發(fā)布時間：2020-05-16 02:13

【摘要】：凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)以其適應(yīng)能力強(qiáng)、生長速度快、抗逆性強(qiáng)等優(yōu)勢,現(xiàn)已成為目前世界上養(yǎng)殖產(chǎn)量最高的對蝦品種。我國凡納濱對蝦苗種主要來源于進(jìn)口親蝦(SIS、PRIMO、正大等)、國內(nèi)自主選育新品種及二、三代自繁苗種,遺傳背景比較復(fù)雜。同時,凡納濱對蝦養(yǎng)殖受多種病原(如IHHNV、TSV、VP_(AHPND)、YHV、IMNV、WSSV等)影響,其中WSSV依然是危害最大的病原之一,其發(fā)病快,死亡率高,極大制約著凡納濱對蝦養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。結(jié)合目前國內(nèi)凡納濱對蝦的養(yǎng)殖現(xiàn)狀,本文以凡納濱對蝦引進(jìn)群體及國內(nèi)不同商業(yè)品牌苗種為研究材料,利用微衛(wèi)星分子標(biāo)記進(jìn)行家系親權(quán)鑒定、遺傳多樣性分析及抗WSSV性能差異分析,以期為凡納濱對蝦優(yōu)良品種選育工作提供基礎(chǔ)參考數(shù)據(jù)。本研究取得的主要結(jié)果如下:1.基于SSR標(biāo)記的凡納濱對蝦家系親權(quán)鑒定以凡納濱引進(jìn)群體構(gòu)建的36個家系子代與母本(共計396尾)為實(shí)驗材料,建立直接擴(kuò)增PCR技術(shù)進(jìn)行微衛(wèi)星分型,并進(jìn)行家系親權(quán)鑒定。結(jié)果顯示,8個微衛(wèi)星位點(diǎn)總等位基因數(shù)為108個,平均每個位點(diǎn)等位基因數(shù)為13.5個;平均PIC值為0.706,平均觀測雜合度(H_O)為0.657,平均期望雜合度(H_e)為0.731;第一親本累積排除率達(dá)99.49%,第二親本累積排除率達(dá)99.98%,雙親累積排除率為99.99%;模擬母本配對率為94.40%,36個家系360尾子代個體,配對成功的為308尾,實(shí)際母本配對率為85.56%,平均每個家系的10尾子代個體與候選母本配對成功個數(shù)為8.56個。結(jié)果表明,8個微衛(wèi)星位點(diǎn)具有較好的鑒定效率,直接擴(kuò)增PCR技術(shù)可初步應(yīng)用于凡納濱對蝦家系鑒定中,為凡納濱對蝦家系選育研究提供參考。2.國內(nèi)商業(yè)品牌凡納濱對蝦苗種遺傳多樣性分析以國內(nèi)6個商業(yè)品牌凡納濱對蝦群體(共計180尾個體)為研究對象,利用8對微衛(wèi)星引物進(jìn)行了遺傳多樣性和親緣關(guān)系分析。結(jié)果顯示,8個微衛(wèi)星位點(diǎn)的觀測雜合度(H_O)平均為0.486;期望雜合度(H_e)平均為0.745;87.5%(7/8)的位點(diǎn)平均多態(tài)信息含量(PIC)都在0.5以上;5個(62.5%)位點(diǎn)顯著偏離哈-溫平衡(P0.05);分子變異方差分析(AMOVA)發(fā)現(xiàn),僅有12%的遺傳變異來自于品牌間,24%來自于品牌內(nèi)個體間,其余64%的變異均來自于品牌內(nèi)部;根據(jù)所得F_(st)值分析,26.67%兩兩品牌間無分化,而73.33%兩兩品牌間出現(xiàn)中等程度分化;從UPGM A聚類圖中可以看出,6個品牌的凡納濱對蝦聚為兩個明顯的分支:廣州P和廣州Z聚為一支,東營M、黃驊R、海南Z、海南S聚為另一支。綜合實(shí)驗數(shù)據(jù),各品牌遺傳多樣性豐富程度從高到低分別為:黃驊R廣州Z廣州P海南Z東營M海南S。本實(shí)驗結(jié)果分析了當(dāng)前國內(nèi)部分商業(yè)苗種的遺傳背景,研究結(jié)果可為凡納濱對蝦基礎(chǔ)群體的構(gòu)建提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。3.不同凡納濱對蝦商業(yè)苗種對白斑綜合征病毒(WSSV)的抗性比較及抗WSSV相關(guān)SSR位點(diǎn)初步研究本實(shí)驗以國內(nèi)6個商業(yè)品牌凡納濱對蝦(1409尾)為材料,對其進(jìn)行了人工單尾、定量飼喂WSSV感染及同池測試,比較各個品牌凡納濱對蝦抗WSSV能力,并且將研究結(jié)果與第二部分研究結(jié)果進(jìn)行比較,分析遺傳多樣性與抗病力強(qiáng)弱的關(guān)系;同時,對實(shí)驗中存活時間差異顯著的個體進(jìn)行微衛(wèi)星標(biāo)記關(guān)聯(lián)分析,以期初步獲得抗WSSV相關(guān)SSR位點(diǎn)。實(shí)驗結(jié)果顯示:在WSSV感染測試實(shí)驗中,廣州P品牌凡納濱對蝦存活時間最長,極顯著高于其他品牌;相同時間內(nèi),其累積死亡率最低,死亡分布多集中于實(shí)驗的中后期,且在實(shí)驗結(jié)束后依舊有26尾對蝦存活;其余各品牌對蝦在實(shí)驗期內(nèi)全部死亡;東營M品牌與其他品牌間的實(shí)驗結(jié)果對比中存在明顯的差距,其呈現(xiàn)出的抗病能力最弱;其他四個品牌對蝦對抗WSSV抗性差異不顯著�？筗SSV能力各品牌對蝦由強(qiáng)到弱排列為:廣州P黃驊R廣州Z海南Z海南S東營M,通過對比第二部分實(shí)驗結(jié)果,可以看出遺傳多樣性豐富的凡納濱對蝦具有更好的抗病性能;8個微衛(wèi)星位點(diǎn)中有5個位點(diǎn)與抗WSSV能力存在中度關(guān)聯(lián),關(guān)聯(lián)的等位基因分別為:TuMXLv7.56-332、TuMXLv9.90-292、TuMXLv7.121-243、Lv12-127和M1103-388,本實(shí)驗并沒有獲得與抗病性高度關(guān)聯(lián)的微衛(wèi)星位點(diǎn),后續(xù)將繼續(xù)開展實(shí)驗,挖掘與抗病性高度相關(guān)的微衛(wèi)星位點(diǎn),輔助凡納濱對蝦抗WSSV選育。
【圖文】：

18圖 2-1 同一個樣本在 8 個位點(diǎn)中電泳信號Fig. 2-1 Electrophoresis signals in the same sample at 8 sites2.2 遺傳參數(shù)信息根據(jù) 8 個微衛(wèi)星位點(diǎn)的基因分型數(shù)據(jù)，利用 Cevurs3.0 軟件分析數(shù)據(jù)，母本和子代的遺傳多樣性參數(shù)如表 2-2 和圖 2-2 所示。所有樣本 8 個微衛(wèi)星位點(diǎn)平均每個位點(diǎn)等位基因數(shù)為 13.5，最大等位基因數(shù)為 27，平均多態(tài)信息含量(PIC)為 0.706，平均觀測雜合度為 0.657，平均期望雜合度為 0.731，M1103、TUMXLv9.103、Lv12、TUMXLv10.33、TUMXLv8.256 、TUMXLv7.56 這 5 個位點(diǎn)觀測雜合度小于期望雜合度，表現(xiàn)為雜合子的缺失。8 個位點(diǎn)全部偏離哈迪溫伯格平衡，，其中有 7 個位點(diǎn)極顯著偏離。8 個位點(diǎn)的平均無效等位基因為 0.063。從 8 個位點(diǎn)等位基因頻率結(jié)果

圖 3-2 6 個品牌凡納濱對蝦主成分分析Fig.3-2 Principal coordinate analysis ( PCA) for the six brands’s L. vannamei圖 3-3 根據(jù)遺傳一致度構(gòu)建的 UPGMA 樹Fig.3-3 UPGMAdendrogram based on genetic identity of 6 brands’ L. vannamei
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S968.22

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本文編號：2665992