【摘要】：大黃魚刺激隱核蟲病是刺激隱核蟲大量寄生于魚類體表、鰓絲等部位引起的魚類疾病。刺激隱核蟲沒有宿主特異性,且環(huán)境適應(yīng)性較強(qiáng),苗種與成魚均可被感染。該病的傳染速度極快,且具有非常高的發(fā)病率和死亡率,如果控制不及時,1~2 d內(nèi)即可造成全部養(yǎng)殖魚類死亡。本論文結(jié)合刺激隱核蟲生活史對其致病力進(jìn)行了研究,并對復(fù)方中草藥HD-2抑制刺激隱核蟲世代繁殖和阻斷感染的效果進(jìn)行驗證,檢測HD-2對大黃魚血清相關(guān)免疫酶的影響,同時研發(fā)一種緩釋型消毒劑。其研究結(jié)果如下:1、感染刺激隱核蟲的大黃魚體型規(guī)格與攜帶總數(shù)量呈正相關(guān)趨勢,但按照單位體重來分析,規(guī)格250 g、100 g、40 g的大黃魚產(chǎn)生包囊數(shù)量分別為8.12個/g、10.57個/g和5.89個/g;包囊直徑約340.79±64.91μm,孵化率為76.39%,每個包囊可產(chǎn)生280±42.25個幼蟲;幼蟲體外最長存活時間超過24 h,孵化30 min內(nèi)收集的幼蟲在收集后0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、16 h的感染率分別是91.61%、80.63%、57.27%、31.42%和9.50%;超過16 h的幼蟲未檢測到感染的個體。幼蟲感染大黃魚7天的LD_(90)為9 712幼蟲/魚,LD_(50)為4 366幼蟲/魚。感染實驗結(jié)果顯示,感染進(jìn)行5 min時,已有刺激隱核蟲幼蟲進(jìn)入鰓組織;10 min時,已經(jīng)有蟲體附著到鰓絲上;30 min時已有多個蟲體附著到鰓絲上,鰓絲出現(xiàn)輕微彎曲變形;感染1 h后,鰓絲組織彎曲變形嚴(yán)重,呈現(xiàn)波浪狀;4 h時鰓絲局部腫脹,嚴(yán)重彎曲變形,并伴有細(xì)胞脫落;12 h鰓絲腫脹,局部組織增生,形成團(tuán)狀;24 h時蟲體寄生部位鰓絲黏連腫脹,周圍組織增生,伴有細(xì)胞脫落;48 h時鰓絲組織增生嚴(yán)重,黏連在一起將蟲體包圍,局部鰓絲糜爛;感染72 h后,鰓組織損傷嚴(yán)重,鰓絲腫脹、增生、黏連,失去呼吸功能,刺激隱核蟲寄生處留下圓形空洞。2、復(fù)方中草藥HD-2對刺激隱核蟲幼蟲進(jìn)行體外殺滅實驗顯示,50 mg/L、80mg/L、100 mg/L、200 mg/L和400 mg/L濃度的中草藥藥液4 h內(nèi)分別可以殺死0、20%、60%、80%、100%的幼蟲。大黃魚分別投喂含復(fù)方中草藥HD-2 0 g/kg(對照)、5 g/kg(G1)、10 g/kg(G2)、15 g/kg(G3)的飼料30 d,投藥組G1、G2、G3的相對感染強(qiáng)度比對照組分別下降31.98%、44.53%、51.82%;在LD_(90)攻毒后,存活率分別達(dá)到40.00%、55.00%和58.33%,對比對照組存活率8.33%顯著提高,且鰓絲、胸鰭上滋養(yǎng)體數(shù)量較對照組顯著下降。LD_(50)攻毒后,G1、G2、G3組收集得到的包囊較少,包囊直徑較對照組顯著變短,包囊體積對比對照組分別減少35.43%、36.14%和37.26%,孵化率下降16.28%、23.26%和27.91%。HD-2治療患病大黃魚實驗第15 d時,投藥組大黃魚掉落包囊數(shù)量分別比對照組下降73.12%、87.7%、93.78%,魚死亡率分別為58.33%、36.67%和21.67%,較對照組83.33%的死亡率明顯降低。投藥組大黃魚鰓絲上白點大大減少且肉眼難以觀察,而對照組剩余存活的大黃魚鰓絲、胸鰭上有大量蟲體寄生,處于瀕死狀態(tài)。3、本文通過對大黃魚進(jìn)行口服復(fù)方中草藥HD-2,研究其對血清相關(guān)免疫指標(biāo)的影響。結(jié)果表明,隨著投喂時間的延長各投藥組溶菌酶(LZM)活性會出現(xiàn)先升高后下降的趨勢,在第21 d取樣時達(dá)到最高值,10 g/kg和15 g/kg組效果最好;添加不同劑量中草藥均可以顯著提高血清超氧化物歧化酶(SOD)活性(p0.05),在21 d達(dá)到最高值,28 d取樣時5 g/kg組、10 g/kg組活性出現(xiàn)下降,15 g/kg組活性維持較高水平;大黃魚血清堿性/酸性磷酸酶(AKP/ACP)活性也均呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢,在第21 d取樣時AKP和ACP活性分別達(dá)到最高值,15 g/kg組的AKP和ACP活性在各取樣點測得的數(shù)據(jù)始終高于其他各組;血清補(bǔ)體C3、C4含量在14 d后對比對照組出現(xiàn)顯著升高趨勢,21 d血清補(bǔ)體C3含量達(dá)到最高值,28 d血清補(bǔ)體C4含量達(dá)到最高值,且均來自10 g/kg組,但28 d時15 g/kg組與10 g/kg組差異不顯著(p0.05);不同投喂劑量對大黃魚血清中免疫球蛋白M(IgM)的含量均無明顯影響;大黃魚血清中過氧化氫酶(CAT)、一氧化氮合酶(NOS)的活性均出現(xiàn)顯著升高趨勢,第28 d,各組CAT、NOS活性均達(dá)到最高值,其中15 g/kg組效果最好。4、生石灰與沸石粉比例為1:1和1:2兩組在前4天可以保持水中細(xì)菌濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于初始值,5至7天能抑制細(xì)菌生長保持相對較低水平,具有較好的緩釋效果。一定濃度的生石灰可以有效殺滅刺激隱核蟲幼蟲和包囊,80 mg/L生石灰10 min,20 mg/L、40 mg/L生石灰120 min即可殺死全部幼蟲,200 mg/L生石灰處理1 h即可殺滅全部包囊,150 mg/L生石灰處理2 h、100 mg/L生石灰處理4 h也可完全殺死全部包囊。掛袋實驗顯示生石灰與沸石粉組成的混合緩釋劑可在一定時間內(nèi)減少網(wǎng)箱網(wǎng)衣上細(xì)菌數(shù)量,減少大黃魚鰓絲及胸鰭上刺激隱核蟲的寄生,減少大黃魚死亡數(shù)量,一定程度地緩解刺激隱核蟲病病情。
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S943
【圖文】：

并將其定名為刺激隱核蟲(Cryptocaryon irritans)。因刺激隱核蟲在等諸多方面與淡水物種多子小瓜蟲極度相似，所以早期的文獻(xiàn)資料中為“海水小瓜蟲”或“海水白點蟲”，并與多子小瓜蟲(Ichthyophthis)一同歸類于寡毛綱(Oligohymenophorea)膜口目(Hymenostomatide)。ight[16]和 Colorni[17]應(yīng)用分子生物學(xué)方法對刺激隱核蟲 18S rRNA 全長統(tǒng)發(fā)育樹發(fā)現(xiàn)，其與多子小瓜蟲具有較遠(yuǎn)的親緣關(guān)系，建議將其劃分的隱核蟲屬；李安興等[18]通過觀察卵圓鯧湽(Trachinotus ovatus)體表寄核蟲的超微結(jié)構(gòu)，也發(fā)現(xiàn)其更適合劃分到前口綱�，F(xiàn)在學(xué)術(shù)界普遍將 歸 屬 于 前 口 綱 (Prostomatea) ， 前 管 目 (Prorodontida) ， 隱 核 蟲caryonidae)、隱核蟲屬(Cryptocaryon)。激隱核蟲生活史激隱核蟲的生活史無需中間宿主[19-21]，整個生活史經(jīng)歷了 4 個蟲體變-1)，分別為：滋養(yǎng)體(trophont)、包囊前體(protomont)、包囊(tomont)和)[17]，其中滋養(yǎng)體為寄生生活階段，其他 3 階段營自由生活。

相關(guān)性分析表明，在成功孵化的樣本中，包囊直徑的長短與孵化幼蟲數(shù)量呈現(xiàn)正相關(guān)，包囊直徑越長，孵化幼蟲數(shù)量越多；單個包囊孵化幼蟲數(shù)量最多達(dá) 343個，最少則為178個，平均每個包囊可以產(chǎn)出280±42.45個刺激隱核蟲幼蟲(圖2-1)。表 2-2 包囊大小及孵化幼蟲數(shù)量統(tǒng)計表Tab. 2-2 Calculation for the size of tomont and the number of hatched theronts編號No.包囊大小(μm)Tomonts size幼蟲數(shù)(個)Theronts No.編號No.包囊大小(μm)Tomonts size幼蟲數(shù)(個)Theronts No.1 198.56 死亡 37 342.13 2962 201.22 死亡 38 343.17 2723 202.36 死亡 39 344.85 2784 220.36 死亡 40 350.93 2925 223.58 死亡 41 352.26 268

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉婷婷;唐小千;周麗;;15種中草藥對刺激隱核蟲(Cryptocaryon irritans)的殺滅效果及包囊破裂的條件[J];漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展;2015年06期

2 許斌福;程海華;池洪樹;方冬蘭;柯巧珍;韓坤煌;王凡;龔暉;;大黃魚內(nèi)臟白點病的病原分析與鑒定[J];福建農(nóng)業(yè)學(xué)報;2015年07期

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本文編號：2729267