發(fā)布時(shí)間：2020-06-13 21:23

【摘要】：為研究?jī)?nèi)分泌干擾物對(duì)魚類下丘腦—垂體—性腺軸的影響,本研究首先用DES(0.1、1和10μg/L,暴露20d)對(duì)內(nèi)分泌干擾研究的經(jīng)典模式動(dòng)物——斑馬魚(Danio rerio)雄性成魚進(jìn)行處理。組織學(xué)研究結(jié)果表明,DES能嚴(yán)重影響斑馬魚精子發(fā)生。同時(shí),本研究克隆了斑馬魚與生殖細(xì)胞發(fā)育和減數(shù)分裂相關(guān)的vasa、dmc1的部分c DNA,對(duì)其組織和細(xì)胞表達(dá)模式進(jìn)行了研究。結(jié)果表明,vasa僅表達(dá)于精巢的精原細(xì)胞、初級(jí)精母細(xì)胞和卵巢不同時(shí)期的生殖細(xì)胞;而dmc1則表達(dá)于精巢精母細(xì)胞和卵巢卵母細(xì)胞發(fā)育早期。半定量PCR結(jié)果表明,DES處理后vasa的表達(dá)沒(méi)有明顯變化;而dmc1的表達(dá)則被明顯抑制,且呈時(shí)間依賴性和劑量依賴性效應(yīng);轉(zhuǎn)錄因子dmrt1和雄激素合成關(guān)鍵酶基因P450 11β的表達(dá)也被顯著抑制,而雌激素合成酶關(guān)鍵基因cyp19a的表達(dá)上調(diào)。因此推測(cè),DES可能通過(guò)抑制dmc1的表達(dá)阻礙了減數(shù)分裂;并通過(guò)抑制dmrt1的表達(dá)誘導(dǎo)了斑馬魚生殖細(xì)胞凋亡,而P450 11β的表達(dá)下調(diào)可能是間接原因。隨后,為研究乙炔基雌二醇(EE2)是否能影響雄性黃顙魚(Pelteobagrus fulvidraco)垂體中促性腺激素3個(gè)亞基基因的表達(dá),從而干擾FSH和LH的分泌,采用末端快速擴(kuò)增(RACE)的方法在黃顙魚垂體中克隆了促性腺激素的2個(gè)β亞基(FSHβ和LHβ)的全長(zhǎng)c DNA,對(duì)其組織表達(dá)模式和雌雄性垂體中的季節(jié)表達(dá)模式進(jìn)行了研究;另外,用100 ng/L的EE2對(duì)雄性黃顙魚(2齡)進(jìn)行了28天的暴露處理。結(jié)果發(fā)現(xiàn),黃顙魚FSHβc DNA全長(zhǎng)528 bp,ORF為399 bp,編碼132個(gè)氨基酸;LHβ全長(zhǎng)為870 bp,ORF為417 bp,編碼138個(gè)氨基酸。序列分析結(jié)果表明,黃顙魚FSHβ含有一個(gè)17氨基酸的信號(hào)肽,2個(gè)保守的N—糖基化位點(diǎn)和13個(gè)半胱氨酸殘基,而LHβ含有一個(gè)18個(gè)氨基酸的信號(hào)肽,1個(gè)N—糖基化位點(diǎn)和12個(gè)半胱氨酸殘基。進(jìn)化分析顯示,黃顙魚FSHβ和LHβ與鯰形目的魚類進(jìn)化關(guān)系較近。組織分布結(jié)果發(fā)現(xiàn),黃顙魚3亞基均僅在垂體中表達(dá)。季節(jié)表達(dá)模式結(jié)果表明,雌雄黃顙魚Gt Hα和LHβ表達(dá)水平在5月份左右達(dá)到最高,隨后降低;FSHβ在雌性的表達(dá)模式與Gt Hα和LHβ相同,而在雄性,FSHβ的表達(dá)沒(méi)有明顯變化。半定量RT-PCR結(jié)果顯示,100 ng/L的EE2能顯著抑制黃顙魚促性腺激素3個(gè)亞基基因的表達(dá)。因此,我們認(rèn)為,EE2可能通過(guò)抑制黃顙魚雄性垂體FSHβ和LHβ的表達(dá),阻礙其正常的精子發(fā)生、精子成熟和排精過(guò)程,從而影響其正常的繁殖和發(fā)育。
【圖文】：

m/v, 0.8mol/L）：2g IPTG 加入 8ml 蒸餾水溶解，，加水 0.22 μm 過(guò)濾器過(guò)濾除菌，貯存于—20 °C。粒和菌株 pMD19-T 的物理圖譜如圖 1.2，DH5α 感受態(tài)細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)所用菌

S 處理 6d 對(duì)斑馬魚精巢發(fā)育和精子發(fā)生的影響。A. 對(duì)照組；B-D. DES 處理μg/L）。標(biāo)尺：50 μm。fluences of DES on testicular development and spermatogenesis of zebrafish. AS (0.1, 1 and 10 μg/L). Scale bar, 50 μm.織學(xué)研究結(jié)果表明，DES 處理斑馬魚 6 天后，0.1、1 和 10 μg/L 各無(wú)明顯變化，和對(duì)照組相似，精巢生精小管數(shù)量眾多，內(nèi)有不同發(fā)小囊，囊內(nèi)的生殖細(xì)胞處于同一發(fā)育時(shí)期，而相鄰小囊內(nèi)的生殖細(xì)育階段（圖 2A、B、C、D）。
【學(xué)位授予單位】：重慶師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S917.4

【參考文獻(xiàn)】

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1 朱敏;DES和EE2對(duì)黃顙魚性腺發(fā)育和配子發(fā)生的影響[D];重慶師范大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2711763