【摘要】：牡蠣皰疹病毒1型(OSHV-1)屬軟體動(dòng)物皰疹病毒科(Malacoherpesviridae)、牡蠣皰疹病毒屬(Ostreavirus),是一種雙鏈DNA病毒,在世界范圍內(nèi)廣泛流行,一直以來都是制約我國(guó)貝類養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的主要傳染性病原之一。近幾年,牡蠣皰疹病毒病頻頻爆發(fā),導(dǎo)致貝類生長(zhǎng)受阻和高死亡率,給我國(guó)貝類養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前人們常用的牡蠣皰疹病毒檢測(cè)方法就是設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,但是最近幾年不同變異株的出現(xiàn),以前的檢測(cè)方法存在一定的局限性,本試驗(yàn)對(duì)比NCBI不同變異株的序列,選取C區(qū)保守區(qū)域,使用巢式PCR檢測(cè)方法。設(shè)置7個(gè)依次十倍遞減的不同的濃度梯度的病毒DNA,檢測(cè)其靈敏性,此方法靈敏度比普通PCR高,特異性良好。用巢式PCR檢測(cè)方法對(duì)山東七個(gè)沿海地區(qū)主要養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)貝類(毛蚶、魁蚶、扇貝、牡蠣、菲律賓蛤仔、文蛤、貽貝等)及野生經(jīng)濟(jì)貝類(扁玉螺、四角蛤、蟶子等)進(jìn)行檢測(cè),根據(jù)檢測(cè)結(jié)果總結(jié)出2017-2018年間山東省主要經(jīng)濟(jì)貝類的牡蠣皰疹病毒1型病爆發(fā)的流行病學(xué)規(guī)律,建立OsHV-1的預(yù)警機(jī)制。2017年在山東不同地區(qū)共采集了340份樣品,其中陽(yáng)性樣品39份,陽(yáng)性總檢出率11.5%,陽(yáng)性檢出存在地域性,東營(yíng)地區(qū)檢出率最高,為33.3%;不同種類中,四角蛤的陽(yáng)性檢出率最高,約為44%。2018年在山東沿海不同地區(qū)共采集了503份樣品,其中陽(yáng)性樣品79份,陽(yáng)性總檢出率為15.7%;青島樣本的陽(yáng)性檢出率最高,達(dá)到68%。共檢測(cè)了十個(gè)不同品種,不同品種的陽(yáng)性檢出率結(jié)果顯示,扁玉螺陽(yáng)性檢出率最高,為40%,脈紅螺的陽(yáng)性檢出率為33.3%,毛蚶的陽(yáng)性檢出率為26.3%,菲律賓蛤仔的陽(yáng)性檢出率為23%,扇貝的陽(yáng)性檢出率為11%,貽貝的陽(yáng)性檢出率為6.7%,四角蛤的陽(yáng)性檢出率為6.3%,牡蠣的陽(yáng)性檢出率為5%,斑紋蛤和蟶子中未發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性樣本。牡蠣皰疹病毒不僅感染雙殼貝類,對(duì)一些腹足綱貝類也有很大的感染性,宿主范圍存在擴(kuò)大的現(xiàn)象;對(duì)水質(zhì)進(jìn)行了pH、氨氮、亞硝酸鹽的檢測(cè),養(yǎng)殖水體的環(huán)境基本正常。對(duì)羊口采集的病料進(jìn)行變異區(qū)C區(qū)(ORF4/5)的測(cè)序分析,對(duì)比NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)與不同變異株進(jìn)行比對(duì),繪制進(jìn)化樹,得出羊口死亡毛蚶分離株與中國(guó)發(fā)現(xiàn)的魁蚶株親緣關(guān)系最近,通過動(dòng)物感染試驗(yàn),臨床癥狀表現(xiàn)為:閉殼肌無力,行動(dòng)遲緩,對(duì)外界刺激反應(yīng)緩慢,攝食量少或者基本不進(jìn)食,經(jīng)PCR檢測(cè)及測(cè)序后確診為牡蠣皰疹病毒,確定了毛蚶是一種新的宿主,通過感染試驗(yàn)證明了該分離株存在水平傳播,且在感染試驗(yàn)第6天,毛蚶幼貝開始出現(xiàn)死亡,第12天毛蚶幼貝全部死亡;羊口分離株不僅對(duì)于毛蚶存在感染性,對(duì)菲律賓蛤仔和扇貝也存在感染性,證明了該種病毒的不同物種的致病性。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S944.121
【圖文】：

調(diào)節(jié)為 20℃，1、2、3 號(hào)缸注射羊口分離株病毒試驗(yàn)組注射前先用 MgCl2（20g/L,W/V）進(jìn)行麻醉完在避光陰涼處放置兩個(gè)小時(shí)，再放入培養(yǎng)缸中喂，觀測(cè)毛蚶的死亡率，并檢測(cè)。 粒毛蚶幼貝，水溫 20℃，提前充氧，放入一只攻 粒扇貝幼貝，水溫 20℃，提前充氧，放入一只攻 粒菲律賓蛤仔幼貝，水溫 20℃，提前充氧，放入個(gè)平行試驗(yàn)，觀測(cè)結(jié)果。測(cè)方法結(jié)果

圖 2 特異性檢測(cè)圖Fig. 2 specific detection mapM:DNAMarker, 泳道 1：患病組織 DNA, 泳道 2：牡蠣皰疹病毒泳道 3：副溶血弧菌泳道，4：派琴蟲，泳道 5：陰性對(duì)照。增，只有患病組織 DNA 和 OsHV-1 有目的條帶以證明該巢式 PCR 檢測(cè)方法有良好的特異性。

【參考文獻(xiàn)】

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1 趙小金;張盛靜;白昌明;岳志芹;王崇明;尹偉力;蔡生力;黃P";;牡蠣皰疹病毒魁蚶株交叉引物等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用[J];水產(chǎn)學(xué)報(bào);2015年04期

2 張奇亞;桂建芳;;水產(chǎn)動(dòng)物的病毒基因組及其病毒與宿主的相互作用[J];中國(guó)科學(xué):生命科學(xué);2014年12期

3 ;水科院黃海所“斑點(diǎn)叉尾洶病毒現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法”獲國(guó)家發(fā)明專利授權(quán)[J];福建農(nóng)業(yè)科技;2014年04期

4 洪徐鵬;;鮭皰疹病毒病的防治[J];科學(xué)養(yǎng)魚;2013年03期

5 王樹云;陳孝煊;王敏;周金敏;于艷梅;岳剛毅;李莉娟;;斑點(diǎn)叉尾洶病毒囊膜蛋白基因ORF6和ORF10的原核表達(dá)及抗體制備[J];華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2010年06期

6 曾令兵;徐進(jìn);李艷秋;王瑤;肖藝;范玉頂;周勇;;斑點(diǎn)叉尾洶出血病病原呼腸孤病毒的分離與鑒定[J];病毒學(xué)報(bào);2009年06期

7 楊凡;袁萬安;;斑點(diǎn)叉尾洶病毒宿主研究[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2009年11期

8 彭德姣;丁德明;;斑點(diǎn)叉尾洶出血病病毒疫苗的研究[J];河北漁業(yè);2008年06期

9 陳昌福,孟長(zhǎng)明;斑點(diǎn)叉尾洶的主要疾病與防治對(duì)策[J];漁業(yè)致富指南;2005年11期

10 姜述德;;動(dòng)物病毒學(xué)中的蝕斑技術(shù)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).生物制品分冊(cè);1981年02期

本文編號(hào)：2719598