jié)構(gòu)域(155AA-257AA)和6個(gè)Kelch結(jié)構(gòu)域這三個(gè)組成。構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)顯示,翹嘴鱖Keap1歸類(lèi)于魚(yú)類(lèi)一支,并和大黃魚(yú)Keap1基因在同一小支上,表明翹嘴鱖與Larimichthys crocea同源性最高,遺傳距離最近,為深入研究翹嘴鱖骨骼肌中Keap1的功能奠定了分子基礎(chǔ)。2.饑餓對(duì)翹嘴鱖腸道氧化應(yīng)激的影響應(yīng)用試劑盒測(cè)定了翹嘴鱖饑餓0d,3d,7d及恢復(fù)投喂3d時(shí)氧化應(yīng)激相關(guān)因子ROS,CAT,GPX,GSH,GST,MDA和SOD的變化。結(jié)果表明:在饑餓0d,3d和7d,腸道ROS含量隨著饑餓時(shí)間延長(zhǎng)顯著提高(P0.05),恢復(fù)投喂3d,ROS含量顯著下降(P0.05),饑餓3d的GSH,GPX,CAT酶活性均出現(xiàn)顯著上升(P0.05);GST,SOD的活性均出現(xiàn)下降(P0.05)。饑餓7d的GST,CAT,GPX及SOD活性均出現(xiàn)顯著降低(P0.05)。在恢復(fù)投喂3d時(shí)SOD顯著提高(P0.05),GST,GSH及GPX均出現(xiàn)顯著下降(P0.05),CAT和GPX的變化不顯著。氧化應(yīng)激相關(guān)基因Keap1,Nrf2,GPX,GR,Kappa1的表達(dá)分析發(fā)現(xiàn),Keap1基因的表達(dá)量隨著饑餓時(shí)間的增加逐漸升高(P0.05),恢復(fù)投喂3d顯著提高(P0.05);Nrf2基因表達(dá)量在饑餓3d出現(xiàn)上升(P0.05),在饑餓7d出現(xiàn)顯著上升(P0.05),恢復(fù)投喂3d極顯著上升(P0.01);GPX基因的表達(dá)趨勢(shì)表現(xiàn)為先降低后升高,在饑餓7d下降到最低點(diǎn),恢復(fù)投喂3d顯著高于饑餓7d和3d(P0.05);GR基因的表達(dá)呈降低趨勢(shì),恢復(fù)投喂3d及饑餓3d,7d均比饑餓0d有顯著降低(P0.05);Kappa1基因的表達(dá)呈現(xiàn)上升的趨勢(shì),饑餓0d,3d,7d上升的差異不顯著(P0.05),恢復(fù)投喂3d均顯著高于饑餓0d和3d(P0.05)。說(shuō)明饑餓會(huì)導(dǎo)致翹嘴鱖腸道氧化應(yīng)激。3.饑餓對(duì)翹嘴鱖腸道自噬的影響應(yīng)用透射電鏡觀察了不同饑餓時(shí)間點(diǎn)翹嘴鱖腸道細(xì)胞,結(jié)果發(fā)現(xiàn):饑餓0d自噬小體幾乎觀察不到,饑餓3d開(kāi)始出現(xiàn)自噬小體,饑餓7d自噬小體明顯增多,恢復(fù)投喂3d時(shí)自噬小體開(kāi)始減少。采用實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)測(cè)定了自噬相關(guān)基因mTOR,S6K1,Atg4b,Beclin1,GabarapL1,LC3在饑餓0d,3d,7d及恢復(fù)投喂3d時(shí)的相對(duì)表達(dá)量,結(jié)果表明:mTOR基因的表達(dá)呈先上升后降低的趨勢(shì),在饑餓3d上升到最高,在饑餓7d及恢復(fù)投喂3d顯著降低(P0.05)。S6K1基因的表達(dá)呈下降趨勢(shì),饑餓3d略低于0d,饑餓7d和恢復(fù)投喂3d顯著低于饑餓0d和饑餓3d(P0.05);Atg4b基因的表達(dá)呈現(xiàn)先降低后上升的趨勢(shì),在饑餓7d降到最低(P0.05),恢復(fù)投喂3d比饑餓0d,3d,7d均有顯著提高(P0.05);Beclin1和GabarapL1基因在饑餓3d,7d的表達(dá)恢比復(fù)投喂3d,0d均有顯著提高(P0.05)。LC3基因在饑餓0d,3d,7d及恢復(fù)投喂3d的表達(dá)量差異不顯著。說(shuō)明饑餓會(huì)導(dǎo)致翹嘴鱖腸道自噬。
【學(xué)位授予單位】：廣西師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：S917.4
【圖文】：

是廣泛分布于動(dòng)物植物微生物內(nèi)的末端氧種單一酶類(lèi)[20]。它在生物體中是防御的關(guān)鍵性酶，主氫[21]。CAT 能把 ROS 的濃度在細(xì)胞中達(dá)成理想平衡化過(guò)物酶（GPX），是酶促抗氧化劑系統(tǒng)的一部分，（ROS）反應(yīng)而產(chǎn)生的過(guò)氧化物，和 GST 結(jié)合物將 ROS 損傷的細(xì)胞成分[22,23]。Morales 等對(duì)魚(yú)進(jìn)行饑中活性是增加的[18]。

圖 2-2 預(yù)測(cè)氨基酸序列的疏水區(qū)和親水區(qū)Fig.2-2 Predict hydrophobic and hydrophilic areas of amino acid sequence表 2-12 翹嘴鱖 Keap1 蛋白各類(lèi)氨基酸含量及氨基酸組份Tab.2-12 Amino acid content and amino acid composition of Keap1 protein of S.chuats名稱(chēng)Name英文English縮寫(xiě)Abbreviation特性Characteristic含量Content百分含量（%Percentage冬氨酸 Aspartic acid Asp (D) 酸性 29 4.6%氨酸 Glutamic acid Glu (E) 酸性 35 5.6%氨酸ArginineArg (R) 堿性 40 6.4%氨酸 Lysine Lys (K) 堿性 16 2.6%氨酸 Histidine His (H) 堿性 19 3.0%胱氨酸 Cysteine Cys (C) 親水性 27 4.3%氨酰胺GlutamineGln (Q) 親水性 29 4.6%氨酸 Glycine Gly (G) 親水性 46 7.4%冬酰胺 Asparagine Asn (N) 親水性 32 5.1%

13 Gallus gallus Keap1 KU321503.114 Larimichthys crocea Keap1 XM_019274257.2從圖 2-3 的氨基酸序列對(duì)比可以看出，這 14 個(gè)物種的平均一致性為 19.57，不同物種的 Keap1 的氨基酸序列差異有不同，但是都存在保守區(qū)域。

【參考文獻(xiàn)】

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1 孔淑碧;江德中;祖學(xué)勤;靳濤;;魚(yú)類(lèi)應(yīng)激生物學(xué)研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技;2015年16期

2 張靜;王軍霞;張亞娟;劉存歧;崔洪濤;;饑餓對(duì)日本沼蝦代謝及SOD活性的影響[J];河北大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2007年05期

3 劉小玲;;魚(yú)類(lèi)應(yīng)激反應(yīng)的研究[J];水利漁業(yè);2007年03期

4 張坤生;田薈琳;;過(guò)氧化氫酶的功能及研究[J];食品科技;2007年01期

5 郭長(zhǎng)江;韋京豫;楊繼軍;徐靜;龐偉;蔣與剛;;饑餓后大鼠核黃素營(yíng)養(yǎng)狀況的變化[J];中國(guó)臨床營(yíng)養(yǎng)雜志;2005年06期

6 郭永燦;水溫對(duì)鰱魚(yú)、草魚(yú)胚胎發(fā)育的影響[J];淡水漁業(yè);1982年03期

本文編號(hào)：2746573