【摘要】：溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是一種世界性分布的海洋細(xì)菌,對海洋動物和人類均存在明顯的致病,溶藻弧菌的致病機制受到了國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。TssJ基因是編碼溶藻弧菌Ⅵ型分泌系統(tǒng)的脂蛋白,成熟的TssJ蛋白通過N-半胱氨酸的�；偳对诩�(xì)胞外膜上,并且突出到細(xì)胞周質(zhì)中,可顯著影響腸聚集性大腸桿菌的毒力,但迄今尚未見關(guān)于溶藻弧菌的TssJ功能的相關(guān)研究報道。本文針對tssJ基因?qū)θ茉寤【鶫N08155運動性和生物膜形成的影響進行研究。 本實驗室采用基因敲除的方法成功構(gòu)建了溶藻弧菌HN08155基因缺失突變株△tssJ并確定其毒力存在減弱現(xiàn)象的基礎(chǔ)上,本研究首先選用pACYC184作為回補質(zhì)粒,對突變株△tssJ進行回補實驗構(gòu)建回補株tssJ+。結(jié)果表明,由于質(zhì)�！鱰ssJ被突變株△tssJ插入一個大于自身質(zhì)粒2-3倍的基因組,使回補質(zhì)粒無法再回補菌株中正常轉(zhuǎn)錄和翻譯；將pMMB206和pJN105質(zhì)粒導(dǎo)入突變株△tssJ,兩種質(zhì)粒同樣被溶藻弧菌改造,無法在細(xì)菌中正常轉(zhuǎn)錄表達。因此,溶藻弧菌NH08155存在較強的基因保護機制,當(dāng)前常見的回補方法無法實現(xiàn)外源基因在該菌株中的正常表達。 本研究進一步測定了tssJ基因?qū)θ茉寤【鶫N08155運動性和生物膜形成的影響。其中,鞭毛染色和泳動性試驗結(jié)果表明,突變株△tssJ無法合成鞭毛,運動能力明顯減弱,tssJ基因?qū)θ茉寤【鶫N08155的運動性存在正調(diào)控作用。通過掃描電鏡和激光共聚焦顯微鏡的觀察,野生株和突變株的生物膜都是由微菌落和多糖等胞外產(chǎn)物組成的。通過對兩株菌所形成的生物膜和胞外多糖檢測,野生株的成膜能力和所分泌得水溶性胞外多糖能力遠(yuǎn)高于突變株,但突變株生物膜中的水不溶性胞外多糖含量遠(yuǎn)高于野生株,也就是說,tssJ基因?qū)θ茉寤【鶫N08155的成膜能力具有正調(diào)控作用,并且改變該菌株成膜過程中合成胞外多糖的類型。同時,本研究還測定了在不同物質(zhì)的濃度下,野生株和突變株成膜能力的差異,結(jié)果表明,tssJ基因在溶藻弧菌形成生物的階段,對KCl的誘導(dǎo)呈負(fù)調(diào)控作用,對NaCl和CaCl2的誘導(dǎo)基本不存在調(diào)控;對MgCl2和NaNO3的誘導(dǎo)沒有明顯的調(diào)控規(guī)律。 總之,本研究確定了tssJ基因?qū)θ茉寤【倪\動行和生物膜形成都具有促進作用,為今后系統(tǒng)揭示溶藻弧菌的致病機理和免疫奠定重要基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：海南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S941.4

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 簡紀(jì)常,葉劍敏,吳灶和;溶藻弧菌脂多糖對石斑魚免疫功能的影響[J];水生生物學(xué)報;2004年01期

2 葉劍敏,簡紀(jì)常,吳后波,吳灶和;溶藻弧菌脂多糖的化學(xué)成分分析及其對石斑魚的毒性[J];水生生物學(xué)報;2004年05期

3 陳寅兒,金珊,王國良;鱸魚溶藻弧菌病的血液生理生化指標(biāo)研究[J];臺灣海峽;2005年01期

4 鄢慶枇;陳強;鄒文政;馬u!;莊峙廈;王小如;;不同環(huán)境條件對溶藻弧菌粘附大黃魚腸粘液的影響[J];水產(chǎn)學(xué)報;2006年02期

5 陳強;鄢慶枇;馬u!;;溶藻弧菌致病性研究進展[J];海洋科學(xué);2006年08期

6 鄢慶枇;陳強;馬u!;莊峙廈;王小如;;病原性溶藻弧菌對大黃魚鰓黏液黏附作用研究[J];海洋學(xué)報(中文版);2007年06期

7 彭喜春;張寧;冉艷紅;桂博;陳龍;;海產(chǎn)品中溶藻弧菌的篩選及其致病因子的研究[J];現(xiàn)代食品科技;2008年04期

8 丁文超;胡健饒;史雨紅;李明云;陳炯;;環(huán)介導(dǎo)恒溫擴增技術(shù)快速檢測溶藻弧菌[J];分子細(xì)胞生物學(xué)報;2009年01期

9 徐先棟;謝珍玉;王世鋒;宣雄智;周永燦;;致病溶藻弧菌脂多糖對點帶石斑魚毒性和免疫原性的影響[J];海洋科學(xué);2010年03期

10 郝聚敏;李晶蕊;湯學(xué)敏;鄭江;黎中寶;鄢慶枇;;溶藻弧菌適配子親和力測定條件的優(yōu)化及其特異性研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年32期

相關(guān)會議論文 前10條

1 鄭江;湯學(xué)敏;;一種基于適配子的溶藻弧菌的應(yīng)用檢測技術(shù)[A];中國水產(chǎn)學(xué)會魚病專業(yè)委員會2013年學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2013年

2 鄢慶枇;陳強;鄒文政;郭國軍;;致病性溶藻弧菌對大黃魚黏液的黏附研究[A];2007年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會暨水產(chǎn)微生態(tài)調(diào)控技術(shù)論壇論文摘要匯編[C];2007年

3 羅鵬;蘇婷;胡超群;任春華;;溶藻弧菌的普通溶血現(xiàn)象及相關(guān)基因定位[A];2010年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2011年

4 鄔長祥;吳灶和;簡紀(jì)常;魯義善;;不同地區(qū)溶藻弧菌的分子分型及毒力基因的分布特征研究[A];漁業(yè)科技創(chuàng)新與發(fā)展方式轉(zhuǎn)變——2011年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2011年

5 梁海鷹;吳灶和;簡紀(jì)常;魯義善;蔡佳;;溶藻弧菌鞭毛蛋白雙基因融合表達載體的構(gòu)建[A];漁業(yè)科技創(chuàng)新與發(fā)展方式轉(zhuǎn)變——2011年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2011年

6 陳償;趙晶晶;劉助紅;龍云映;鄧益琴;;不同菌相溶藻弧菌的生理生化差異及其分子機制[A];中國水產(chǎn)學(xué)會魚病專業(yè)委員會2013年學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2013年

7 李正義;賈俊濤;曹際娟;徐彪;姜英輝;;一株分離自凍墨魚的溶藻弧菌的鑒定及其低溫下細(xì)胞脂肪酸的變化[A];第五屆全國微生物資源學(xué)術(shù)暨國家微生物資源平臺運行服務(wù)研討會論文摘要集[C];2013年

8 陳償;胡超群;張呂平;陳曉燕;沈琪;任春華;;海水養(yǎng)殖動物主要病原細(xì)菌—溶藻弧菌的分子生物學(xué)研究[A];甲殼動物學(xué)分會成立20周年暨劉瑞玉院士從事海洋科教工作55周年學(xué)術(shù)研討會論文（摘要）集[C];2002年

9 姚邵云;簡紀(jì)常;吳灶和;;溶藻弧菌主要外膜蛋白的純化及其免疫保護性研究[A];中國水產(chǎn)學(xué)會第五屆青年學(xué)術(shù)年會摘要集[C];2004年

10 王秀英;吳灶和;簡紀(jì)常;魯義善;;溶藻弧菌外膜蛋白W基因及克隆表達[A];2008年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前5條

1 錢榮華;溶藻弧菌主要毒力相關(guān)基因的克隆、表達及其免疫原性研究[D];浙江大學(xué);2007年

2 盛麗莉;病原細(xì)菌溶藻弧菌和銅綠假單胞菌中致病相關(guān)系統(tǒng)的調(diào)控機制[D];華東理工大學(xué);2012年

3 倫立民;文昌魚谷丙轉(zhuǎn)氨酶組織定位及在LPS和溶藻弧菌處理后急性炎癥相關(guān)因子的變化[D];中國海洋大學(xué);2008年

4 劉歡;溶藻弧菌群體感應(yīng)系統(tǒng)元件Hfq和LuxT的功能研究[D];華東理工大學(xué);2012年

5 孫星;養(yǎng)殖文蛤溶藻弧菌、頡頏菌的篩選與鑒定及其頡頏物質(zhì)的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張燕飛;溶藻弧菌雙組份調(diào)控系統(tǒng)KdpDE減毒活疫苗的構(gòu)建及其交叉免疫保護性研究[D];廣東海洋大學(xué);2015年

2 劉文竹;tssJ基因?qū)θ茉寤【\動性和生物膜形成的影響[D];海南大學(xué);2015年

3 賀紅紅;溶藻弧菌雙精氨酸蛋白轉(zhuǎn)運系統(tǒng)和六型分泌系統(tǒng)的研究[D];華東理工大學(xué);2011年

4 紀(jì)勇;用于溶藻弧菌快速檢測的免疫磁珠技術(shù)的研究[D];集美大學(xué);2011年

5 鄭玉琦;溶藻弧菌耐四種抗生素的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];廣東海洋大學(xué);2011年

6 鄔長祥;我國南方養(yǎng)殖海域溶藻弧菌的遺傳多樣性及部分毒力基因的分布特征研究[D];廣東海洋大學(xué);2012年

7 李宏;溶藻弧菌毒力菌株基因缺失突變株的構(gòu)建及表型初步分析[D];海南大學(xué);2013年

8 韓佳麗;溶藻弧菌毒力相關(guān)基因的檢測與保藏方法的研究[D];廣東海洋大學(xué);2011年

9 郭靜;溶藻弧菌相關(guān)分離株分子鑒定和生理生態(tài)特性研究[D];寧波大學(xué);2012年

10 于鴿;溶藻弧菌噬菌體、菌影疫苗及其對對蝦免疫保護性的比較研究[D];廣東海洋大學(xué);2011年

本文編號：2739356