【摘要】：海參養(yǎng)殖業(yè)是我國特色海水養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)之一,主要分布在遼寧和山東沿海。海參養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展迅速,2010年全國海參養(yǎng)殖面積已達(dá)到萬公頃,產(chǎn)量達(dá)萬噸,產(chǎn)值接近億元。然而,相對于其迅速發(fā)展的規(guī)模,與海參養(yǎng)殖技術(shù)相關(guān)的基礎(chǔ)研究還比較滯后。因此,相關(guān)基礎(chǔ)研究越來越受到人們的重視。海參養(yǎng)殖環(huán)境中微生物有著十分重要的地位,大部分微生物以生產(chǎn)者或分解者作用參與水生生態(tài)系統(tǒng),部分寄生或共生型病原微生物會造成海參疾病爆發(fā),與海參的健康生長有著十分緊密的聯(lián)系。而在人工養(yǎng)殖過程中,不規(guī)范的投放餌料、藥物濫用等造成池底物質(zhì)堆積,往往會導(dǎo)致水體微生態(tài)平衡受到嚴(yán)重破壞,水質(zhì)惡化、缺氧等,造成海參免疫力下降或死亡;另外,水體富營養(yǎng)化也會造成水體優(yōu)勢青苔與養(yǎng)殖生物餌料藻類競爭,造成底質(zhì)腐敗等,進(jìn)而給海參養(yǎng)殖造成直接或間接的負(fù)面影響。因此,海參養(yǎng)殖環(huán)境的健康狀況與微生物群落的豐度、群落結(jié)構(gòu)有著緊密的聯(lián)系,探究養(yǎng)殖環(huán)境中微生物群落的組成與動態(tài)變化對于海參養(yǎng)殖業(yè)具有重要的理論和實踐意義�；谝陨媳尘�,本工作對海參養(yǎng)殖池塘中的微生物多樣性和年度動態(tài)變化進(jìn)行了研究,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測水體中浮游微生物豐度;通過高通量測序檢測真菌、古菌、細(xì)菌等不同類型的微生物多樣性及其豐度變化;利用連續(xù)流動分析儀對海參養(yǎng)殖水體的環(huán)境因子進(jìn)行測定;綜合群落結(jié)構(gòu)和環(huán)境因子尋找影響微生物群落變化的制約性因素。另外,針對青苔爆發(fā)頻繁的實際性問題,利用特異性引物設(shè)計和定量PCR技術(shù)相結(jié)合,探討檢測海參養(yǎng)殖池中青苔孢子的分子檢測方法,以期達(dá)到對青苔爆發(fā)的早期預(yù)警。本研究旨在為海參養(yǎng)殖池塘環(huán)境微生物生態(tài)調(diào)控模式的建立提供一定的基礎(chǔ)資料。主要研究結(jié)果如下:1海參養(yǎng)殖池浮游微生物的分布利用流式細(xì)胞儀技術(shù)研究了海參養(yǎng)殖池塘水體環(huán)境浮游微生物豐度變化及其與環(huán)境因子的關(guān)系。結(jié)果表明:(1)浮游微生物檢測出聚球藻、皮微級浮游植物、納微級浮游植物、隱藻、高低核酸異養(yǎng)細(xì)菌幾大類型,其中細(xì)菌數(shù)量級非常大,幾乎達(dá)到106/mL,而浮游植物的數(shù)量級較小,只有102/mL～103/mL。(2)浮游微生物一般都是3月開始生長,到6月份處于爆發(fā)頂峰期,9月份的時候已經(jīng)處于衰退期。(3)浮游微生物數(shù)量與環(huán)境中的溶解氧,鹽度、pH、可溶性總氮具有一定的相關(guān)關(guān)系,其中,溶解氧和pH對于浮游微生物的影響是最大的。2海參養(yǎng)殖池微生物多樣性分析水樣過濾膜提取DNA,并進(jìn)行高通量測序,再結(jié)合環(huán)境因子對比,研究海參養(yǎng)殖池微生物多樣性。結(jié)果表明:(1)細(xì)菌中變形菌門是重要組成部分,其中α-變形菌(Alphaproteobacteria)是主要類群。CCA分析結(jié)果顯示,原核生物類群受pH、亞硝態(tài)氮、硅、氨態(tài)氮、溫度控制。(2)古菌生物中,大部分樣品優(yōu)勢類群是DHVEG-6。而且大部分古菌如DHVEG6、MHVG、GroupC3、MBGB等都與各種形態(tài)可溶性氮元素有著顯著甚至是極顯著相關(guān)性。CCA分析的結(jié)果顯示出微生物群落受鹽度和硅控制。(3)真核微生物中泛植物界占據(jù)主要組成部分,而在泛植物界中綠藻門是最主要的。CCA結(jié)果顯示生物類群受鹽度、溫度、pH、溶解氧、亞硝態(tài)氮、氮磷比控制影響。3海參養(yǎng)殖池三種藻類孢子/配子qPCR檢測對海參養(yǎng)殖池三種爆發(fā)性青苔進(jìn)行了 18S和ITS區(qū)間測序,設(shè)計了以核糖體轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)為靶區(qū)域的種類特異性PCR引物,通過藻類和環(huán)境水樣DNA對照實驗檢驗其特異性和適用性。結(jié)果如下:(1)所得三種藻類ITS引物均具有一定種類或類群特異性。(2)三對引物在qPCR方法中呈現(xiàn)一定的靈敏度,三株藻類最低檢出限度:緣管石莼約1.66×10-4 ng/μL,200個ITS基因拷貝數(shù);未能鑒定到種約6.6×10-6ng/μL,200個ITS基因拷貝數(shù);萱藻1.66×104ng/μL,400個ITS基因拷貝數(shù)。(3)使用qPCR方法對煙臺海參養(yǎng)殖水體6個季度環(huán)境水樣中的萱藻孢子/配子進(jìn)行定量檢測,發(fā)現(xiàn)樣品中萱藻孢子/配子ITS拷貝數(shù)的季節(jié)變化與青苔爆發(fā)規(guī)律呈現(xiàn)較高的吻合度,萱藻爆發(fā)前期伴隨水體中孢子/配子量的增高,初步顯示藻類爆發(fā)可被qPCR方法預(yù)測。
【圖文】：

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ＨＨ邐ＳＳＣ－Ｈ逡逑圖２－１利用流式細(xì)胞儀分析鑒定表層水中主要浮游生物類群（＜２０Ｍｍ）逡逑Ｆｉｇ．邋２－１邋Ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ｍａｊｏｒ邋ｐｌａｎｋｔｏｎ邋ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ邋（＜２０邋｜ｉｍ）邋ｉｎ邋ｓｕｒｆａｃｅ邋ｗａｔｅｒｓ邋ｂｙ邋ｆｌｏｗ邋ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ邋ａｎａｌｙｓｉｓ．逡逑異養(yǎng)細(xì)菌檢測策略：第一步：利用紅光－綠光（ＦＬ３－ＦＬ１）可以將總細(xì)菌中具有色素逡逑的光能自養(yǎng)型細(xì)菌挑選出來（圖２－２－ｂ）。第二步：選中Ｃｈｌａ，右擊選中ｉｎｓｅｒｔ邋ｇａｔｅ將將含逡逑有Ｃｈｌａ的細(xì)胞去掉，在ＳＳＣ－ＦＬ１二維圖中將高核酸和低核酸類群區(qū)分開來（圖２－２－ｃ）。逡逑３、
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S968.9;S917.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2615196