【摘要】：本文旨在研究維生素A(VA)對生長中期草魚生產(chǎn)性能、腸道、機體和鰓健康以及肌肉品質(zhì)的作用及作用機制。試驗選擇初始體重為262.02±0.45 g的健康草魚540尾,隨機分成6個處理組,飼喂不同水平的VA飼糧進行10周的生長試驗,考察VA對生長中期草魚生產(chǎn)性能以及肌肉品質(zhì)的影響。生長試驗結(jié)束后分別選取15尾魚進行2周的嗜水氣單孢菌攻毒試驗和3天的魚害鏈球菌攻毒試驗,研究VA對魚類腸道、機體和鰓結(jié)構(gòu)完整性和免疫功能的作用及作用機制。結(jié)果表明：適宜水平的VA提高了中期草魚增重率(PWG)、特定生長率(SGR)、采食量(FI)和飼料效率(FE)并且提高了了抵抗腸炎、赤皮和爛鰓發(fā)生的能力。進一步研究發(fā)現(xiàn)：VA提高草魚抵抗腸炎、赤皮和爛鰓發(fā)生的能力與其維持了腸道、機體和鰓結(jié)構(gòu)完整性有關(guān)：①適宜水平的VA上調(diào)了生長中期草魚腸道、機體和鰓核因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)基因表達(dá)、下調(diào)了錨定蛋白kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關(guān)蛋白1a (Keap1a)(皮膚和鰓包括Keap1b)基因表達(dá),上調(diào)了銅鋅超氧化物歧化酶(CuZnSOD)、錳超氧化物歧化酶(MnSOD)(腸道除外)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶亞型la (GPx1a)(脾臟和鰓除外)、GPx4a 和 GPx4b (前中腸和鰓除外)、谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶亞型r(GSTr)(頭腎除外)和谷胱甘肽還原酶(GR)以及中后腸GSTpl和GSTo1亞型及皮膚GPx1b基因表達(dá),提高了相應(yīng)抗氧化酶的活力,從而提高了自由基清除能力,并降低了活性氧(ROS)含量,降低了脂質(zhì)過氧化和蛋白質(zhì)氧化損傷；同時,適宜水平的VA上調(diào)了草魚腸道雷帕霉素靶蛋白(TOR)和核糖體蛋白S6激酶1(S6K1)基因表達(dá)及下調(diào)了eIF4E結(jié)合蛋白(4E-BP1),同時下調(diào)了機體和鰓p38絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK),下調(diào)了腸道、機體和鰓Fas配體(FasL)基因表達(dá),下調(diào)了半胱天冬酶-8(caspase-8)介導(dǎo)的死亡受體凋亡途徑,并下調(diào)了腸道、機體和鰓促凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)(皮膚除外)和B細(xì)胞淋巴瘤蛋白-2相關(guān)X蛋白(Bax)基因表達(dá)以及上調(diào)了抗凋亡蛋白B細(xì)胞淋巴瘤／白血病-2(Bcl-2)基因表達(dá),下調(diào)了caspase-9 和 caspase-3介導(dǎo)的線粒體凋亡途徑,降低了腸道、機體和鰓細(xì)胞凋亡,維持了腸道、機體和鰓細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性；②適宜水平的VA下調(diào)了生長中期草魚腸道、機體和鰓肌球蛋白輕鏈激酶(MLC K)基因表達(dá),上調(diào)了腸道、機體和鰓細(xì)胞間緊密連接蛋白閉鎖連接蛋白-1(ZO-)、 occludin、 claudin-b、claudin-c、claudin-12 和 claudin-15a (鰓除外)亞型基因表達(dá)、腸道和鰓claudin-3基因表達(dá)、中后腸和鰓claudin-7以及后腸claudin-11基因表達(dá),維持了細(xì)胞間結(jié)構(gòu)完整性。此外,適宜水平的VA提高草魚抵抗腸炎、赤皮和爛鰓發(fā)生的能力也與其提高了腸道、機體和鰓免疫功能有關(guān)：①適宜水平的VA提高了生長中期草魚腸道、機體和鰓非特異性免疫因子溶菌酶(LA)和酸性磷酸酶(ACP)活力以及補體C3和C4含量；上調(diào)了腸道、機體和鰓抗菌肽鐵調(diào)素(Hepcidin)、β-防御素(p-defensin-1)以及肝臟表達(dá)抗菌肽2A (LEAP-2A) (前、中腸除外)和LEAP-2B(前、中腸除外)基因表達(dá),提高了腸道、機體和鰓免疫力；②適宜水平的VA下調(diào)了草魚腸道、機體和鰓促炎癥信號分子抑制蛋白κB激酶β (IKKβ). IKKy(不通過IKKa).核因子-;B p65 (NF-κB p65) (前腸除外)、NF-KBP52 (腸道和鰓除外)和腸道c-Rel基因表達(dá)以及上調(diào)了腸道、機體和鰓抑制子IκBα基因表達(dá),下調(diào)了促炎細(xì)胞因子腫瘤壞死因子α (TNF-a) (脾臟除外)、干擾素Y2(IFN-y2)(脾臟除外)、白介素-1β (IL-1β)、IL-6 (前腸和鰓除外)、IL-8、前中后腸IL-12p35和IL-15基因表達(dá)以及中后腸IL-17D基因表達(dá),并下調(diào)了草魚中腸和后腸p38MAPK基因表達(dá),上調(diào)機體和鰓TOR和S6KI基因表達(dá),下調(diào)機體和鰓4EBP-1基因表達(dá),從而上調(diào)了抗炎細(xì)胞因子IL-10(前腸和皮膚除外)、IL-11、轉(zhuǎn)化生長因子β1 (TGF-β1)(前腸除外)和TGF-β2(前腸除外)基因表達(dá)以及前中后腸IL-4/13A和IL-4/13B基因表達(dá),降低了炎癥反應(yīng),提高了魚類腸道、機體和鰓的免疫功能。同時,適宜水平的VA提高生長中期草魚肌肉蛋白品質(zhì)、脂肪品質(zhì)、膠原蛋白含量、保水性、PH和肌肉硬度,并且上調(diào)了Nrf2基因表達(dá)、下調(diào)了Keap1a基因表達(dá),上調(diào)了CuZnSOD、MnSODσ CAT、GPx1a、GPx1b、GPx4a、GPx4b 和 GSTr基因表達(dá),提高了相應(yīng)抗氧化酶的活力,并且降低了ROS,降低了脂質(zhì)過氧化和蛋白質(zhì)氧化損傷,表明適宜水平的VA改善了中期草魚的肌肉品質(zhì),且VA改善魚類肌肉品質(zhì)可能與其增強肌肉的抗氧化能力有關(guān)。綜上所述,適宜水平的VA能夠提高中期草魚的生產(chǎn)性能以及增強腸炎、赤皮和爛鰓病的抵抗能力。抵抗腸炎、赤皮和爛鰓病能力的提高與VA維持了魚類腸道、機體和鰓結(jié)構(gòu)完整性和提高了免疫功能有關(guān)：①VA可能通過上調(diào)Nrf2信號上調(diào)了CuZnSOD等抗氧化酶基因表達(dá)和活力從而降低了氧化損傷,并上調(diào)了抗凋亡蛋白Bcl-2以及下調(diào)了主要的促凋亡相關(guān)蛋白基因表達(dá),抑制了細(xì)胞凋亡,維持了細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性；②可能通過下調(diào)MLCK信號調(diào)控了細(xì)胞間緊密連接蛋白基因表達(dá),維持了細(xì)胞間結(jié)構(gòu)完整性；③提高了主要抗菌物質(zhì)活力和含量、上調(diào)了主要抗菌肽的基因表達(dá)提高了抗菌能力,并上調(diào)了主要抗炎細(xì)胞因子,下調(diào)了主要促炎細(xì)胞因子及相關(guān)信號分子NF-κB p65等的基因表達(dá),降低了炎癥反應(yīng),提高了魚類腸道、機體和鰓的免疫功能。同時,VA能提高魚類肌肉營養(yǎng)成分以及保水性、膠原蛋白含量等,改善肌肉品質(zhì),且這一結(jié)果可能與VA增強魚類肌肉的抗氧化能力有關(guān)。在本試驗的條件下,根據(jù)體增重、抗腸炎發(fā)生率、頭腎ACP、脾臟補體C3、抗鰓蛋白羰基(PC)以及肌肉剪切力為標(biāo)識,中期草魚(262-997 g)對VA的需要量分別為1929、2048、2016、2281、2054和2093IU/kg日糧。
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S965.112
【圖文】：

注：數(shù)據(jù)表示平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ｎ＝３）。同一排不同的字巧標(biāo)識代表差異顯著（尸＜０．０５），下表同。逡逑５．２邐ＶＡ對中期草魚腸炎、赤皮、爛

本文編號：2742881