【摘要】：脊尾白蝦具有繁殖季節(jié)長(zhǎng)、生長(zhǎng)速度快、環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn)。近年來(lái)隨著海水養(yǎng)殖向低鹽度區(qū)域的發(fā)展,脊尾白蝦的養(yǎng)殖產(chǎn)量也迅速增加,常與其他海產(chǎn)經(jīng)濟(jì)種類(lèi)混合養(yǎng)殖。為研究脊尾白蝦在繁殖過(guò)程中的調(diào)控機(jī)理,本文首次克隆了FAMe T基因,并測(cè)定了在連續(xù)三次卵巢發(fā)育過(guò)程中FAMe T基因在脊尾白蝦中的表達(dá)。同時(shí)對(duì)中國(guó)對(duì)蝦與脊尾白蝦在連續(xù)三次繁殖中卵黃蛋白原基因的表達(dá)情況與卵巢發(fā)育的組織切片進(jìn)行綜合分析,闡述了中國(guó)對(duì)蝦與脊尾白蝦繁殖的區(qū)別。具體研究結(jié)果如下:1.脊尾白蝦FAMe T基因克隆為了研究法尼酸甲基轉(zhuǎn)移酶(FAMe T)在對(duì)脊尾白蝦卵巢發(fā)育中作用,采用反轉(zhuǎn)錄PCR和c DNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)(RACE)克隆得到了脊尾白蝦FAMe T的全長(zhǎng)c DNA序列(Gen Bank登錄號(hào):AHB23861),它包括一個(gè)76bp的5’非編碼區(qū)(untranslated regions,UTR)、一個(gè)712bp的3’非編碼區(qū)和一個(gè)831bp的開(kāi)放閱讀框(open reading frame,ORF)。編碼276個(gè)氨基酸,3’UTR中具有典型的加尾信號(hào)AATAAA和Poly(A)尾。序列分析發(fā)現(xiàn)該氨基酸序列具有FAMe T的特征序列CF(CPAMD8/FAMe T)區(qū)域,因此可判斷獲得的c DNA序列是脊尾白蝦的FAMe T基因序列。運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(q RT-PCR)的方法分析了其在不同組織中、不同卵巢發(fā)育階段中的表達(dá)量變化,發(fā)現(xiàn)FAMe T在脊尾白蝦體內(nèi)各個(gè)組織中均有表達(dá),其中鰓中FAMe T基因相對(duì)表達(dá)量最高,大顎器次之;其他組織中FAMe T相對(duì)表達(dá)量較少,與鰓、大顎器中的相對(duì)表達(dá)量有顯著差異。這說(shuō)明FAMe T可能參與調(diào)控脊尾白蝦的多種生理功能。2.FAMe T基因在脊尾白蝦連續(xù)三次卵巢發(fā)育中的表達(dá)分析為了研究法尼酸甲基轉(zhuǎn)移酶(Farnesoic acid O-methyltransferase,FAMe T)在脊尾白蝦卵巢發(fā)育中的作用,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法分析連續(xù)三次繁殖過(guò)程中卵巢不同發(fā)育時(shí)期(I期到V期)大顎器、卵巢和肝胰腺中FAMe T基因的表達(dá)規(guī)律。結(jié)果表明:在卵巢發(fā)育周期內(nèi),FAMe T基因在大顎器、卵巢、肝胰腺中的表達(dá)量變化趨勢(shì)基本一致,從I期到IV期逐漸下降,到V期時(shí)表達(dá)上調(diào);在每個(gè)卵巢發(fā)育時(shí)期,FAMe T基因在大顎器中表達(dá)量最高,約為卵巢中表達(dá)量的20-30倍。該結(jié)果表明大顎器是合成FAMe T的主要組織,脊尾白蝦繁殖過(guò)程中FAMe T基因主要在卵巢發(fā)育前期表達(dá),可以導(dǎo)致MF的大量合成,促進(jìn)卵巢發(fā)育。3.Vg在中國(guó)對(duì)蝦與脊尾白蝦連續(xù)三次卵巢發(fā)育中的表達(dá)分析卵黃蛋白原基因在脊尾白蝦肝胰腺的表達(dá)趨勢(shì)為:在I到IV期逐漸上升,IV期達(dá)到最高值。抱卵后的V期降到最低。結(jié)果顯示,脊尾白蝦卵巢發(fā)育過(guò)程中,體內(nèi)卵黃蛋白原表達(dá)總量呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì),在排卵后的恢復(fù)期表達(dá)總量下降。通過(guò)左圖可以看出,在卵巢發(fā)育的各個(gè)時(shí)期,卵黃蛋白原基因主要在肝胰腺內(nèi)表達(dá),因此肝胰腺是合成卵黃蛋白原的主要部位。卵黃蛋白原在中國(guó)對(duì)蝦肝胰腺內(nèi)表達(dá)水平為:在卵巢發(fā)育I到IV期,卵黃蛋白原基因表達(dá)量逐漸上升,IV期時(shí)激增到最高值。V期時(shí)下降至最低值,為下一次卵巢發(fā)育的I期。結(jié)果顯示,中國(guó)對(duì)蝦卵巢發(fā)育前4個(gè)時(shí)期,體內(nèi)卵黃蛋白原表達(dá)總量呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì),在排卵后的恢復(fù)期表達(dá)總量下降。其中,在I到III期及V期,卵巢貢獻(xiàn)了較多的卵黃蛋白原,只有IV期時(shí),肝胰腺內(nèi)卵黃蛋白原表達(dá)量驟增,遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)卵巢內(nèi)表達(dá)量,成為IV期卵黃蛋白原合成的主要組織。4.脊尾白蝦與中國(guó)對(duì)蝦卵巢發(fā)育組織學(xué)觀察在卵巢發(fā)育周期中,脊尾白蝦與中國(guó)對(duì)蝦的I期和II期時(shí),發(fā)育的卵細(xì)胞在占卵巢細(xì)胞數(shù)比例上變化緩慢,而在發(fā)育到III期時(shí),中國(guó)對(duì)蝦卵巢內(nèi)成熟卵細(xì)胞數(shù)量急劇上升,占到卵巢細(xì)胞總數(shù)的70%左右,IV期達(dá)到最高,約為90%。相對(duì)地,脊尾白蝦卵巢在II期到IV期的發(fā)育過(guò)程中,成熟卵細(xì)胞數(shù)量增速比較穩(wěn)定,III期時(shí),成熟卵細(xì)胞僅占50%,IV期時(shí)迅速增至90%。對(duì)比在卵巢發(fā)育過(guò)程中,脊尾白蝦與中國(guó)對(duì)蝦在卵巢和肝胰腺的卵黃蛋白原表達(dá)總量,得知脊尾白蝦卵黃蛋白原在I至IV期逐漸上升,但是前3個(gè)時(shí)期增速較小,在IV期時(shí)急劇上升,達(dá)到最高。而中國(guó)對(duì)蝦的卵黃蛋白原在卵巢發(fā)育III期時(shí)達(dá)到較高值,與IV期表達(dá)量基本一致。通過(guò)比較脊尾白蝦與中國(guó)對(duì)蝦卵黃蛋白原基因表達(dá)量的變化趨勢(shì),與其對(duì)應(yīng)的卵巢發(fā)育基本一致。這也從另一方面證明了卵黃蛋白原基因?qū)β殉舶l(fā)育的調(diào)控作用。
【圖文】：

第一章 文獻(xiàn)綜述 第一章 文獻(xiàn)綜述尾白蝦屬于長(zhǎng)臂蝦科、白蝦屬，俗稱(chēng)白蝦、小白蝦和迎春蝦。主大陸沿岸和朝鮮半島西岸的淺海低鹽水域，以黃渤海產(chǎn)量最大[1的中小型經(jīng)濟(jì)蝦類(lèi)。成熟個(gè)體 5-9cm，肉質(zhì)細(xì)嫩、味道鮮美、營(yíng)喜愛(ài)的上乘海鮮品，市場(chǎng)售價(jià) 60-80 元/kg ，也是制作“金鉤海米”蝦具有環(huán)境適應(yīng)性廣、食性雜、繁殖周期短、抗病力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。、浙江、山東等省海水池塘養(yǎng)殖達(dá) 30 萬(wàn)畝，產(chǎn)量超過(guò) 4.5 萬(wàn)噸（

圖 2-1 脊尾白蝦 FAMeT 的 cDNA 核苷酸序列及其預(yù)測(cè)的氨基酸序列ATG 表示起始密碼子,*為終止密碼子，下劃線(xiàn)部分為兩個(gè) CF 區(qū)域，下劃虛線(xiàn)為加尾信號(hào)，推測(cè)的磷酸化位點(diǎn)用橢圓圈出。Fig. 2-1 Prediction of amino acid sequence according to the cDNA sequence2.3 編碼蛋白序列比對(duì)及進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建通過(guò) NCBI BLAST 對(duì)該序列編碼的氨基酸在進(jìn)行在線(xiàn)比對(duì)，發(fā)現(xiàn)該氨基酸序列與其他生物的 FAMeT 編碼的氨基酸序列的同源性都在 80%以上，其中與日本沼蝦（Macrobrachium nipponense）的同源性最高，高達(dá) 91%；與其它無(wú)脊椎動(dòng)物，如：日本仿長(zhǎng)額蝦（Pandalopsis japonica）、日本囊對(duì)蝦（Marsupenaeusjaponicus）、凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）、中國(guó)對(duì)蝦（Fenneropenaeuschinensis）、美洲海鰲蝦（Homarus americanus）、斑節(jié)對(duì)蝦（Penaeus monodon）的同源性分別為 83%、82%、82%、82%、80%、81%。
【學(xué)位授予單位】：大連海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S917.4

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 蔡難兒,林峰,陳本楠,柯亞夫,童保福;中國(guó)對(duì)蝦受精生物學(xué)的研究[J];海洋與湖沼;1997年03期

2 趙維信,李勝;克氏原螯蝦大顎器對(duì)卵巢發(fā)育的影響[J];水產(chǎn)學(xué)報(bào);1999年03期

3 梅肖樂(lè);倪金O，

本文編號(hào)：2711160