發(fā)布時間：2020-06-18 18:09

【摘要】：近些年來,東南亞的養(yǎng)殖場對蝦生長緩慢的現(xiàn)象被越來越多的報道出來。在這些生長較為緩慢的對蝦肝胰腺中檢測到了蝦肝腸胞蟲(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)陽性。目前認(rèn)為EHP是影響對蝦生長緩慢的最主要的病原,成為對蝦養(yǎng)殖的最大威脅之一,嚴(yán)重影響了對蝦養(yǎng)殖業(yè)的產(chǎn)量增長,造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本研究通過流行病學(xué)調(diào)查,不同組織EHP載量與對蝦生長參數(shù)分析,血淋巴ATP含量測定、蛋白質(zhì)濃度測定,原位雜交等技術(shù)手段,旨在了解EHP的流行情況及在對蝦體內(nèi)的分布情況,探索EHP導(dǎo)致凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)生長停滯或緩慢的機(jī)制。對來自河北黃驊(HH)、山東平度(PD)、江蘇吳江(WJ)和山東日照(RZ)的4個凡納濱對蝦群體進(jìn)行了對蝦生長參數(shù)測量,用Taq Man q PCR檢測了各群體對蝦的肝胰腺組織中和RZ群體對蝦的多種組織中的EHP感染載量。結(jié)果表明,在主要生長相關(guān)參數(shù)上RZ群體最優(yōu),該群體EHP量也最低。不同群體的樣本數(shù)-EHP對數(shù)直方圖的模式存在差異,HH和PD群體的EHP對數(shù)呈雙峰分布,而WJ和RZ群體的EHP對數(shù)呈單峰分布,代表EHP在不同群體中可能存在不同的傳播模式。EHP對數(shù)呈單峰分布的群體或從多峰分布的群體中分離出的高EHP對數(shù)子群體的對蝦體長或體重與EHP對數(shù)呈顯著的負(fù)相關(guān)性。在群體水平上EHP顯著增加體重指數(shù)的變異系數(shù)。為進(jìn)一步了解凡納濱對蝦EHP陽性個體中,EHP的分布情況,對來自山東日照的一批凡納濱對蝦共48尾,解剖對蝦后分別對肝胰腺、腸道、肌肉、血淋巴和鰓五種組織進(jìn)行了EHP的Taqman實時熒光定量檢測,檢測結(jié)果顯示群體中各個體不同組織中EHP從高到低的順序依次是肝胰腺中腸血淋巴鰓肌肉。肝胰腺、中腸和鰓三個組織中EHP對數(shù)相互間的相關(guān)性呈99.9%的極顯著水平(P0.001);除了中腸與血淋巴和肝胰腺與血淋巴以外,其余組織間EHP對數(shù)的相關(guān)性也達(dá)到極顯著(P0.01)或顯著(P0.05)水平。在腸道和鰓組織中EHP拷貝數(shù)對數(shù)與對蝦體重指數(shù)(Ponderal index,Pi)有一定的負(fù)相關(guān)性,并且肌肉中EHP平均載量最低。通過對血淋巴和肌肉組織進(jìn)行蛋白質(zhì)含量、血淋巴ATP含量的測定,及與EHP載量和對蝦生長參數(shù)的相關(guān)性的分析,可見肌肉蛋白含量與血淋巴、肌肉EHP載量對數(shù)達(dá)到95%的負(fù)相關(guān)水平。血淋巴中的ATP濃度與血淋巴中和肝胰腺中的EHP載量均呈現(xiàn)出顯著的負(fù)相關(guān)性,與5種組織EHP載量之和對數(shù)達(dá)到99.5%的負(fù)相關(guān)性水平。經(jīng)過Sigma Plot 12.0回歸分析,得到血淋巴ATP含量與所有組織中EHP載量之和對數(shù)的關(guān)系式為:ATP濃度=-(0.060±0.019)Log(EHP載量)+(2.326±0.238)。證明EHP的確通過截取宿主的ATP而影響對蝦的生長的機(jī)制,并從一定程度上影響了對蝦肌肉蛋白的積累。為尋找EHP在對蝦體內(nèi)分布的直接證據(jù),依據(jù)Gen Bank中公布的EHP SSU r DNA序列(KF362129),設(shè)計了一對原位雜交探針的PCR擴(kuò)增引物,用DIG標(biāo)記的EHP探針對肝胰腺、肌肉、鰓、腸道組織的原位雜交顯示,肝胰腺是主要的EHP感染組織,其他組織中雜交信號較弱,但各組織中有少數(shù)細(xì)胞的EHP感染。本研究通過q PCR獲得了EHP在凡納濱對蝦不同群體和不同組織中感染量的準(zhǔn)確數(shù)據(jù),觀察到群體中不同個體的EHP感染發(fā)生在較接近的時間點時,其EHP載量與對蝦的生長參數(shù)呈顯著的負(fù)相關(guān)性,群體內(nèi)的EHP感染會顯著增加體重指數(shù)的變異系數(shù);EHP能在多組織中檢出,肝胰腺和中腸中分布最多,原位雜交顯示EHP在其他組織中的存在是因為在其他組織中存在一定水平的感染的原因。同時,證明了EHP的確可以通過截取宿主的ATP而影響對蝦的生長的機(jī)制,影響了對蝦肌肉蛋白的積累。通過本研究闡明了EHP在對蝦群體和體內(nèi)的感染和分布情況,為該病的診斷和預(yù)防研究提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S945.49

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本文編號：2719638