發(fā)布時(shí)間：2020-06-13 19:01

【摘要】：VEGF信號(hào)通路在誘導(dǎo)高等動(dòng)物內(nèi)皮細(xì)胞增殖、促進(jìn)血管生成、抑制細(xì)胞凋亡及病毒與宿主互作等過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。在前期研究中我們發(fā)現(xiàn)對(duì)蝦VEGF信號(hào)通路中的許多基因在白斑綜合征病毒(WSSV)感染后其轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平發(fā)生明顯的變化,但是對(duì)于對(duì)蝦VEGF信號(hào)通路在WSSV感染過(guò)程中的作用尚不清楚。本論文對(duì)對(duì)蝦VEGF信號(hào)通路在WSSV感染過(guò)程中的功能進(jìn)行了系統(tǒng)地研究,研究結(jié)果不僅可豐富對(duì)蝦先天免疫系統(tǒng)基礎(chǔ)理論,也可為對(duì)蝦的病害防治提供新的思路。論文主要的研究進(jìn)展如下:1.克隆了凡納濱對(duì)蝦5個(gè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)基因的cDNAs全長(zhǎng)序列,分別命名為L(zhǎng)vVEGF1-LvVEGF5,其推導(dǎo)的氨基酸序列中均具含有VEGF家族共有的PDGF/VEGF結(jié)構(gòu)域及半胱氨酸重復(fù)基序(CXCXCX)。這5種VEGFs基因呈現(xiàn)出不同的組織表達(dá)模式:LvVEGF1主要在淋巴器官(Oka)中表達(dá),LvVEGF2主要分布在血細(xì)胞及鰓中,LvVEGF3主要分布在血細(xì)胞,LvVEGF4主要在鰓和血細(xì)胞中表達(dá),LvVEGF5在血細(xì)胞和腸中呈現(xiàn)高表達(dá)。在WSSV感染后,這5種VEGFs基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平均明顯上調(diào)。當(dāng)用雙鏈RNA分別對(duì)對(duì)蝦的LvVEGF1-LvVEGF5基因進(jìn)行敲降后再用WSSV感染對(duì)蝦時(shí),發(fā)現(xiàn)由WSSV感染引起的對(duì)蝦死亡率明顯降低,說(shuō)明它們?cè)赪SSV感染對(duì)蝦的過(guò)程中起著重要作用。2.克隆了凡納濱對(duì)蝦兩個(gè)VEGF受體(VEGFR)基因的cDNA全長(zhǎng)序列,分別命名為L(zhǎng)vVEGFR1和LvVEGFR2。LvVEGFR1和LvVEGFR2推導(dǎo)的氨基酸序列中均具有VEGFR家族典型的免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域(IG-like)及蛋白激酶結(jié)構(gòu)域(PK)。兩種受體的組織表達(dá)具有明顯差異:LvVEGFR1主要分布在血細(xì)胞和腸中,LvVEGFR2主要分布在血細(xì)胞和Oka中。在WSSV感染后,對(duì)蝦中LvVEGFR1和LvVEGFR2的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平均發(fā)生顯著上調(diào)。用雙鏈RNA對(duì)兩種VEGFRs基因分別進(jìn)行干擾后再對(duì)對(duì)蝦進(jìn)行WSSV感染,發(fā)現(xiàn)由WSSV感染引起的對(duì)蝦死亡率顯著降低,說(shuō)明對(duì)蝦VEGFRs在WSSV感染過(guò)程中起著重要作用。3.從轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平研究了對(duì)蝦VEGFs和VEGFRs之間的關(guān)系。當(dāng)LvVEGF1、LvVEGF3、LvVEGF5被dsRNA敲降后,對(duì)蝦體內(nèi)LvVEGFR1基因的表達(dá)量出現(xiàn)下調(diào);當(dāng)LvVEGF2、LvVEGF3、LvVEGF5被dsRNA敲降后,LvVEGFR2基因的表達(dá)量顯著下調(diào)。注射重組的LvVEGF3蛋白能夠引起LvVEGFR1基因的表達(dá)上調(diào),注射重組的LvVEGF1、Lv VEGF2、LvVEGF3蛋白均能夠引起LvVEGFR2基因的表達(dá)量上調(diào)。通過(guò)酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了VEGFs和VEGFRs之間的相互作用,結(jié)果顯示,LvVEGF1、LvVEGF2、LvVEGF3、LvVEGF4及LvVEGF5均與LvVEGFR1存在相互作用,LvVEGF2、LvVEGF3能夠與LvVEGFR2發(fā)生相互作用。由此推斷,對(duì)蝦VEGFs通過(guò)與VEGFRs的結(jié)合參與了WSSV感染對(duì)蝦的過(guò)程。4.利用RNA干擾技術(shù)對(duì)VEGFs或VEGFRs進(jìn)行敲降后分析了VEGF信號(hào)通路下游基因的表達(dá),結(jié)果表明,不同VEGFs和VEGFRs基因被dsRNA干擾敲降后,均引起LvFAK、LvPI3K表達(dá)水平的降低,說(shuō)明VEGF或VEGFR在調(diào)節(jié)信號(hào)通路下游基因表達(dá)中起著重要作用�；谝陨涎芯拷Y(jié)果,我們勾勒出對(duì)蝦VEGF信號(hào)通路參與到WSSV感染過(guò)程中的作用模式,闡明了對(duì)蝦VEGF信號(hào)通路在WSSV感染過(guò)程中的功能。
【圖文】：

圖 1.1 對(duì)蝦和果蠅的 Toll 信號(hào)通路(Li and Xiang, 2013). 1.1 Toll signaling pathway of shrimp and Drosophila(Li and Xiang, 2號(hào)通路通路是介導(dǎo)果蠅對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌（G+）應(yīng)答的免疫信號(hào)結(jié)構(gòu)域和一個(gè)死亡結(jié)構(gòu)域（DD），，N 端結(jié)構(gòu)域與肽聚糖胞漿端的結(jié)構(gòu)域相互作用，死亡結(jié)構(gòu)域則能夠招募下游的s

本文編號(hào)：2711599