【摘要】：本文對(duì)刺參(Apostichopus japonicas)體內(nèi)無機(jī)硒及有機(jī)硒的分離提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化,建立了無機(jī)硒和有機(jī)硒的分離方法,進(jìn)而進(jìn)行了不同地區(qū)刺參群體不同組織內(nèi)硒形態(tài)的初步分析,并研究了不同濃度的外源硒對(duì)刺參的生物學(xué)影響,為研發(fā)一種新型綠色水產(chǎn)動(dòng)物免疫增強(qiáng)劑以及獲得天然安全的富含有機(jī)硒的刺參提供理論依據(jù)。主要研究?jī)?nèi)容包括:一、無機(jī)硒和有機(jī)硒的分離方法的建立與優(yōu)化硒具有提高人體免疫力,對(duì)有害物質(zhì)的解毒及抗衰老作用,是人體所需要的重要微量營(yíng)養(yǎng)元素之一。硒特殊的生理、生化功能不僅取決于其總濃度水平,而且同硒存在的化學(xué)形態(tài)以及不同化學(xué)形態(tài)下硒化物的濃度水平密切相關(guān),無機(jī)硒的毒性遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于有機(jī)硒,因此采用準(zhǔn)確有效的測(cè)定總硒及無機(jī)硒含量的方法非常重要。本文通過比較和實(shí)驗(yàn),采用HCl水浴提取法、Tris-HCl-甘油提取法、透析袋透析法及超純水超聲破碎法四種方法進(jìn)行有機(jī)硒和無機(jī)硒分離,確定了超純水超聲破碎法浸提無機(jī)硒的效果最好。首次通過改變超聲破碎的時(shí)間、設(shè)置不同的水浴時(shí)間及水浴溫度、改變環(huán)己烷萃取次數(shù)的技術(shù)參數(shù),確立了從刺參樣品中提取硒的最優(yōu)條件,建立和優(yōu)化了無機(jī)硒與有機(jī)硒的分離方法,并對(duì)測(cè)定分析方法進(jìn)行了方法檢出限計(jì)算及回收率、精密度實(shí)驗(yàn),在優(yōu)化的工作條件下,硒濃度為0~30μg/L,與熒光強(qiáng)度有良好的線性關(guān)系,線性方程為I=133.06*C+21.76,相關(guān)系數(shù)r=0.9998,最低檢出限為0.0005 ng/m L;樣品總硒的回收率達(dá)到95.43%~99.74%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.48%~5.26%,無機(jī)硒的回收率達(dá)到92.25%~95.36%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.73%~6.10%,以上結(jié)果表明,測(cè)定總硒及無機(jī)硒的方法準(zhǔn)確度高,重復(fù)性好,通過差減法得到的樣品的有機(jī)硒含量是真實(shí)可信的,同時(shí)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測(cè)定值在標(biāo)準(zhǔn)值允許誤差范圍內(nèi),說明該方法準(zhǔn)確、可靠,能夠滿足水產(chǎn)品中總硒的檢測(cè)要求。二、采用氫化物原子熒光法(HG-AFS)分析不同地區(qū)刺參總硒和無機(jī)硒的含量及分布規(guī)律人體內(nèi)的硒元素主要是通過吸收食物中的硒而獲得,并通過機(jī)體的代謝過程將其轉(zhuǎn)化為機(jī)體所能利用的形式。而水產(chǎn)品刺參體內(nèi)的硒含量較高,尤其是可被機(jī)體利用的有機(jī)硒的含量相當(dāng)豐富。但刺參體內(nèi)硒的研究還是比較薄弱,刺參各組織中有機(jī)硒和無機(jī)硒的比例如何、不同組織間和不同地區(qū)間硒含量有何差異以及硒對(duì)刺參的生物學(xué)作用等方面還缺乏相關(guān)研究。本研究旨在探明環(huán)境中硒對(duì)刺參體內(nèi)硒含量的影響及不同形態(tài)的硒在各組織中的富集代謝情況,為進(jìn)一步進(jìn)行分子生物學(xué)方面的研究提供參考。本文首次以黃渤海域大連、東營(yíng)、煙臺(tái)、青島、日照五個(gè)典型地區(qū)刺參群體為研究對(duì)象(取樣時(shí)間為2014年4月份),應(yīng)用氫化物原子熒光法對(duì)刺參體內(nèi)不同組織硒形態(tài)分布進(jìn)行了初步分析,并比較了不同地區(qū)間及不同組織間硒含量差異。結(jié)果顯示,呼吸樹為總硒和無機(jī)硒含量最高的組織,平均值為14.17±3.41mg/kg和6.19±3.83mg/kg,不同組織內(nèi)的總硒、無機(jī)硒含量變化呈現(xiàn)一致的規(guī)律,硒含量由高到低為:呼吸樹消化道肌肉內(nèi)壁外壁,同時(shí)刺參體壁和肌肉(食用部分)中有機(jī)硒比例在75.63%~89.41%之間(除東營(yíng)地區(qū)刺參群體肌肉組織的有機(jī)硒比例最低為53.64%);五個(gè)地區(qū)刺參群體同一組織內(nèi)的總硒及無機(jī)硒含量均有顯著性差異,東營(yíng)地區(qū)呼吸樹、消化道和肌肉中無機(jī)硒含量較高。三、不同水平的外源硒對(duì)刺參生物學(xué)指標(biāo)及硒含量的影響對(duì)于水產(chǎn)動(dòng)物而言,元素硒同樣具有多種重要的生理功能。刺參養(yǎng)殖過程中,大量用藥及濫用抗生素類藥物嚴(yán)重危害人類的健康,帶來細(xì)菌耐藥性及藥物殘留引起的環(huán)境污染等問題。研究表明適量添加外源硒可以增強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物的免疫功能,從而提高其抗病能力。本文開展了不同硒濃度的養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn),通過測(cè)定刺參成活率及相關(guān)酶的活性來研究硒對(duì)刺參的生物學(xué)影響,旨在探索硒在提高刺參的健康指標(biāo)的作用;此外,通過測(cè)定刺參不同組織的硒含量,以探討硒在體內(nèi)的分布及轉(zhuǎn)化問題,發(fā)現(xiàn)刺參體內(nèi)的硒含量變化規(guī)律,同時(shí)獲得高活性的有機(jī)硒,緩解缺硒現(xiàn)狀。本文以我國(guó)北方重要養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)品種刺參為研究對(duì)象,采取逐級(jí)放大的方法進(jìn)行在飼料中添加不同硒濃度梯度(0mg/kg、0.20mg/kg、0.40mg/kg、0.80mg/kg、1.60mg/kg、3.20mg/kg、6.40mg/kg)的富硒酵母的養(yǎng)殖試驗(yàn),養(yǎng)殖4W后測(cè)定刺參的生物學(xué)指標(biāo)及硒含量變化。結(jié)果顯示:添加適宜濃度硒可以提高刺參的成活率(最高達(dá)100%)及消化酶的活性,蛋白酶、淀粉酶活性最高分別為35.13U/mg prot、0.51U/mg prot,分別為對(duì)照組的2.45、2.07倍;硒對(duì)提高刺參的免疫酶活性有明顯的促進(jìn)作用,刺參各組織中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽掛氧化物酶(GSH-Px)、堿性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)分別在硒濃度為0.80~1.60mg/kg時(shí)達(dá)到最高,顯著高于其他各組;同時(shí)刺參各組織中的硒含量均有不同程度的上升,且有機(jī)硒的提高倍數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于無機(jī)硒的提高倍數(shù),說明富集到體內(nèi)的以有機(jī)硒為主。結(jié)果表明:當(dāng)硒濃度為0.80~1.60mg/kg時(shí),實(shí)驗(yàn)刺參的養(yǎng)殖效果最佳。
【圖文】：

圖 3-2 添加硒對(duì)刺參各組織 SOD 活性的影響Fig.3-2 Effects of dietary Se on SOD actiities of different tissues刺參外壁、內(nèi)壁、呼吸樹、消化道、肌肉及體液 SOD 活力分別見圖 3-2-（a）、3-2-（b）、3-2-（c）、3-2-（d）、3-2-（e）、3-2-（f）。各實(shí)驗(yàn)組刺參各組織中的 SOD

46圖 3-3 添加硒對(duì)刺參各組織 GSH-Px 活性的影響Fig.3-3 Effects of dietary Se on GSH-Px actiities of different tissues
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S968.9

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張曉燕,楊光圻;硒在體內(nèi)的中毒與解毒過程及其影響因素[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊(cè));1990年01期

2 羅志剛,唐美,歐陽春秀;飲水中鉛砷汞硒的斷續(xù)流動(dòng)氫化物發(fā)生原子熒光測(cè)定法[J];環(huán)境與健康雜志;2002年04期

3 王印庚,榮小軍,張春云,孫素鳳;養(yǎng)殖海參主要疾病及防治技術(shù)[J];海洋科學(xué);2005年03期

4 顧炎斌;宋文豪;姚椺遠(yuǎn);劉成龍;曾曉起;;東營(yíng)市河口區(qū)潮間帶大型底棲動(dòng)物群落結(jié)構(gòu)特征[J];海洋環(huán)境科學(xué);2013年05期

5 賀建忠;;硒中毒的研究進(jìn)展[J];飼料研究;2007年06期

6 侯江文，韓斌，董慶愛;天然富硒飼料對(duì)畜禽全血谷胱甘肽過氧化物酶活性的影響[J];陜西農(nóng)業(yè)科學(xué);1996年03期

7 孫漢文;馮波;;懸浮進(jìn)樣-氫化物發(fā)生原子熒光法用于面粉和富硒鹽中微量硒形態(tài)分析[J];食品科學(xué);2010年16期

8 萬敏,麥康森,馬洪明,徐瑋,劉付志國(guó);硒和維生素E對(duì)皺紋盤鮑血清抗氧化酶活力的影響[J];水生生物學(xué)報(bào);2004年05期

9 鄒大瓊,詹志春,張愛沅;測(cè)定硒過程中濕法分解樣品時(shí)防止硒損失的研究[J];分析測(cè)試通報(bào);1992年01期

10 張平;姜誠(chéng);;原子熒光光度法測(cè)定富硒大米中總硒含量的方法探討[J];微量元素與健康研究;2011年01期

，

本文編號(hào)：2649013