【摘要】：魯氏耶爾森菌為耶爾森菌屬之一,該菌為冷水魚暴發(fā)細菌性敗血癥的常見致病菌,水產(chǎn)養(yǎng)殖中該菌引發(fā)魚類死亡率較高,給水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)造成了較嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。2013年在青海及北京房山冷水魚養(yǎng)殖基地從患病虹鱒魚肝臟和脾臟均分離到此種致病菌,患病虹鱒出現(xiàn)吻端紅腫、體表出血、有紅色囊腫包裹肛門等臨床病癥,內(nèi)部臟器官均有不同程度的病變,根據(jù)此癥狀初步判斷其為腸炎紅嘴病。從分離得到的致病中選取致病性較高的一株進行進一步試驗研究,該菌株命名為BH1206株。目前該病已成為冷水魚養(yǎng)殖的一種多發(fā)性疾病,因此,有必要對該疾病病原學(xué)及其防控進行深入研究,為虹鱒腸炎紅嘴病的防治提供理論基礎(chǔ)。本研究在無菌條件下,從患病未發(fā)現(xiàn)寄生蟲虹鱒魚的肝臟和脾臟采用胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基(TSA)分離并純化出一株命名為BH1206的致病性菌株。并用該菌對健康虹鱒進行人工感染試驗表明,BH1206株為患有腸炎紅嘴虹鱒的病原菌。對健康虹鱒魚進行階梯濃度致病菌的人工感染試驗,來確定該菌的半致死濃度(LD50);對患病虹鱒魚的肝臟、脾臟、腎臟等組織器官進行病理切片,并觀察病變部位和致病部位;對菌落形態(tài)觀察與并用生理生化試驗以及16S r RNA測序、構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,確定該致病的分類地位;控制不同的溫度、鹽度、p H三個培養(yǎng)因素來確定該菌的最適合生長條件;采用擴散法(K-B法)進行藥敏試驗,明確該菌對抗生素的敏感程度;采用注射免疫和浸泡免疫兩種方法對虹鱒魚進行滅活苗免疫,并通過攻毒實驗確定其免疫保護率。試驗結(jié)果如下:(1)從患病虹鱒魚肝臟和脾臟分離純化到一株高致病性菌并命名為BH1206株,通過普通生化試劑管、API 20E試劑盒、Biolog系統(tǒng)以及16Sr RNA分子測序鑒定,確定該菌為魯氏耶爾森菌。通過控制溫度、鹽度、p H三個方面明確BH1206株在溫度低于15℃及高于40℃環(huán)境下不生長,在28℃-30℃生長狀態(tài)最佳,在p H6-p H10范圍內(nèi)生長,在p H6.5-p H7.5范圍內(nèi)生長狀態(tài)最佳,Na Cl含量在3%內(nèi)生長并且Na Cl含量為0生長狀態(tài)最佳。(2)藥敏試驗結(jié)果表明BH1206菌株對利福平、多粘菌素、阿莫西林完全耐藥,對復(fù)方新諾明、慶大霉素、卡那霉素、羧芐青霉素、強力霉素、諾氟沙星、氨芐西林、青霉素、鏈霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、紅霉素、氧氟沙星、恩諾沙星、氯霉素、呋喃唑酮、新霉素均有不同程度的敏感,對氨芐西林、青霉素、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、新霉素和呋喃唑酮中度敏感;對紅霉素、利福平、阿莫西林、多粘菌素B不敏感。(3)攻毒試驗及數(shù)據(jù)分析得到BH1206的半致死濃度為6.46×107CFU/m L,病理組織切片中可以觀察到肝臟和脾臟細胞壞死,產(chǎn)生大量的炎癥細胞,腸道組織極度萎縮變形,腎臟也有明顯病變。(4)免疫試驗結(jié)果表,300℃d?后浸泡免疫組1×109cells/m L菌液的免疫保護率為75.0%,浸泡免疫組1×107cells/mL菌液的免疫保護率為71.16%,浸泡組對照組的免疫保護率為3.53%;注射免疫組1×109cells/m L菌液的免疫保護率為89.09%,注射免疫組1×107cells/mL菌液的免疫保護率為85.45%,該組對照組免疫保護率為5.45%,兩種免疫方式均提高了其免疫保護率,其中注射免疫組免疫保護力較高。試驗得到以下結(jié)論:從患病虹鱒魚病灶部位分離的菌株BH1206經(jīng)試驗分析確定為魯氏耶爾森菌,是虹鱒腸炎紅嘴病的病原菌。魯氏耶爾森菌BH1206甲醛滅活苗應(yīng)用腹腔注射進行免疫,達到一定得免疫效果,其免疫保護率達到89.09%。
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S943

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前7條

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本文編號：2649304