【摘要】：VEGF信號通路在誘導(dǎo)高等動物內(nèi)皮細胞增殖、促進血管生成、抑制細胞凋亡及病毒與宿主互作等過程中發(fā)揮著重要作用。在前期研究中我們發(fā)現(xiàn)對蝦VEGF信號通路中的許多基因在白斑綜合征病毒(WSSV)感染后其轉(zhuǎn)錄表達水平發(fā)生明顯的變化,但是對于對蝦VEGF信號通路在WSSV感染過程中的作用尚不清楚。本論文對對蝦VEGF信號通路在WSSV感染過程中的功能進行了系統(tǒng)地研究,研究結(jié)果不僅可豐富對蝦先天免疫系統(tǒng)基礎(chǔ)理論,也可為對蝦的病害防治提供新的思路。論文主要的研究進展如下:1.克隆了凡納濱對蝦5個血管內(nèi)皮生長因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)基因的cDNAs全長序列,分別命名為LvVEGF1-LvVEGF5,其推導(dǎo)的氨基酸序列中均具含有VEGF家族共有的PDGF/VEGF結(jié)構(gòu)域及半胱氨酸重復(fù)基序(CXCXCX)。這5種VEGFs基因呈現(xiàn)出不同的組織表達模式:LvVEGF1主要在淋巴器官(Oka)中表達,LvVEGF2主要分布在血細胞及鰓中,LvVEGF3主要分布在血細胞,LvVEGF4主要在鰓和血細胞中表達,LvVEGF5在血細胞和腸中呈現(xiàn)高表達。在WSSV感染后,這5種VEGFs基因的轉(zhuǎn)錄表達水平均明顯上調(diào)。當(dāng)用雙鏈RNA分別對對蝦的LvVEGF1-LvVEGF5基因進行敲降后再用WSSV感染對蝦時,發(fā)現(xiàn)由WSSV感染引起的對蝦死亡率明顯降低,說明它們在WSSV感染對蝦的過程中起著重要作用。2.克隆了凡納濱對蝦兩個VEGF受體(VEGFR)基因的cDNA全長序列,分別命名為LvVEGFR1和LvVEGFR2。LvVEGFR1和LvVEGFR2推導(dǎo)的氨基酸序列中均具有VEGFR家族典型的免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域(IG-like)及蛋白激酶結(jié)構(gòu)域(PK)。兩種受體的組織表達具有明顯差異:LvVEGFR1主要分布在血細胞和腸中,LvVEGFR2主要分布在血細胞和Oka中。在WSSV感染后,對蝦中LvVEGFR1和LvVEGFR2的轉(zhuǎn)錄表達水平均發(fā)生顯著上調(diào)。用雙鏈RNA對兩種VEGFRs基因分別進行干擾后再對對蝦進行WSSV感染,發(fā)現(xiàn)由WSSV感染引起的對蝦死亡率顯著降低,說明對蝦VEGFRs在WSSV感染過程中起著重要作用。3.從轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平研究了對蝦VEGFs和VEGFRs之間的關(guān)系。當(dāng)LvVEGF1、LvVEGF3、LvVEGF5被dsRNA敲降后,對蝦體內(nèi)LvVEGFR1基因的表達量出現(xiàn)下調(diào);當(dāng)LvVEGF2、LvVEGF3、LvVEGF5被dsRNA敲降后,LvVEGFR2基因的表達量顯著下調(diào)。注射重組的LvVEGF3蛋白能夠引起LvVEGFR1基因的表達上調(diào),注射重組的LvVEGF1、Lv VEGF2、LvVEGF3蛋白均能夠引起LvVEGFR2基因的表達量上調(diào)。通過酵母雙雜交實驗進一步驗證了VEGFs和VEGFRs之間的相互作用,結(jié)果顯示,LvVEGF1、LvVEGF2、LvVEGF3、LvVEGF4及LvVEGF5均與LvVEGFR1存在相互作用,LvVEGF2、LvVEGF3能夠與LvVEGFR2發(fā)生相互作用。由此推斷,對蝦VEGFs通過與VEGFRs的結(jié)合參與了WSSV感染對蝦的過程。4.利用RNA干擾技術(shù)對VEGFs或VEGFRs進行敲降后分析了VEGF信號通路下游基因的表達,結(jié)果表明,不同VEGFs和VEGFRs基因被dsRNA干擾敲降后,均引起LvFAK、LvPI3K表達水平的降低,說明VEGF或VEGFR在調(diào)節(jié)信號通路下游基因表達中起著重要作用�；谝陨涎芯拷Y(jié)果,我們勾勒出對蝦VEGF信號通路參與到WSSV感染過程中的作用模式,闡明了對蝦VEGF信號通路在WSSV感染過程中的功能。
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圖 1.1 對蝦和果蠅的 Toll 信號通路(Li and Xiang, 2013). 1.1 Toll signaling pathway of shrimp and Drosophila(Li and Xiang, 2號通路通路是介導(dǎo)果蠅對革蘭氏陰性細菌（G+）應(yīng)答的免疫信號結(jié)構(gòu)域和一個死亡結(jié)構(gòu)域（DD），，N 端結(jié)構(gòu)域與肽聚糖胞漿端的結(jié)構(gòu)域相互作用，死亡結(jié)構(gòu)域則能夠招募下游的s

本文編號：2711599